+7 (495) 720-06-54
Пн-пт: с 9:00 до 21:00, сб-вс: 10:00-18:00
Мы принимаем он-лайн заказы 24 часа*
 

Анапа онлайн табло: Онлайн табло аэропорта Анапы Витязево вылета и прилета

0

онлайн табло вылетов на сегодня – TripTorg.ru

Вылет Прилет

Местное время:

Онлайн-табло вылетов Анапа. Здесь вы увидите все рейсы, задержки и отмены. Также подробную информацию о каждом рейсе — время вылета самолета, номер рейса, авиакомпания обслуживающая рейс, номер борта самолета.

ВремяРейсНаправлениеАвиакомпанияБортСтатус
среда, 13 апреля
18:405N524Санкт-Петербург (Пулково) Smartavia32NПо расписанию
четверг, 14 апреля
02:55SU6206Москва (Шереметьево) AeroflotSU9По расписанию
11:25SU1547Москва (Шереметьево) Aeroflot32AОтменен
12:55SU6202Санкт-Петербург (Пулково) Aeroflot319По расписанию
16:00S72106Москва (Домодедово) S7 Airlines32NПо расписанию
18:405N524Санкт-Петербург (Пулково) Smartavia738По расписанию
пятница, 15 апреля
02:55SU6206Москва (Шереметьево) AeroflotSU9По расписанию

Расписание рейсов

Время вылета рейса из аэропорта Анапа (Анапа) указано местное. Информация о времени вылета может отображаться с небольшой задержкой.

Внимание! Информацию по статусам рейсов (отменам и опозданиям) уточняйте по справочным телефонам или на сайте аэропорта Анапа.

Онлайн табло вылета аэропорта Анапа

Аэропорт Анапа онлайн табло вылета на сегодня и завтра показывает отправление прямых международных и внутренних рейсов из Витязево. Указано местное время (московское).

Вылет > Прилет

Информационное авиатабло отображает ближайшие регулярные и чартерные авиарейсы из всех терминалов за весь день. Расписание на онлайн табло – время вылета и аэропорт, номер рейса и авиакомпания, задержки и отмены в статусе выполнения рейса.

Погодные условия в аэропортах, технические неисправности самолетов вносят свои отклонения в график выполнения полетов. Собираясь в аэропорт, уточните статус ожидаемого рейса.

Справочная по рейсам

Иногда электронная информация обновляется с небольшой задержкой, поэтому в случае сомнений звоните в справочную по рейсам аэропорта  8 (800) 301-19-91 (из России бесплатно).

Официальный сайт

Официальный сайт аэропорта Анапа онлайн табло вылета также показывает онлайн расписание по маршрутам в Москву (Внуково, Домодедово, Шереметьево, Жуковский). Популярные российские авиакомпании, выполняющие рейсы из аэропорта: Аэрофлот, Победа, S7 Airlines (Сибирь), Уральские авиалинии, ЮТэйр.

Регистрация на рейс из Анапы

Регистрация пассажиров и оформление багажа различается для внутренних и международных авиарейсов.

  • для внутренних полетов регистрация начинается за 2 часа и заканчивается за 40 минут до времени отправления указанного в билете
  • для международных рейсов регистрация начинается, как правило, за 2 часа 30 минут и заканчивается за 40 минут до отправления, но иногда авиакомпании начинают и заканчивают регистрацию раньше. Точное время регистрации указано в билете.

Очень удобно пройти заранее онлайн регистрацию на рейс. После этого у вас будут гарантированы места в салоне самолета и в аэропорту вам останется только сдать багаж или сразу пройти на досмотр. При обычной регистрации в аэропорту нужно будет предъявить только ваш паспорт на который был оформлен электронный билет.

Трансфер в аэропорт Анапа

Если вы путешествуете большой компанией, с детьми или у вас много багажа будет выгодно и удобно заранее заказать трансфер. Можно заказать авто любой вместимости — от микро на двоих до 19-местного автобуса.

Вы прибудете без опозданий на регистрацию рейса, не нужно будет переживать за багаж, за его целостность.

Жд вокзал Анапа расписание поездов онлайн табло, прибытие

Железнодорожный вокзал Анапы обслуживает несколько десятков направлений. Зимой рейсов меньше, а в курортный период в Анапу приходят поезда практически со всей России, поэтому минимум дважды в год расписание меняется. Узнать расписание ж/д вокзала Анапы можно следующими способами:

Электронное табло в зале ожидания

Этот способ актуален для тех, кто в настоящий момент находится на вокзале. Найдите в зале ожидания электронное табло, чтобы узнать, когда прибудет или отправится нужный поезд. Расписание включает в себя маршруты, время прибытия/отбытия, прочую полезную информацию для пассажиров. Любое изменение в расписании мгновенно отражается на табло, поэтому посетители всегда в курсе всех сдвигов или задержек.

Сайты-агрегаторы

К сайтам-агрегаторам относятся специальные сервисы, которые предоставляют информацию по всем ж/д маршрутам России. Среди них наиболее популярны Яндекс.Расписания и Tutu.ru. Там можно найти билет по выбранному направлению на любую дату, узнать точный маршрут, его протяженность и все остановки на пути (включая время стоянок), а также цену билетов в разных типах вагонов. Расписание на таких сервисах демонстрируется в режиме онлайн.

Данные сервисы являются информационными, поэтому не несут ответственность за неточные данные. Чтобы получить свежую и точную информацию, необходимо пользоваться официальными источниками – электронным табло, справочной службой и сайтом РЖД.

Справочная служба

В Анапе на ж/д вокзале расписание поездов можно запросить в справочной службе. По поводу любых изменений сотрудников вокзала ставят в известность в первую очередь, поэтому всегда знают самое точное расписание. Обратиться в справочную можно не только лично, но и по телефону. Кроме расписания в бюро можно выяснить и другие вопросы, касательно обслуживания пассажиров: например, стоимость билетов в плацкарте или купе, наличие свободных мест, условия аренды ячейки камеры хранения и т. д.

Официальный сайт РЖД

Ж/д станция Анапы входит в маршрутную сеть Российских железных дорог, а значит, с ее расписанием можно ознакомиться на сайте РЖД. Для этого необходимо найти нужную станцию (www.anapa.dzvr.ru) и перейти во вкладку с расписанием.

 

Табло аэропорта Анапа (Витязево), дешевые авиабилеты

Табло аэропорта Анапа (Витязево).

Путешествовать самолетом из Анапы стало престижно и удобно: один-два часа в воздухе — и ты на месте. И стоимость перелета можно существенно удешевить, если вовремя участвовать в акциях и распродажах авиабилетов. Табло аэропорта Анапа (Витязево) отвечает всем современным требованиям по информативности и удобству для пассажиров.

Табло аэропорта Анапа встречает вас сразу при входе в здание аэровокзала и хорошо просматривается с разных направлений. На онлайн табло аэропорта отражается вся оперативная информация о всех авиарейсах и в графе «Прибытие» и в графе «Отправление».

Онлайн табло аэропорта Анапа включает в себя: номер рейса и авиакомпанию, точное время отправления или прибытия самолетов с учетом всех задержек, время начала регистрации на рейс, погодные условия в аэропорте прибытия, продолжительность авиаперелета, аэропорты промежуточных остановок и пересадок и статус рейса. Статус – это информация о том, что самолет был отправлен из аэропорта Анапа или на него проводится регистрация, или он задерживается, или вообще отменен.

Примеры статусных сообщений на табло прилета (Arrivals) аэропорта Анапа:

— Contact airline — свяжитесь с авиакомпанией

— Scheduled или On time — авиарейс выполняется по расписанию;
— Delayed — задержка рейса;
— Expected либо Estimated — расчетное время прибытия авиарейса;
— Landed — время прилета (посадки) самолета.

Возможны варианты языка отображения информации на табло аэропортов, но обычно это местный и международный (английский) языки.

А если вы только готовитесь к путешествию и авиабилеты у вас уже на руках, узнать о последних изменениях в авиаперелете можно на табло аэропорта Анапа у себя дома на компьютере или смартфоне. Это позволит не спешить в аэропорт при возникших задержках в расписании. Для этого надо зайти на сайт аэропорта Анапа в раздел «табло аэропорта» или на сайт w512.ru. У нас табло аэропорта Анапа представлено поисковой системой Яндекс и отражает самые последние изменения в расписании авиарейсов.

Свой самолет на табло аэропорта Анапа (в аэропорту) вы найдете по номеру рейса обычно в третьей колонке слева после даты и названия авиакомпании. Информация о задержках с вылетом или прилетом самолетов, а иногда и отменой авиарейсов на сайтах подсвечивается красным цветом.

Онлайн табло аэропорта Анапа подразделяется на 2 табло: о прилетающих самолетах «Табло прилета Анапа» и вылетающих самолетах «Табло вылета Анапа». Все рейсы на табло располагаются по времени и авиакомпании, поэтому найти нужный рейс не составляет труда.

Качество перелета из аэропорта Анапа определяется безопасностью пассажиров и точностью авиаперелета, которая, в свою очередь, зависит от погодных условий в аэропорту Анапа, аэропорту прилета и технических причин. Все это находит свое отражение на табло аэропорта Анапа.

Аэропорт Анапа для удобства пассажиров предлагает SMS или E-mail подписку на оповещения об изменениях в расписании аэропорта. Очень удобный сервис, позволяющий не волноваться об изменениях в статусе авиарейса.

Табло аэропорта Анапа в реальном времени информирует пассажиров о прибытии самолетов, всех задержках и изменениях в статусе авиарейсов.

Онлайн табло аэропорта Анапа (Витязево).

Расписания самолетов и поездов Анапы, все расписания Анапы

Анапа расписание пассажирских поездов

В Анапе расписание поездов бывает как летнее так и зимнее, так как Анапа город-курорт и тысячи отдыхающих в летний период стремятся попасть к нам на юг, меняется и интенсивность движения пассажирских поездов, поэтому с наступлением лета расписание поездов с каждым днем меняется , следите за изменениями в расписании.

Анапа расписание пассажирских поездов отправление

Не забудьте, что железнодорожный вокзал Анапы, для спокойного отдыха приезжих и местных жителей специально был спроектирован и построен за самим городом, вам следует заранее учесть, что при отправлении из Анапы на железнодорожный вокзал вам следует учесть возможные летние пробки на дорогах Анапы, поэтому советуем выехать из города не менее чем за час до отправления поезда с железнодорожного вокзала Анапы.

Анапа расписание пассажирских поездов прибытие

Прибывая на отдых в Анапу железнодорожным транспортом вам следует учесть, что некоторые из прибывающих поездов в Анапу приходят в Анапу даже поздно ночью к примеру в 3 часа ночи и вы можете столкнуться с трудностями — как ночью добраться в Анапу ? Так как по расписанию автобусов самый ранний сможет вас доставить в Анапу не раньше 6 часов утра, а расстояние до самой Анапы не мене трех километров пути и передвигаться до города пешком ночью не имеет смысла с точки зрения безопасности. У вас есть выбор воспользоваться не дешевой ночной услугой такси, либо переждать до утра в одном из комфортных мест ожидания на железнодорожном вокзале Анапы.

Как добраться в Анапу на поезде ? Куда приходят поезда в Анапу ?

В этом вопросе вам надо учесть то, что в Анапе два железнодорожных вокзала, вернее сказать так, что билеты, которые вам продают на Анапу в месте конечной высадке указана не сама Анапа, а станция Тоннельная, которая находится в 30 километрах от самой Анапы почти у города Новороссийска, что не особо удобно для отдыхающих желающих провести свой отдых и лечение в Анапе. Но с некоторых городов России покупая билеты на Анапу продают только до станции Тоннельная ,так как прямых поездов в Анапу нет. Из станции Тоннельная по расписанию выполняют свои рейсы автобусы и маршрутные такси, некоторые из которых без всяких пересадок могут вас напрямую доставить к санаториям и пансионатам Анапы.

Анапа точное расписание поездов.прибытие смотрим на табло 2016-2017 год фото ниже

Анапа расписание отправления поездов 2016 -2018 год фото ниже

расписание прибытия пассажирских поездов на станцию Тоннельная фото ниже

расписание отправления пассажирских поездов со станции Тоннельная 2018 фото ниже

В город-курорт Анапу в летнее время прибывает до 30 поездов в сутки, на железнодорожном вокзале Анапы организовано все для комфортного перемещения прибывших людей на отдых в Анапу, с вокзала в город идут маршрутные такси и автобусы так же построены под расписание прибывающих поездов, вы так же можете воспользоваться официальными фирмами такси, которые в летний период так же работают круглосуточно. Поезда следующие в Анапу с группами детей в пионерские лагеря города встречаются специальными автобусами и для безопасности в сопровождении ГИБДД.

д. Вы всегда сможете уточнить расписание поездов следующих в Анапу из — Москвы, Екатеринбурга, Санкт-Петербурга ,Тюмени, Новосибирска, Омска,Томска,Череповца,Красноярска,Самары,Тамбова,Казани,Владикавказа,Архангельска, Уфа, Мурманск, Н.Тагил, Ижевск, Пермь, если вы ищете все эти расписания и телефоны железнодорожного вокзала Анапы, Автовокзала Анапы,морского порта Анапы, то вам будет полезна вся эта информация, не забывайте, что если вы звоните по междугородней связи, то вам надо сперва набрать код Анапы , а затем номер

код Анапы 8- 861- 33

Анапский автовокзал телефон 5- 68- 97

железнодорожный вокзал Анапы телефон 3- 31- 86

авиалинии Анапы телефон 3- 32 -18

морской порт Анапы телефон 4 -54- 57

железнодорожные кассы в Анапе телефон 5- 08 -32

авиа кассы в Анапе телефон 5- 08- 64

2 .Расписание поездов в Анапе

3.Расписание поездов Тоннельная

4. Расписания Аэропорта Анапы

аэропорт Анапа онлайн табло вылета и прилета на сегодня на декабрь месяц , как видно на табло рейсов на курорт выполняется не много

5 Расписание автовокзала Анапы

Расписание аэропорта Анапы. Анапский международный аэропорт ежедневно принимает самолеты таких авиакомпаний, как Аэрофлот. Сибирь, Транс Аэро, Авиационные линии Кубани, после реконструкции аэропорта появилась возможность принимать самолеты различных классов, в том числе крупных международных перевозчиков. Анапский аэропорт располагает современной инфраструктурой, комфортными залами ожидания, и пунктами досмотра пассажиров, развита и транспортная инфраструктура — поставлена работа маршрутных такси и рейсовых автобусов, желающие могут воспользоваться офицальной фирмой такси, которая с легкость вас доставит в Анапу, Витязево или Джемете.

Телефоны Анапского аэропорта

справочная служба Анапского аэропорта телефон 9- 45- 09

таможня Анапского Аэропорта телефон 3- 31- 51

миграционная служба телефон 9- 46- 24

камера хранения Анапского аэропорта телефон 9- 42 -58

vip зал Анапского аэропорта телефон 3- 34- 86

Расписание аэропорта Анапа -ОТПРАВЛЕНИЕ самолетов, Внимание указано Московское время

РЕЙСЫОТПРАВЛЕНИЕПРИБЫТИЕВРЕМЯ В ПУТИДНИ КУРСИРОВАНИЯ

ut458 Анапа-Москва ,Ютэйр

07-15 Анапа 09-20 Внуково 2ч.5мин ежедневно с 1июня по 30сент
s71126 Анапа -Москва,airlines 10-30 Анапа 12-45 Домодедово 2ч.15мин ежедн с 20июня по 25 сент
su1141 Анапа -Москва,Аэрофлот 12-25 Анапа 14-25 Шереметьево-Д 2ч. ежедневно с 28октября по 5 янв
su702 Анапа -Москва, Аэрофлот 12-25 Анапа 14-25 Шереметьево-д 2ч. ежедневно по 23 марта
su702 Анапа -Москва 12-25 Анапа 14-25 Шереметьево-д 2ч. только 4, 24марта
su1141 Анапа-Москва Аэрофлот 12-30 14-35 Шереметьево -д 2ч.5мин ежедневно с 25 марта по 27 октября
u6144 Анапа -Москва Уральские авиалинии 12-55 Анапа 15-00 Домодедово 2ч.5мин пн,чет с 4 июня по 27 сент
un144 Анапа -Москва Трансаэро 13-55 Анапа 15-30 Домодедово 1ч.55мин вторник,вс с 3июня по 7 октября
s71122 Анапа -Москва 13-35 Анапа 15-50 Домодедово 2ч.15мин ежедневно с 6июня по 25 сент
Gw172 Анапа -Москва, Кубань 13-40 Анапа 15-55 Внуково 2ч.15мин пн,чт,пт с 28мая по 14 сент
ut460 Анапа-Москва, Ютэйр 15-25 Анапа 17-40 Внуково 2ч.15мин ежедневно с 31 мая по 27 октября
s71124 Анапа -Москва s7airlines 16-50 Анапа 19-10 Домодедово 2ч.20мин ежедневно по 23 марта
s71124 Анапа -Москва s7airlines 16-50 Анапа 19-10 Домодедово 2ч.20мин только 24 марта
s71124 Анапа-Москва s7airlines 16-50 Анапа 19-10 Домодедова 2ч.20мин только 4 марта
s71124 Анапа-Москва s7airlines 17-15 Анапа 19-30 2ч.15мин ежедневно с25 марта по 27 октября, кроме 31.03
s71124 Анапа-Москва s7airlines 17-15 Анапа 19-30 2ч.15мин только 31марта
su1143 Анапа-Москва Аэрофлот 18-20 Анапа 20-25 Шереметьево-д 2ч.5мин ежедневно с 1июня по 27 октября
su1143 Анапа-Москва Аэрофлот 19-05 Анапа 21-05 Шереметьево -д 2ч. ежедневно с 28 октября по 5янв
un144 Анапа-Москва Трансаэро 19-15 Анапа 21-10 Домодедово 1ч.55мин пн,ср, с 6 июня по 12 сентября
un144 Анапа -Москва Трансаэро 19-55 Анапа 21-55 Домодедово 2ч. суб, с 2 июня по 8сентября
un144 Анапа -Москва Трансаэро 19-55 Анапа 22-10 домод 2ч.15мин пт, с 1июня по 5 октября
yc342 Анапа- Москва. Ямал 21-30 Анапа 23-30 Домодедово 2ч. пн,вс, с 27мая по 10сент

Расписание рейсов Аэропорта Анапы -прибытие , внимание указанное время -Московское.

рейсыотправлениеприбытиевремя в путидни курсирования
s71125 Москва-Анапа s7airlines 07-30 Домодедово 09-45 Анапа 2ч.15мин ежедневно с 20 июня по 25 сент
YC341 Москва -Анапа, Ямал09-10 Домодедово 11-00 Анапа 2ч. пн,пт, с 25мая по 10сент
SU1140 Москва -Анапа ,Аэрофлот 09-10 Шереметьево 11-25 Анапа 2ч.15мин ежедневно с 25 марта по 27октября
SU1140 Москва-Анапа,Аэрофлот 09-20 Шереметьево 11-35 Анапа 2ч.15мин ежедневно с 28октября по 5янв
SU701 Москва -Анапа,Аэрофлот 09-20 Шереметьево 11-35 Анапа 2ч.15мин только4,24марта
SU701 Москва -Анапа Аэрофлот 09-20 Шереметьево д 11-35 Анапа 2ч.15минежедневно по 23 мар
U6143 Москва-Анапа,Уральские Авиалинии 09-45 Домодедово 11-45 Анапа 2ч. пн,чт, с 4 июня по 27сент
GW171 Москва-Анапа,Кубань 10-10 Внуково 12-25 Анапа 2ч.15мин пн,чт,пт, с 28мая по 14 сент
S71121 Москва-Анапа,S7AIRLINES 10-35 Домодедово 12-50 Анапа 2ч.15мин ежедневно с 6 июня по 25 сент
UN143 Москва-Анапа, Трансаэро 10-35 Домодедово 12-35 Анапа 2ч. вт,вс, с 3 июня по 7 октября
UT459 Москва-Анапа,Ютэйр 11-45 Внуково 13-55 Анапа 2ч.10мин ежедневно с 31мая по 27октября
S71123 Москва-Анапа,S7Airlines 13-55 Домодедово 16-05 Анапа 2ч.10мин ежедневно по 23 мар
S71123 Москва-Анапа,S7Airlines 13-55 Домодедово 16-05 Анапа 2ч.10мин только 4 мар
S71123 Москва -Анапа,S7Airlines 13-55 Домодедово 16-05 Анапа2ч.10мин только 24мар
S71123 Москва- Анапа,S7Airlines 14-15 Домодедово 16-30 Анапа2ч.15мин ежедневно с 25 мар по 27 окт кроме 31.03
S71123 Москва -Анапа,S7Airlines 14-15 Домодедово 16-30 Анапа 2ч.15мин только 31мар
SU1142 Москва-Анапа,Аэрофлот 15-15 Шереметьево 17-20 Анапа 2ч.5мин ежедневно с 1июня по 27октября
SU1142 Москва-Анапа,Аэрофлот 16-00 Шереметьево-д 18-15 Анапа 2ч.15мин ежедневно с 28 октября по 5 янв
UN143 Москва-Анапа,Трансаэро 16-10 Домодедово 18-15 Анапа 2ч.5мин пн,ср, с 6июня по 12 сент
UN143 Москва -Анапа, Трансаэро 16-50 Домодедово 18-55 Анапа 2ч. пт,с 1июня по 5октября
UN143 Москва-Анапа, Трансаэро 17-00 Домодедово 18-55 Анапа1ч.55мин сб, с 2 июня по 8 сент
UT457 Москва — Анапа, Ютэйр 19-30 Внуково 21-40 Анапа 2ч.10мин ежедневно с 31мая по 29сент
S71123 15-45

Летнее Расписание движения поездов в Анапе — станция Анапа июнь 2011 прибытие , отправление .

номер поездасообщениеприб отпр дни следования
129 Красноярск 05-40 13-15 3,5,7,10,12,14,17,19,21,24,26,28,
203 Москва 13-05 16-40 2,4,6,21,22,25,26,27,28,29,30
205 Иркутск 03-00 10-205,9,12,16,19,23,26,30
211 Томск 06-20 13-15 1,
219 Северобайкальск 05-40 13-15 8,15,22,29,
223 Орск 03-00 10-25 6,13,20,27,
233 Самара 14-15 23-45 3,5,7,9,11,13.15,17,19,21,23,25,27,29,
235 Тында 05-40 13-15 2,11,18,25,
237 Москва 15-00 22-00
243 Новокузнецк 03-00 10-25 3,7,10,14,17,21,24,28,
247 Москва 05-10 09-10 с1 по 30 каждый день
257 Томск 04-55 11-45 5,7,9,11,13,15,17,19,21,23,25,27,29
259 С- Петербург 14-10 22-55 с 1 по 30 каждый день
349 Москва 11-15 19-42 с 1 по 30 каждый день
389 Минск 11-05 17-30 3,7,11,15,19,23,27,
413 Тамбов 14-55 23-45 26,28,30,
423 Курган 03-00 10-25 1,8,15,22,29,
560/
429
Екатеринбург 19-40 00-55 12п,13-0,21п,22-о,
429 Н-Уренгой
Тюмень
19-40 00-55 16-п,17-о,
518/
437
Архангельск 06-10 17-00 2,7,8,11,14,17,20,23,27,
439 Кострома 06-10 17-00 15,21,29,
443 Череповец 06-10 17-00 12,18,24,30,
457 Челябинск 03-00 10-25 4,11,18,25,
479 Екатеринбург 08-55 15-40 2,4-поезд556,5,7,9,11,13,15,17,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,
519 Казань 19-40 00-55 14,28,
553 С-Петербург 20-20 01-20 3-п,4,6,8,10,13,14,15,20,21,22,26,27,28,
556 Екатеринбург
558 Лабытнанги/
Микуль
06-10 17-00 6,
560/
429
Н.Уренгой/
Тюмень
19-40 00-55 6-п,7-о,
563 Кемерово 09-05 16-30 5,
567 Смоленск 11-05 17-30 4,8,12,16,20,24,28,
607 Владикавказ 10-23 19-00 24,26,28,30,

Летнее расписание движение автобусов от Автовокзала Анапа, рейсы формирующиеся в Анапе.

вы можете посмотреть свежее расписание 2018 на Краснодар — Анапа туда и обратно на автобусы

наименование рейсалетнее расписание время отправления из Анапывремя прибытия в конечный пункт
Апшеронск 16-40 0-15
Армавир 6-30, 14-01 13-49, 22-20
Астрахань сезон 9-00 5-29
Варениковская,ч-з Гостагай 14-15 15-21
Варениковская,ч-з Джигинку 6-20 7-06, 7-44, 11-05
Владикавказ сезон
Волна 7-00,12-30 9-25, 15-35
Геленджик 10-50, 18-22 12-55, 21-00
Горячий ключ сезон 14-40 20-11
Кисловодск 19-00 7-42
Краснодар,ч-з Славянск 5-05,7-40,9-20,13-00,15-00,16-20, 8-30,11-10,12-45,16-30,18-30,21-23,
Краснодар,ч-з Абинск 5-30,7-00,7-30,8-30,9-30,10-30, 8-57,10-57,11-27,
Краснодар
Кропоткин 17-30, 0-47,
Крымск,ч-з Варениковскую 17-40 19-45
Крымск, ч-з Танельную сезон 9-20, 18-02, 11-00,20-02
Ленинградская 11-00, 21-40
Мостовской 12-00 21-40
Новоросийск 07-00,07-20,07-40,18-00,18-25,18-55,19-25 6-05,6-40,7-10,7-25
Полтавская 16-03, 19-05,
Порт-Кавказ 6-30,13-00, 8-55,15-20,
Пятигорск сезон 19-20 6-04,
Ростов 10-00 19-20
Светлоград сезон 19-50 7-32,
Славянск на Кубани сезон 17-30 19-52
Сочи 9-30, 19-47,
Ставрополь,ч-з Майкоп 9-10, 21-13
Ставрополь сезон 19-50,21-00 7-33
Темрюк 6-40,9-40,14-20,17-05, 8-10,11-11,15-30,18-34.
Тихорецк
Туапсе
Черкесск
Шахты
Тоннельная

Расписание движения поездов по станции Тоннельная — прибытие поездов — Лето 2011

номер поездаМаршрут следования Прибытиестоянка отправлениедни следования
29 Москва-Новороссийск 9-00 15мин 9-15 ежедневно
43 С.Петербург -Новороссийск 6-07 17 6-24 с 5.09 по 31.10 по не четным и 2,4.11:при двух нечет28,30,1
115 С.петербург-Адлер-Новороссийск 15-09 15 15-24
125 Москва-Новороссийск 6-22 17 6-39 с 30.05 ежедневно
227 С.Петербург — Новороссийск 9-23 17 9-40 25,27,29,31/05; 2,4/06;
c07/06 по 25/06 по нечет,
с 27/06 по 02/09 ежедневно
-кроме14,16/07, 2,3,4,12,23,24,27,28/08
5,7,10,13,15,17,20,22,25,27,30/09;2/10
25,27/05-2012
285 Мурманск-Новороссийск16-45 26 17-11 2/06; c4/06 по 6/10 t ежедневно
311 Воркута -Новороссийск 21-45 19 22-04 2/06; c 5/06 по 5/11 по нечетным
с 29/12 по 17/01- 2012 по нечет
с 23/05-2012 по нечет;
при2-х нечетн 29,31,2,5,7
317 Саратов -Новороссийск 4-50 15 5-05 по не четн;
при 2-х нечетн 29,31,3,5,
при 2-х нечетн29/02 и 1/03 29,3,5,
335 Н-Тагил — Новороссийск, без захода на ст.Казань
с 18/10 через Казань
8-29 15 8-44 1,3/06; c 6/06 по четн
при 2-х нечетн 30,1,3,6
при 2-х нечет 29/02 и 1/03 28,1,3,6
377 Москва -Новороссийск 8-43 18 9-01 1,3/06; c 6/06 по не четн
при 2-х не четн 28,30,1,3,6
при 2-х не четн 29/02 и 1/03 1,3,5,8
405 Тамбов-Воронеж-Новороссийск 10-41 17 10-58 5/06; c 9/09 по 5/09 по нечетн
при 2-х не четн 29,31,3
407 Ижевск-Новороссийск 4-50 15 5-05 с 6/06 по 18/09 по четн
при 2-х нечетн 30,1,4,6
409 Казань -Новороссийск 17-27 33 18-00 с 4/06 по 8/10 по четн
при 2-х нечетн 30,1,4
421 Екатеринбург -Новороссийск,без
захода на ст.Казань
8-29 15 8-44 с 15/06 по 17/09 по не четн
при двух не четн 29,31,,2,5
427 Сосногорск -Сыктывкар-Новороссийск 6-50 21 7-11 5,10,13,16,19,22,28/06
2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,/07
1,4,7,10,13,16,20,22,26,28,/08
1,3,7,9,13,/09
453 Уфа-Самара- Новороссийск тех стоянка 18 10-23 1/06; c 4/06 по 4/10 по четным
при 2-х не четных 28,30,1,4,6,
455 Челябинск -Новороссийск тех стоянка 18 10-23 2/06; c 5/06 по 31/08 по нечетным и 2/09
при 2-х нечетных 29,31,2, 5
471 Н- Новгород — Новороссийск 10-41 1710-58 1/06; с 4/06 по 28 /09 по четным
при 2-х нечетных 28,30,1,4
473 Архангельск -Новороссийск 21-45 19 22-04 1,3/06; с 6/06 по 4/10 по четным
8,14,20,26/10; 1/11;
28,30/05 — 2012
при 2-х не четных 30,1,3,6,8
481 Москва-Новороссийск 5-52 18 6-10 2,3/06; c 6/06 по 24/06 по четным
с 26/06 по 4/10 ежедневно
кроме25/06; 15,17/07; 9/08
493 Пермь -Новороссийск 17-27 33 18-00 с 31/05 по 25/09 по не четным
при 2-х нечетных 29,31,3
581 Москва -Новороссийск 5-52 18 6-10 1,4,23,25/06; 15,17/07; 9/08
677 Владикавказ -Новороссийск
по 7/09 -2011
8-43
10-14
18
24
9-01
10-38
31/05 ; 2/06; c 5/06 по не четным
при 2-х не четных29,31,3,5
при 2-х нечетн29/02 и 1/03 27,29,2,5
6753 Краснодар-Новороссийск 5-44 1 5-45 ежедневно
6755 Краснодар -Новороссийск 11-15 10 11-25 ежедневно
6757 Краснодар — Новороссийск 17-47 1 17-48 ежедневно
6759 Краснодар — Новороссийск 20-23 3 20-26 ежедневно

Посмотреть предложения отдыха Анапа Витязево Джемете

Автовокзал Анапа расписание автобусов на сегодня, цены

Автовокзал Анапы обслуживает разное число рейсов на протяжении года. Из-за того, что Анапа является городом-курортом, в летнее время сюда приезжает огромное число отдыхающих, поэтому в курортный период увеличивается общее число рейсов, открываются дополнительные автобусные маршруты из дальних регионов России. Все это, несомненно, сказывается на расписании. Поэтому крайне важно всегда иметь под рукой верное расписание автобусов. А узнать его можно следующими способами:

Информационное табло вокзала

Расписание проще всего посмотреть на информационном табло. Здесь Вы найдете информацию по всем автобусным маршрутам на текущий день, а также ближайшие даты: время отправки, направление и пр. Также здесь оперативно дублируются все изменения. Пассажиры, находящиеся в зале ожидания, первыми узнают обо всех сдвигах, задержках и отменах рейсов.

Справочная служба

Всю информацию о рейсах и сопутствующих услугах автовокзала (расписание, цена, график работы и пр.) можно узнать в справочном бюро. Обратиться к сотрудникам можно не только лично — окно находится в кассовом зале — но и по телефону +7 (86133) 5 68 97. Работники вокзала всегда первыми узнают обо всех изменениях, а значит, могут своевременно Вас проинформировать. Также здесь Вы узнаете о ценах на билеты, наличии свободных мест в автобусе и многом другом.

Помните, что в справочной службе Вы можете только получить нужную информацию, но не саму услугу. Для этого обращайтесь в соответствующие отделы, например, билетные кассы.

Сайт вокзала

На сегодняшний день посмотреть расписание автовокзала г. Анапы на сайте нельзя, т. к. официальная страница этого вокзала отсутствует. Однако ее роль выполняет сайт АО «Кубаньпассажиравтосервис» (www.kpas.ru), компании, которая ответственна за автобусное сопровождение всего Краснодарского края. Здесь в разделе «Расписание и тарифы» Вы можете указать направление и посмотреть доступные рейсы и цены на билеты.

Яндекс.Расписания

Расписание автобусов публикуется на сайте-агрегаторе Яндекс.Расписания. Это онлайн-сервис, где Вы в реальном времени можете получить всю информацию об автобусных маршрутах любого вокзала: расписание, цены, маршруты и многое другое.

Витязево расписание. Аэропорт Анапы

Международный аэропорт Анапа Витязево расположен в 15 км к северо-западу от центра города и в 5 км от железнодорожного вокзала. Витязево — крупный авиаузел на юге России федерального значения. Аэропорт Анапы обслуживает один из крупнейших детских курортов юга России и принимает не только гостей города, но и тех, кто приезжает в Новороссийск и Темрюк, а также в близлежащие поселки. Аэропорт получил свое название по деревне Витязево, расположенной в 4 км от него.

Как добраться в аэропорт Витязево из Анапы

На такси из Анапы в аэропорт Витязево

В аэропорт курсирует маршрутное такси №113, это самый популярный вид транспорта для тех, кому нужно добраться в аэропорт. Маршрутки отправляются с Анапского автовокзала, расположенного по адресу: г. Анапа, ул. Красноармейская, 11.

Расписание (лето 2019):

  • От автовокзала до аэропорта: с 7:30 до 21:30, кроме 20:30
  • Из аэропорта на автовокзал: с 08:00 до 22:00, кроме 21:00.

Интервал движения в курортный сезон (до 30 сентября) — один час. Время в пути может составлять от 40 минут до 1 часа, в зависимости от пробок.

На такси

На территории аэровокзального комплекса работает официальное такси, центр управления которым находится в зале выдачи багажа. Вы также можете воспользоваться другими службами такси (агрегаторами).

В зависимости от выбранного варианта стоимость поездки составит:

  • В Витязево — 490-500 руб.
  • На Джемете и Пионерский проспект — от 490 до 600 рублей
  • Анапа (центр города) — от 490 до 700 рублей
  • Порт Кавказ — от 1800 до 2500 руб.

Время в пути от Анапы до аэропорта составит от 15 минут до часа, в зависимости от наличия пробок.

Онлайн табло аэропорта Анапа

Парковка в аэропорту Анапы


На территории аэровокзального комплекса есть несколько парковок:

  • Бесплатно для 40 автомобилей, расположенных перед входом в аэропорт
  • Ежедневная парковка, тариф — 600 руб./сутки
  • Почасовая парковка на 200 автомобилей, стоимость 200 руб./час, первые 15 минут бесплатно

Кафе и рестораны

Для гостей Анапы работает кофейня на привокзальной площади.Кроме того, в терминалах есть несколько кафе и ресторанов, подходящих как для взрослых, так и для детей. В Терминале 1 на первом этаже расположены:

  • Столовая находится в общем зале вылета. Здесь вам предложат простые, но сытные блюда. Цены в этом заведении общепита демократичные, есть детское меню. Вы можете заказать блюдо, находясь прямо в детской комнате
  • «Beer & Grill bar», в меню — пиво и мясные закуски
  • Pinocchio Bar & Pizza, в меню — салаты, пицца, паста, напитки и пиво
  • Кафе «Ла Веранда», в меню — чай ​​и кофе, вино, закуски и десерты
  • Кофейня «Кофе.ОК»
  • «Русские пельмени» — вареники, вареники, первые и вторые блюда, десерты и напитки, алкоголь
  • Кофейня «Веселый день»

Описание

Аэровокзальный комплекс включает в себя два терминала:

  • Терминал 1 — для обслуживания пассажиров внутренних рейсов
  • Терминал 2 — для гостей международных авиалиний.

Строительство Терминала 1 аэропорта Анапа велось с марта 2016 года по июль 2017 года.Новое одноэтажное здание аэровокзала построено в стиле хай-тек. Его площадь составляет почти 12 тысяч квадратных метров. метров. Имеется 13 стоек регистрации, а также терминалы самообслуживания. Пропускная способность нового терминала составляет 600 человек в час.

В Анапу летает много детей, в связи с чем существуют специальные зоны обслуживания организованных групп школьников, отдыхающих в детских лагерях, что позволяет минимизировать время ожидания в аэропорту.

Если вы путешествуете с детьми, вы можете воспользоваться очень удобной комнатой матери и ребенка.Здесь есть игровая и спальня, а также зона для кормления, пеленальный столик, кулер с водой и микроволновая печь.

В аэропорту Анапы работают 14 авиакомпаний, выполняющих рейсы в города России, а также в ближнее и дальнее зарубежье.

Общая площадь аэропорта Анапа (оба терминала) составляет 16 500 кв.м, а общая пропускная способность (на внутренних и международных линиях) увеличена до 1100 пассажиров в час. В 2018 году пассажиропоток терминала составил более 1,5 млн человек.

История

История аэродрома началась в 1934 году, когда он располагался восточнее города в районе Высокого Берега. До начала 1960-х годов полеты выполнялись спорадически. В 1960 году начались регулярные рейсы в Краснодар, Новороссийск, Геленджик и другие приморские города на самолетах Ан-2 и Морава.

С развитием курорта расширяется маршрутная сеть авиаузла. Из Анапы стали выполняться рейсы в Донецк, Харьков и Москву, Керчь и Сухуми.Увеличивается пассажиропоток, в связи с чем аэродром перенесен в район Витязево на место полевого аэродрома Черноморского флота СССР. Это позволило получить более тяжелые самолеты, в том числе Ан-10.

В 1969 году началось строительство нового аэродрома, с взлетно-посадочной полосой (ВПП) 2500 метров, но данный факт был засекречен в связи с тем, что воздушная гавань использовалась совместно с военными самолетами. Построенная взлетно-посадочная полоса стала первой длинной полосой в Северо-Кавказском ведомстве гражданской авиации, а всего в то время в СССР было 12 аэродромов с длиной взлетно-посадочной полосы 2500 метров.

Первый регулярный рейс новой воздушной гавани был совершен в апреле 1974 года, а торжественное открытие нового аэровокзала состоялось в июне 1976 года. Рейсы стали выполняться более чем в 50 городов СССР.

В 1993 году аэропорт Анапа получил статус Международной воздушной гавани.

С 2006 года воздушная гавань принимает самолеты Boeing-737, а с 2008 года — Airbus-319.

В преддверии зимних Олимпийских игр 2011-2012 годов были реконструированы аэровокзал и взлетно-посадочная полоса, построена новая платформа.В 2013 году пассажиропоток терминала составил 740 тысяч человек. Во время зимних Олимпийских игр в Сочи аэродром служил запасной воздушной гаванью и мог использоваться в случае неблагоприятных погодных условий. погодные условия в районе Сочи.

В 2017 году был открыт новый Терминал 1 рядом со старым зданием авиакомплекса. Он обслуживает внутренние рейсы, а Терминал 2 (старое здание) обслуживает международные рейсы.

Воздушными воротами курорта Анапа является международный аэропорт Витязево.Он расположен восточнее одноименного поселка и всего в 15 километрах от центра Анапы. Сегодня Витязево — современный узловой аэропорт, используемый как для полетов гражданской авиации, так и для ВВС страны. Входит в тридцатку самых загруженных воздушных гаваней России по состоянию на 2016 год.

Аэропорт Витязево расположен восточнее поселка Витязево, в 4 километрах от него. Адрес:

353447, г. Анапа-7, пос. Витязево.

Онлайн табло прибытия и отправления

Как добраться до аэропорта

Добраться до международного аэропорта Витязево можно общественным транспортом, автомобилем самостоятельно или на такси.

Автобус до аэропорта Анапы: расписание и цены

В курортный сезон аэропорт Анапы Витязево принимает до 4 млн человек. Он обслуживает за пределами самого города соседние курорты: Темрюк, Новороссийск. Летом из Витязево в Анапу можно добраться рейсовым автобусом Аэропорт — Геленджик с остановкой в ​​Анапе. Стоимость составит 30 рублей, билет приобретается заранее. Автобусное сообщение не работает в ночное время.

Рейсовый автобус в аэропорт Анапы

Данный вид транспорта с маршрутом №113 в летний период отправляется с автовокзала Анапы ежечасно и идет прямо в аэропорт.Начало движения: 07:30, окончание движения: 21:30. Время в пути 40 минут. По прибытии автобус забирает пассажиров из воздушной гавани и снова направляется на городской автовокзал. Первый рейс начинается в 08:00, а последний — в 22:00. Посадка в автобус на автовокзале осуществляется на платформе №4. Он будет проходить через следующие остановки:

.
  • Пионерский проспект;
  • Железнодорожная улица;
  • Симферопольское шоссе.

При полной загрузке маршрутного такси автобус ходит без остановок.Протяженность маршрута около 15 километров. Стоимость проезда 30 руб.

Зимой маршрутное такси меняет свой график и совершает всего один-три рейса в день, время которых привязано к вылету из столицы России в аэропорт Анапы.

Такси Аэропорт Анапа

Из города в аэропорт легко добраться на такси. Индивидуальной особенностью всех российских курортных городов является большое количество нелегалов. Цены на услуги этого вида транспорта, как правило, достаточно высоки.

Официальным перевозчиком аэропорта Витязево является ООО «Такси-Авиа». Данная компания осуществляет перевозки пассажиров по заранее утвержденным тарифам, с которыми можно ознакомиться на сайте taksi-avia.ru. Вызвать такси можно по телефону 2101, это бесплатно для всех операторов в любых регионах России. Время в пути на такси составит 30 минут, стоимость одной поездки 800 рублей.

Во всех городах России отлично работает полезное приложение Яндекса — Яндекс.Такси, которое поможет в кратчайшие сроки найти свободного водителя и даже рассчитать примерную стоимость поездки.Яндекс.Такси обещает доставить вас от автовокзала Анапы до аэропорта Витязево за 424 рубля, что почти вдвое дешевле официального перевозчика Такси Авиа. Чтобы вызвать такси через сервис Яндекс.Такси, вам понадобится доступ в интернет, смартфон или компьютер.

Парковка в аэропорту Анапы: стоимость парковки

Все парковки аэропорта работают круглосуточно. Возле терминала есть три коммерческих платных парковки и одна бесплатная. Ознакомиться с расположением парковок аэропорта Витязево можно на схеме ниже:

Бесплатная парковка расположена при въезде на территорию порта, ее вместимость 35 автомобилей.

    Что делать, если рейс отменили

    Если рейс был отменен более чем за 24 часа до вылета, то пассажиры пересаживаются на аналогичные рейсы авиакомпании. Расходы несет перевозчик, для пассажира услуга бесплатна. Если ни один из предложенных авиакомпанией вариантов вас не устраивает, большинство авиакомпаний могут оформить «вынужденный возврат». После подтверждения авиакомпанией деньги вернутся на ваш счет. Иногда это может занять несколько недель.

    Как зарегистрироваться в аэропорту

    Онлайн-регистрация доступна на сайтах большинства авиакомпаний. Чаще всего он открывается за 23 часа до начала полета. Пройти его можно не позднее, чем за 1 час до вылета самолета.

    Для регистрации в аэропорту вам понадобится:

    • удостоверение личности, указанное в заказе,
    • свидетельство о рождении при поездке с детьми,
    • распечатанная маршрутная квитанция (по желанию).
  • Что можно взять с собой в самолет

    Ручная кладь — это предметы, которые вы берете с собой в самолет. Весовая норма ручной клади может варьироваться от 5 до 10 кг, а ее размер чаще всего не должен превышать сумму трех измерений (длины, ширины и высоты) от 115 до 203 см (в зависимости от авиакомпании). Сумочка не считается ручной кладью и перевозится свободно.

    В сумке, которую вы берете с собой в самолет, не должно быть ножей, ножниц, лекарств, аэрозолей, косметики.Алкоголь из магазинов беспошлинной торговли можно провозить только в запечатанных пакетах.

    Как оплатить багаж в аэропорту

    Если вес багажа превышает нормы, установленные авиакомпанией (чаще всего — 20-23 кг), необходимо доплатить за каждый килограмм превышения. Кроме того, многие российские и иностранные авиакомпании, а также лоукостеры имеют тарифы, не предусматривающие бесплатную перевозку багажа и оплачиваемые отдельно как дополнительная услуга.

    Багаж необходимо зарегистрировать в аэропорту на отдельной стойке регистрации.Если у вас нет возможности распечатать посадочный талон, вы можете получить его на обычной стойке регистрации авиакомпании, там же пройти регистрацию и сдать багаж.

    Где узнать время прибытия встречающего

    Узнать время прибытия самолета можно на онлайн-табло аэропорта. На сайте Туту.ру есть онлайн-табло основных российских и зарубежных аэропортов.

    Узнать номер выхода (гейта) можно на табло прилета в аэропорту.Этот номер находится рядом с информацией о рейсе прибытия.

10 приложений для укладки для мобильных модниц

Мы полагаемся на наши мобильные устройства для всего, от последних новостей и погоды до электронной почты и обновлений в социальных сетях, но знаете ли вы, что ваш смартфон или планшет также может дать вам советы по моде и стилю? Вдохновленное Pinterest и другими платформами для пинбордов, новое поколение приложений предлагает нон-стоп новейшие образы и тенденции, а также инструменты настройки для создания собственного стиля.

Благодаря ссылкам на дизайнерские бренды и розничные магазины, а также множеству вариантов обмена для друзей и семьи, эти ориентированные на моду приложения будут держать вас в курсе, оттачивать ваши покупательские навыки и поощрять вашего внутреннего дизайнера. Вот 10 наших любимых:

  • Поза

    Описанный как виртуальная горячая линия для покупок в вашем кармане, Pose побуждает вас щелкать свои последние модные находки, публиковать их в своей ленте и получать мгновенные отзывы от друзей, семьи и других пользователей Posers.Вы можете следить за своими любимыми модницами, в том числе за десятками знаменитостей и законодателей моды, и организовывать все свои любимые наряды в свои личные коллекции. Серьезно затягивает!

    Платформа: iOS, Android
    Цена: Бесплатно

  • Книга стилей

    Stylebook — это инструмент для управления гардеробом, который позволяет организовать и максимально эффективно использовать свой гардероб. Вы можете импортировать всю свою одежду и аксессуары, составлять различные наряды, искать предметы, чтобы завершить выбранный вами образ, и даже делать покупки в Интернете в более чем 7000 розничных магазинах.Эксперты по стилю дают советы, а статистика стиля дает представление о том, насколько хорошо вы укладываетесь!

    Платформа: iOS
    Цена:  3,99 долл. США

  • Поливор

    Веселое и социальное модное приложение, которое позволяет вам комбинировать и сочетать разные наряды, а затем покупать товары, которые вам нравятся. Polyvore позволяет вам просматривать тысячи различных стилей и брендов и следить за людьми, которыми вы восхищаетесь. Уведомления обеспечивают мгновенную обратную связь о новых действиях и сообщениях, поэтому вы всегда первыми узнаете о последних тенденциях!

    Платформа: iOS
    Цена: Бесплатно

  • Fashion Freax Street Style

    Взяв за основу Pinterest, приложение Fashion Freax Street Style побуждает вас делиться своим собственным стилем с людьми со схожими взглядами на стиль со всего мира.Загружайте свои наряды и получайте мгновенные отзывы и баллы за стиль или делитесь своими комментариями о последних образах других. Модные блогеры и профессиональные стилисты предлагают дополнительное вдохновение.

    Платформа: iOS, Android
    Цена: Бесплатно

  • Студия стиля

    Вам не нужно просто искать последние тенденции, вы также можете их создавать! Приложение Style Studio позволяет использовать фотографии, графику и бесконечное разнообразие нарядов и аксессуаров для создания собственных творений.Вы можете создать дизайн как для мужских, так и для женских моделей или использовать фотографию себя или одного из своих друзей. Вы можете создать свою собственную обложку журнала, и всем можно поделиться через Facebook, Twitter или по электронной почте.

    Платформа: iOS
    Цена:  0,99 долл. США

  • Модные термины

    Если вас смущает модная лексика, то приложение FashionTerms может быть именно тем, что вы ищете! Этот словарь моды включает в себя все основы, а также сотни терминов, с которыми может столкнуться даже самая заядлая модница.Все организовано в алфавитном порядке или может быть сгруппировано по предметам одежды, аксессуарам, текстилю и т. д. Многие определения сопровождаются иллюстрациями для большей ясности

    Платформа: iOS
    Цена:  0,99 долл. США

  • Сваг

    Стильное приложение Swaag специально создано для кроссовок и уличной моды. Загружайте фотографии, подписывайтесь на любимые лейблы и узнайте, какие стили носят на улицах по всему миру.Swaag поощряет дружеское соревнование через Swaag Battles, где сообщество Swaag решает, кто заслуживает абсолютного превосходства в стиле.

    Платформа: iOS
    Цена: Бесплатно

  • Ткань

    Описанный как ваш личный дневник одежды, Cloth помогает вам упорядочивать, сохранять и делиться всеми вашими любимыми нарядами для любого случая в любое время года. Вы фотографируете свои наряды, а затем помечаете их заметками и напоминаниями. Инструменты редактирования в приложении позаботятся о том, чтобы вы выглядели как можно лучше, а возможности обмена одним касанием позволяют вашим друзьям легко зарегистрироваться и предложить свое одобрение.Вы набираете баллы за то, что делитесь ими, а лучшие наряды публикуются в блоге Cloth и на страницах Facebook.

    Платформа: iOS
    Цена: Бесплатно

  • Trendable

    Trendabl — это относительно новая социальная сеть, посвященная моде, которая позволяет вам следить за любимыми брендами и дизайнерами и узнавать о новинках. Вы можете загружать и отмечать собственный контент, искать предложения других людей и заводить новых друзей. Вы можете собирать вещи через свои собственные «ящики», а компонент покупок, который скоро будет добавлен, позволит вам превратить ваши виртуальные коллекции в настоящие вещи!

    Платформа: iOS
    Цена: Бесплатно

  • Чиктопия

    Относительно новое приложение, которое позволяет вам найти свой личный стиль, просматривая модные фотографии, размещенные со всего мира.С Chictopia вы можете просматривать одежду или стиль, получать идеи о том, что надеть для определенного вечера или светского мероприятия, а также узнавать о новых модных тенденциях. Есть прямые ссылки на стильные бутики и магазины, а выбор дополняется постоянно обновляемыми подборками редакторов.

    Платформа: iOS
    Цена: Бесплатно

Марина Отель Анапа — скидки и акции

Рейтинг отеля

8.0

Очень хорошо

44 отзыва

  • Великолепные пейзажи
  • Быстрая регистрация
  • Большой бар

Уютная гостиница с прекрасным ремонтом, красивой мебелью и сантехникой.Стандартные номера со всеми удобствами обеспечат вам хороший и спокойный отдых. Чистые номера, превосходное обслуживание и гостеприимство – все это встречает отель «Марина Анапа». Все общественные места чистые и просторные. Обслуживающий персонал профессиональный и дружелюбный. По желанию туристов возможно обслуживание номеров.

Стандартные номера имеют площадь от 12 кв.м., а номера повышенной комфортности в основном больше 15 кв.м. В обоих типах номеров есть ванная комната, спутниковое телевидение и фен.

Расположение: Отель находится в удобном месте, откуда можно легко добраться до многих достопримечательностей.

Интернет:
Беспроводной доступ в Интернет предоставляется бесплатно в общественных зонах отеля и в номерах.


Бассейн, тренажерный зал:

Гости могут посещать фитнес- и расслабляющие процедуры в фитнес-центре и бассейне.

Регистрация и выписка:
Служба приема и размещения гостей доступна ежедневно.Время заезда — 14:00, выезда — 12:00. Поздняя регистрация отъезда возможна по запросу и за дополнительную плату.

Оценка гостей:
Отмечая хорошее соотношение цены и качества обслуживания, гости отеля высоко оценивают его работу: чистота — оценка 8 баллов ; оборудование 8 баллов из 10.

Специальное предложение:

Марина Отель Анапа предоставляет возможность забронировать номер в апреле со скидкой на период проживания на весну 2022.Специальное предложение действительно при проживании более 3 дней и не распространяется на праздничные дни.

Шасси

NAPA поддерживает Таннера Фауста в 900-сильном автомобиле Formula Drift » Блог ноу-хау NAPA

Таннер Фауст возвращается в дрифт. При поддержке NAPA Chassis Фуст будет соревноваться на своем новом Volkswagen Passat Rockstar Energy в трех соревнованиях Formula Drift в 2015 году, начиная с открытия сезона на Гран-при Toyota на трассе Long Beach Street Course.

Вы можете знать Таннера Фауста по телешоу Top Gear на канале History или, возможно, по его смелым движениям за рулем своего Volkswagen Rockstar Energy в X-Games и других соревнованиях по ралли-кроссу. Тем не менее, для тех, кто увлекается дрифтом, имя Foust уходит корнями в далекое прошлое.

 

41-летний профессиональный водитель называет дрифтинг «спортом, с которого началась моя карьера». Однако Фуст взял перерыв, чтобы заняться другими делами, такими как ралли-кросс и телевизионные проекты, и говорит, что спорт изменился с тех пор, как он ушел пять лет назад.Правила сборки автомобилей и того, как судьи оценивают пробеги, развивались, и водители адаптировались вместе с изменениями. Последняя машина Фуста значительно мощнее, чем автомобили, на которых он ездил, хотя скорость — одна из его давних сильных сторон — больше не является фактором, позволяющим набрать очки.

Новый аттракцион — монстр. Адаптированный к заднему приводу, Rockstar Energy Volkswagen Passat оснащен двигателем V8 объемом 450 кубических дюймов мощностью 700 лошадиных сил или 900 л.с. с закисью азота. Как и ожидалось от семейного седана с такой мощностью, запаса немного.Tanner Foust Racing модернизировала все, от компонентов трансмиссии до приборов, чтобы создать специальную машину для дрифта, и этот процесс, по словам Фауста, доставляет удовольствие.

«В глубине души я энтузиаст», — сказал Фауст. «Возможность придумать что-то невероятное, а затем поработать с командой над модификацией, созданием и воплощением этого в жизнь — это невероятно полезно».

Шасси NAPA поддерживает двукратного чемпиона Formula Drift Таннера Фауста, и вы тоже можете. Следите за происходящим в Лонг-Бич в прямом эфире, смотрите его в спортивной сети CBS или подписывайтесь на Таннера Фауста в Twitter и Facebook.

Границы | NapA опосредует окислительно-восстановительную регуляцию антиоксидантной реакции, использования и развития углерода у Aspergillus nidulans

Введение

Предполагаемая роль активных форм кислорода (АФК) в качестве основных сигналов дифференцировки клеток (Hansberg and Aguirre, 1990; Aguirre et al., 2005) привела нас к изучению механизмов, с помощью которых эукариотические клетки детоксицируют АФК, с использованием модельного гриба Aspergillus nidulans. . Чтобы воспринимать и передавать сигналы окислительного стресса, грибы используют системы фосфорелей, связанные с киназами MAP, специализирующимися на передаче сигналов стресса или SAPK. Schizosaccharomyces pombe paradigmatic SAPK Sty1/Spc1 был охарактеризован как MAPK, участвующий в контроле клеточного цикла (Shiozaki and Russell, 1995), который активируется осмотическим (Millar et al., 1995; Degols et al., 1996), окислительным (Degols et al., 1996), тепловой шок (Nguyen and Shiozaki, 1999), ограничение азота (Shiozaki and Russell, 1996) и стресс, вызванный ультрафиолетовым излучением (Degols and Russell, 1997). Как показано на рисунке S1 и в таблице S1, система фосфорилирования, связанная с Sty1/Spc1, состоит из гистидинкиназ (HK) Mak1, Mak2 и Mak3 (Buck et al., 2001), фосфотрансферный белок (HPt) Mpr1 и регулятор ответа (RR) Mcs4. Sty1/Spc1, в свою очередь, регулирует транскрипционный фактор Atf1. Несмотря на сходство архитектуры с системой Saccharomyces cerevisiae Sln1-Ypd1-Ssk1-Hog1 (de Nadal et al., 2011), S . pombe фосфорелея передает сигналы окислительного, а не осмотического стресса (Nguyen et al., 2000). Второй компонент фосфорилирования, фактор транскрипции Prr1, также необходим для реакции на окислительный стресс независимо от Sty1/Spc1 (Quinn et al., 2011). В дополнение к Atf1 и Prr1 фактор транскрипции Pap1, гомолог S. cerevisiae Yap1 (Moye-Rowley et al., 1989), имеет решающее значение для антиоксидантной реакции у этого гриба. Сигнал окисления воспринимается различными пероксиредоксинами или Prxs, а затем передается на Pap1 или Yap1, которые после окисления накапливаются в ядре, чтобы регулировать экспрессию множественных генов, участвующих в антиоксидантной реакции.

Все пероксиредоксины принадлежат к консервативному семейству пероксидаз, которые восстанавливают пероксид и содержат консервативный «пероксидатический» цистеин.Пероксиды окисляют этот Cys до сульфеновой кислоты, которая затем реагирует с другим «разлагающим» Cys с образованием дисульфидной связи, впоследствии восстанавливаемой подходящим донором электронов для завершения каталитического цикла. Prxs подразделяются на семейства 2-Cys, атипичные 2-Cys и 1-Cys. 2-Cys являются гомодимерами и содержат пероксидатический и расщепляющий остатки Cys в одной и той же субъединице. Однако дисульфидная связь образуется между двумя разными субъединицами. В атипичном 2-Cys внутри той же субъединицы образуется межмолекулярный дисульфид.1-Cys Prxs образуют дисульфид с разрешающим Cys, присутствующим в других белках или небольших тиоловых молекулах (Rhee, 2016). До сих пор типичные 2-Cys Prxs не были обнаружены у мицелиальных грибов. Роль пероксиредоксина Gpx3 S. cerevisiae в активации Yap1, которая также нуждается в Yap1-связывающем белке Ybp1, была первым описанием функции Prx в восприятии H 2 O 2 (Delaunay et al., 2002). Однако при определенных условиях пероксиредоксин Tsa1 также может опосредовать активацию Yap1 с помощью H 2 O 2 (Tachibana et al., 2009). У S. pombe 2-Cys пероксиредоксин Tpx1 передает окислительно-восстановительный сигнал Pap1 (Vivancos et al., 2004, 2005).

A. nidulans содержит 15 ГК, и функция большинства из них неизвестна. Генетические данные указывают на то, что HK NikA передает сигналы осмостресса и фунгицидов на (HPt) YpdA и на SrkA RR, который связан с SAPK SakA/HogA (Han and Prade, 2002; Kawasaki et al., 2002), а также на SAPK-независимый RR SrrA (Hagiwara et al., 2007; Vargas-Perez et al., 2007). Верхние MAPKK PbsB и MAPKKK SskB регулируют SakA (Furukawa et al., 2005), который способен замещать функции Sty1/Spc1 у S. pombe , а у A. nidulans фосфорилируется в ответ на множественные типы стресса, включая осмотическое, окислительное (Kawasaki et al., 2002), питательное голодание (Lara-Rojas et al., 2011) и гипоксию (Sánchez and Aguirre, неопубликовано). Активированный стрессом SakA перемещается в ядро, где он взаимодействует с фактором транскрипции AtfA, необходимым для индукции множества генов, и оба мутанта, Δ sakA и Δ atfA , чувствительны к окислительному стрессу (Lara-Rojas et al., 2011). Кроме того, SakA и AtfA необходимы для индуцированной осмотическим воздействием экспрессии генов (Hagiwara et al., 2009).

TF SrrA также необходим для устойчивости к окислительному стрессу (Vargas-Perez et al., 2007), и оба, SakA и SrrA, играют важную роль во время развития. SakA подавляет половое развитие и активируется во время бесполого развития (Kawasaki et al., 2002). Δ sakA интактные конидии постепенно теряют свою жизнеспособность, и это согласуется с тем фактом, что фосфорилированный SakA накапливается в бесполых спорах (конидиях) АТФ-зависимым образом, и его дефосфорилирование необходимо для прорастания (Lara-Rojas et al. ., 2011). Сходным образом, мутанты Δ srrA обнаруживают резко сниженную бесполую споруляцию и продуцируют конидии, которые очень быстро теряют свою жизнеспособность (Vargas-Perez et al., 2007). В дополнение к факторам транскрипции (TF) AtfA и SrrA было показано, что функциональный гомолог Yap1/Pap1 NapA необходим для устойчивости к H 2 O 2 у A. nidulans (Asano et al., 2007). . Неродственный белок AN8863, предположительно участвующий в сборке нуклеосом, позже был назван NapA (Araújo-Bazan et al., 2008). Здесь мы продолжаем использовать NapA для обозначения гомолога A. nidulans Yap1/Pap1 (AN7513), поскольку он использовался таким образом в других публикациях (Lessing et al., 2007; Thön et al., 2010), а также потому, что название «ap», которому предшествует первая буква названия вида (например, n idulans ap A), широко используется во многих других мицелиальных грибах, где роль гомологов Yap1/Pap1 в устойчивости к окислительному стрессу было продемонстрировано (Lessing et al., 2007; Цяо и др., 2008 г.; Темме и Тудзынски, 2009 г.; Тиан и др., 2011; Картрайт и Скотт, 2013 г.). Примечательно, что у некоторых патогенов растений гомологи Yap1/Pap1 участвуют не только в регуляции антиоксидантного ответа, но и в вирулентности растений (Molina and Kahmann, 2007; Guo et al., 2011; Huang et al., 2011).

Здесь мы сравнили относительный вклад (TF) AtfA, SrrA и NapA в антиоксидантный ответ и развитие у A. nidulans и обнаружили новые роли NapA в регуляции полового и бесполого развития, утилизации углерода и регуляции генов во время бесполого спорообразования.

Материалы и методы

Штаммы, среды, условия роста и определение активности каталазы

Штаммы A. nidulans , используемые в этой работе, перечислены в Таблице S2. Все штаммы выращивали при 37°C в нитратной среде с минимальным содержанием глюкозы (MM) (Hill and Käfer, 2001) с добавлением добавок. Штаммы Δ napA на фоне veA + были получены в результате полового скрещивания со штаммом FGSCA4. Наличие аллеля veA дикого типа было подтверждено с помощью ПЦР с использованием геномной ДНК из отобранного потомства и праймеров veAforward и veAreverse, как сообщалось (Han et al., 2010). Менадион стерилизовали фильтрованием и, подобно H 2 O 2 , добавляли к агаровой среде при 50°C перед затвердеванием. Планшеты, содержащие H 2 O 2 , использовали в день их приготовления или хранили при 4°C не более 24 часов. Поскольку H 2 O 2 может вступать в реакцию с компонентами среды, реальную концентрацию в пластинах оценить невозможно. Для обеспечения воспроизводимости эксперимента при сравнении различных штаммов использовали одну и ту же партию среды, содержащей H 2 O 2 .Споровые суспензии, содержащие 1×10 3 или 1×10 4 конидий, использовали для инокуляции чашек путем нанесения суспензии в центр чашек, содержащих различные стрессоры или среды. Более высокая устойчивость к H 2 O 2 наблюдается при более высокой плотности спор, предположительно из-за высокого уровня активности каталазы А, обнаруженной в конидиях (Navarro et al., 1996; Navarro and Aguirre, 1998). Для определения каталазной активности 30 мкг экстрактов общего белка, приготовленных из конидий или мицелия, разделяли на нативных полиакриламидных гелях для определения каталазной активности, как сообщалось (Navarro et al., 1996; Кавасаки и др., 1997). Кратковременно гели инкубируют в 5% метаноле при встряхивании в течение 5 мин, а затем промывают водопроводной водой 3 раза. После этого гель инкубируют в 0,03% растворе перекиси водорода (100 мкл коммерческого 30% раствора в 100 мл деионизированной воды) в течение 5 мин и промывают водой. Наконец, гель инкубируют в окрашивающем растворе до тех пор, пока не станут видны полосы активности. Раствор для окрашивания готовят путем смешивания равных объемов 2% (масса/объем) раствора FeCl 3 и 2% (масса/объем) K 3 Fe(CN) 6 .Различные каталазы были картированы перед использованием одиночных, двойных и тройных мутантов, пораженных генами catA, catB и catC (Kawasaki and Aguirre, 2001).

Делеция

генов napA, gpxA, tpxA, tpxB и alcA и маркировка NapA Геномную ДНК

использовали в качестве матрицы для получения конструкций с делецией гена с помощью двойной совместной ПЦР (Yu et al., 2004). Для конструкции замены гена napA (AN7513) ORF napA амплифицировали с праймерами 5′ For-napA и 5′ Rev-napA (см. Таблицу S3).3′-фрагмент napA амплифицировали с праймерами 3′ For- napA и 3′ Rev- napA. Маркер Aspergillus fumigatus pyrG амплифицировали с праймерами pyrGforward и pyrGreverse, используя в качестве матрицы плазмиду PFNO3 (Nayak et al., 2006). Три фрагмента очищали, смешивали и использовали в ПЦР слияния с праймерами 5’nest-napA и 3’nest-napA. Конечную кассету napA-AfpyrG-napA размером 4900 п.н. очищали и использовали для трансформации A. nidulans , штамм 11035, путем электропорации (Sanchez and Aguirre, 1996; Sánchez et al., 1998). Пять трансформантов PyrG + были получены и проанализированы Саузерн-блоттингом для подтверждения элиминации napA . После подтверждения надлежащего события делеции (рис. S2) был выбран штамм TFL9 и скрещен со штаммом CLK43, чтобы избавиться от делеции kuA , а потомство штамма CFL7 было подтверждено с помощью ПЦР и использовано в дальнейших экспериментах.

Для делеции гена gpxA (AN2846) для амплификации использовали пары праймеров 5’For- gpxA /5’Rev- gpxA и 3’For- gpxA /3’Rev- gpxA . gpxA 5′- и 3′-области соответственно.Для получения конечного продукта слияния использовали праймеры 5’For-nested gpxA и 3’Rev-nested gpxA . Маркер A. fumigatus riboB амплифицировали с праймерами 5Ribo и 6Ribo, используя в качестве матрицы плазмиду pAfriboPstE1Skt(ssp1)-37 (Nayak et al., 2006). Кассету gpxA -AfriboB- gpxA размером 5000 п.н. очищали, как описано выше, и использовали для трансформации штамма 11035 A. nidulans с помощью электропорации. Было получено двадцать трансформантов RiboB + , которые были проанализированы с помощью ПЦР для подтверждения элиминации gpxA (рис. S3).Шесть трансформантов содержали ожидаемое событие. Штамм ТАМ16 скрещивали со штаммом CLK43, потомство штамма САМ11 подтверждали с помощью ПЦР и использовали в дальнейших экспериментах.

Аналогичная стратегия была использована для удаления гена tpxA (AN10223). Пары праймеров 5’For- tpxA /5’Rev- tpxA и 3’For- tpxA /3’Rev- tpxA использовали для амплификации 5′- и 3′-областей tpxA соответственно. Маркер A. fumigatus pyrG амплифицировали с праймерами pyrGforward и pyrGreverse, используя плазмиду PFNO3 в качестве матрицы (Nayak et al., 2006). Продукт ПЦР слияния 3483 п.н. tpxA -AfpyrG- tpxA , полученный с праймерами 5’nest tpxA и 3’nest tpxA, использовали для трансформации штамма 11035 с помощью электропорации. 15 полученных трансформантов были проанализированы с помощью ПЦР, и 4 трансформанта были подтверждены (рис. S3). Трансформант 6 был назван ТАМ17, скрещен со штаммом CLK43 и потомством штамма САМ13, подтвержденным ПЦР и выбранным для дополнительных экспериментов.

Для удаления гена tpxB (AN3973) для амплификации использовали пары праймеров 5’For- tpxB /5’Rev- tpxB и 3’For- tpxB /3’Rev- tpxB 9. 5′- и 3′-областей соответственно.Маркер A. fumigatus pyrG амплифицировали, как описано выше, и продукт ПЦР слияния 3483 п.н., полученный с праймерами 5’nest tpxB и 3’nest tpxB, использовали для трансформации штамма 11035 с помощью электропорации. 4 трансформанта из 5 полученных были подтверждены с помощью ПЦР (рис. S3). Трансформант 4, названный TAM19, был скрещен со штаммом CLK43 и штаммом-потомком CAM19, используемым в дальнейших экспериментах.

Делеционная конструкция alcA , содержащая ген riboB в качестве селективного маркера, была создана с использованием праймеров 5’For- alcA и 5’Rev- alcA для 5′-области и 3’For- alcA . и 3’Rev- alcA для 3′-области.Маркер A. fumigatus riboB амплифицировали с праймерами 5Ribo и 6Ribo, как и ранее. Полосу 4167 п.н., полученную с праймерами NestForalcA и NestRevaclA, использовали для трансформации штамма 11035 с помощью электропорации. Шесть трансформантов содержали ожидаемое событие (рис. S4). Трансформант ТАМ20 скрещивали со штаммом CLK43, потомство штамма САМ17 подтверждали с помощью ПЦР и отбирали для дальнейших экспериментов. Половые скрещивания давали двойные, тройные и четверные мутанты, как указано в Таблице S2.

Для создания С-концевой конструкции NapA::GFP использовали три продукта ПЦР.Сначала 5′ и полную ORF napA амплифицировали с праймерами GSP1napA и GSP2napA. Во-вторых, 3′-фрагмент napA амплифицировали с праймерами GSP3napA и GSP4napA. В-третьих, GFP и маркер A. fumigatus pyrG амплифицировали с праймерами GFP1napA и GFP2napA, как и ранее. Очищенные фрагменты использовали в ПЦР слияния с праймерами GSP1napA и GSP4napA. Кассету napA-GFP-AfpyrG размером 6625 п.н. использовали для трансформации штамма A. nidulans A1155 методом электропорации. Трансформантный штамм TFL14 был подтвержден с помощью ПЦР и использован для дальнейших экспериментов (рис. S5).

Микроскопия

Изображения флуоресцентной микроскопии были получены in vivo . Споры штамма NapA::GFP выращивали в течение 18 ч на покровных стеклах, содержащих жидкую глюкозу-ММ, при 37°C без встряхивания. После этого образцы переносили в ту же среду с 2 мМ H 2 O 2 или без нее, инкубировали в течение 0–120 мин и наблюдали с помощью микроскопа NIKON Eclipse E600 для выявления флуоресценции DAPI и GFP. Изображения были получены с помощью охлаждаемой камеры Neo Andor sCMOS.Для окрашивания DAPI образцы конидий или мицелия фиксировали в метаноле/ацетоне в течение 10 мин, промывали водой и окрашивали в течение 5 мин 0,1 мг/мл 4′,6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI).

Транскриптомный анализ

конидии из 6-дневных культур штаммов CLK43 (WT) и CFL7 (Δ napA ) собирали и промывали 3 раза 10 мл холодной воды. Избыток жидкости удаляли центрифугированием и конидии немедленно замораживали жидким азотом. Тотальную РНК экстрагировали криогенным измельчением с использованием Tissue Lyser (Qiagen) и очищали с использованием набора RNAeasy Mini (Qiagen) в соответствии с протоколом производителя.Число целостности РНК (RIN) для качества РНК было создано с использованием системы биоанализатора Agilent 2100 (технологии Agilent). Два независимых образца от каждого штамма (биологические повторы) были обработаны для синтеза кДНК с использованием набора Illumina TrueSeqV2 и секвенированы в основном центре секвенирования нового поколения в IBT-UNAM. с помощью платформы Illumina. В среднем было получено 10168 прочтений по 72 п.н. на образец, что составляет почти 96,3% длины генома A. nidulans . Биологические повторы показали хороший уровень корреляции (r_0.966 для WT и r_0,968 для Δ napA ). Дифференциальная экспрессия генов была выведена на основе общего количества карт с использованием пакета EdgeR. Гены, демонстрирующие значение логарифмического изменения (LFC) ≥2 и частоту ложных открытий (FDR) ≤ 0,05, считали дифференциально экспрессированными (DE). Анализ дифференциальной экспрессии был депонирован под идентификатором GEO GSE94747 как часть BioProject PRJNA373914. Необработанные данные секвенирования для всех экспериментов были депонированы в базе данных SRA под идентификатором SRP099165.

ПЦР в реальном времени

Тотальную РНК выделяли с использованием набора для очистки растительной РНК (Quiagen) в соответствии с инструкциями производителя и обрабатывали набором DNase Turbo DNA-free (Ambion). Целостность РНК (RIN) и концентрацию определяли с помощью TapeStation 2200 (Agilent Genomics). 1 мкг РНК использовали для синтеза матриц кДНК для ПЦР-амплификации с использованием обратной транскриптазы SuperScript III (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Экспрессию каждого гена измеряли, используя разведения образцов кДНК 1:10.Специфические праймеры, используемые для ОТ-ПЦР (таблица S3), были разработаны для получения ампликонов кДНК размером около 130 п.н. Для оценки загрязнения геномной ДНК были разработаны праймеры для амплификации более крупного продукта, включая интрон каждого гена, из геномной матрицы. Продукты ОТ-ПЦР наблюдали в 2% агарозных гелях.

Было выполнено

троек для каждого образца. ОТ-ПЦР проводили с использованием Platinum SYBR Green qPCR SuperMix-UDG с набором ROX (Invitrogen). ОТ-ПЦР проводили в системе ПЦР в реальном времени StepOne (Applied Biosystems).Используемая программа включала начальную инкубацию УДГ в течение 2 мин при 50°С, затем 2-минутную стадию денатурации при 95°С и 40 циклов амплификации при 95°С в течение 15 с, а затем 30 с при 60°С. Для относительной количественной оценки мы использовали сравнительный метод Ct, и данные были проанализированы с помощью программного обеспечения StepOne V2.3 (Applied Biosystems), используя ген гистона 2B (h3B) (AN3469) в качестве эталона.

Результаты

TF NapA, SrrA и AtfA играют разные роли в

A. nidulans Антиоксидантный ответ

Предыдущая работа показала, что (TF) SrrA (Vargas-Perez et al., 2007), AtfA (Lara-Rojas et al., 2011) и NapA (Asano et al., 2007) участвуют в антиоксидантной реакции A. nidulans . Для анализа относительного вклада каждого ТФ в этот процесс мы сравнили чувствительность конидий и мицелий мутантов Δ napA , Δ srrA и Δ atfA к H 2 O 2 и менадиону. Результаты показывают, что конидии из мутанта Δ napA были наиболее чувствительны к мутантам H 2 O 2 , за которыми следуют мутанты Δ srrA и Δ atfA , в то время как только мутанты Δ ).Напротив, тот же анализ, проведенный с мицелием, показал немного более высокую чувствительность H 2 O 2 к мутантам Δ srrA , за которым следовал Δ napA , в то время как мутант atfA был столь же устойчив к H 7 2 7 2 9089. O 2 как штамм WT. Снова только мутант Δ napA был чувствителен к менадиону (рис. 1В).

Рисунок 1. NapA, SrrA и AtfA играют разные роли в антиоксидантной реакции Aspergillus nidulans .(А) Конидии (1 × 10 3 ) из штаммов CLK43 (WT), COSsrrA3 (Δ srrA ), CFL7 (Δ napA ), TFLΔatfA-04 (Δ atfA ), САМ ATFA δ NAPA ), CAM6 (δ SRRA δ NAPA ), CAM8 (δ SRRA δ ATFA) и CAM9 (δ SRRA δ ATFA δ NAPA ) были инокулированы путем добавления споровых суспензий в центр чашек ММ с добавками, содержащих H 2 O 2 или менадион (Md) в указанных концентрациях, и инкубации при 37°C в течение 4 дней. (B) Мицелиальные пробки, срезанные с края роста 5-дневных колоний штаммов CLK43, COSsrrA3, CFL7, TFLΔatfA-02, CAM7, CAM6, CAM8 и CAM9, переносили на чашки, содержащие H 2 O 2 или менадиона в указанных концентрациях и инкубировали при 37°С в течение 4 дней.

Для дальнейшего анализа вклада NapA, SrrA и AtfA в антиоксидантный ответ мы использовали одиночные мутанты Δ napA , Δ srrA и Δ atfA для проведения половых скрещиваний и получения двойных и тройных мутантов, что было подтверждено ПЦР-анализ (не показан).Результаты на рисунке 1A показывают, что конидии двойных и тройных мутантов не проявляют аддитивных фенотипов, а те, которые несут делецию Δ napA , были столь же чувствительны к H 2 O 2 и менадиону, как и один мутант Δ napA , за исключением в случае штамма Δ srrA Δ napA , чья чувствительность H 2 O 2 была аналогична чувствительности мутанта Δ srrA (рис. 1А). В тесте, проведенном с мицелием, двойные и тройные мутанты, несущие делецию Δ srrA , вели себя как одиночные мутанты Δ srrA (рис. 1В).Примечательно, что дефекты роста мутанта Δ srrA (Vargas-Perez et al., 2007) усиливаются наличием делеции Δ atfA , поскольку колонии мутантов Δ srrA Δ atfA демонстрируют более сильное снижение роста. и очень нерегулярные границы колонии. Эти дефекты роста и конидиации были еще более значительными у мутанта, лишенного 3 TF (рис. 1А, В).

Эти результаты показывают, что ТФ NapA, SrrA и AtfA играют разные роли на разных стадиях A.nidulans жизненный цикл. Для H 2 O 2 устойчивость к спорам NapA играет более заметную роль, чем SrrA, который, в свою очередь, более важен, чем AtfA. Для мицелиальной устойчивости H 2 O 2 SrrA несколько более критичен, чем NapA, тогда как AtfA не играет роли в этом процессе, и только NapA необходим для устойчивости к менадиону как в спорах, так и в мицелии. Во время вегетативного роста ни NapA, ни AtfA по отдельности не требуются для нормального радиального роста. Однако дефекты роста мутантов Δ srrA усиливаются делецией AtfA, что указывает на то, что AtfA способствует нормальному радиальному росту.SrrA почти необходим для нормальной конидиации, NapA необходим для полной конидиации (см. далее), а AtfA необязателен для этого процесса. Что касается конидиальной функции, SrrA и AtfA являются критическими для жизнеспособности конидий, а NapA необходим для накопления множественных мРНК в конидиях (см. далее).

NapA, SrrA и AtfA регулируют различные гены каталазы

Чтобы лучше понять роль NapA в антиоксидантном ответе, мы сравнили H 2 O 2 чувствительность конидий мутантов, лишенных NapA, специфичной для спор каталазы CatA (Navarro et al., 1996; Navarro and Aguirre, 1998) или каталаза CatB, индуцируемая мицелием (Kawasaki et al., 1997). Примечательно, что конидии Δ napA были гораздо более чувствительны к H 2 O 2 , чем конидии Δ catA , в то время как конидии Δ catB показали лишь незначительную чувствительность при 4 мМ H 2 O Рисунок S6). Как показано на рисунке 2А, ​​наличие активности CatA полностью зависело от AtfA, но не зависело от NapA. Напротив, H 2 O 2 индукция мицелиальной каталазы CatB в значительной степени зависела как от NapA (рис. 2B), так и от SrrA (Vargas-Perez et al., 2007). Поскольку CatB также сильно индуцируется во время стационарной фазы роста (Kawasaki and Aguirre, 2001), мы спросили, требуются ли для этой индукции NapA, SrrA или AtfA. Неожиданно ни один из этих TF не понадобился для этого процесса. Однако для индукции каталазно-пероксидазной активности CatD/CpeA (Kawasaki and Aguirre, 2001; Scherer et al., 2002) требуется SrrA (рис. 2C). Таким образом, эти результаты показывают, что NapA и SrrA оба необходимы для индукции CatB с помощью H 2 O 2 , AtfA необходим для экспрессии CatA в конидиях, и ни один из них не требуется для индукции CatB во время поздней стационарной фазы роста. .Это и регуляция SrrA активности CatD/CpeA (Kawasaki and Aguirre, 2001) подтверждают различные роли, которые эти TF выполняют во время антиоксидантной реакции A. nidulans .

Рисунок 2. Транскрипционные факторы NapA, SrrA и AtfA играют разные роли в регуляции каталазы. (A) Уровни активности CatA не изменяются в конидиях Δ napA . Экстракты конидиального белка из штаммов CLK43 (WT), TFL ΔatfA-04 (Δ atfA ) и CFL7 (Δ napA ) анализировали на активность каталазы в геле. (B) Индукция активности CatB с помощью H 2 O 2 требуется NapA. Мицелий из штаммов CLK43 (WT) и CFL7 (Δ napA ) выращивали в течение 12 ч в жидкой ММ, а затем добавляли H 2 O 2 в указанные моменты времени и концентрации и белковые экстракты использовали для определения активности каталазы. определение. (C) NapA, AtfA и SrrA не требуются для индукции CatB во время стационарной фазы роста. Мицелий из штаммов CLK43 (WT), CFL7 (Δ napA ), TFLΔatfA-02 (Δ atfA ), COSsrrA3 (Δ srrA ) и TLK12 (Δ catB ) выращивали в течение 4, 2, 12 ч. 48 ч в жидкой среде ММ.Опыт повторяли не менее 3 раз; показан репрезентативный эксперимент.

NapA локализуется в ядрах в ответ на окислительный стресс

Высокая чувствительность конидий Δ napA к H 2 O 2 , не объясняемая простым отсутствием активности каталазы спор (рис. 2А), предполагает, что NapA необходим для других функций конидий, включая те, которые участвуют в резистентности. в менадионе. Хорошо известно, что S. cerevisiae, S. pombe и другие гомологи NapA грибов демонстрируют накопление ядер при окислении в ответ на H 2 O 2 .Пероксиредоксины Gpx3 и Tpx1 воспринимают сигнал окисления и передают его на Yap1 и Pap1 соответственно. Чтобы определить локализацию NapA, мы ввели метку GFP на его С-конце и показали, что устойчивость H 2 O 2 соответствующего штамма не была затронута (рис. S5), что указывает на функциональность этого слияния NapA::GFP. Затем мы проанализировали локализацию NapA::GFP, используя различные концентрации H 2 O 2 . Первоначально мы обнаружили очень низкий базальный сигнал NapA::GFP, экспрессируемый промотором napA , который увеличивался в ядрах после 30 мин обработки различными концентрациями H 2 O 2 (не показано).В этих условиях 2 мМ была минимальной концентрацией, необходимой для индуцирования накопления ядра NapA::GFP, и поэтому мы использовали эту концентрацию для временного анализа. Как видно на рисунке 3A, NapA::GFP начинает демонстрировать ядерную локализацию после 20 минут обработки, которая постепенно увеличивается до 120 минут. Когда по истечении этого времени обработку H 2 O 2 прекратили путем переноса мицелия на среду, в которой отсутствовал H 2 O 2 , потребовалось 6 ч, чтобы наблюдать, что NapA::GFP больше не наблюдался в ядрах, показывая вместо этого локализацию цитоплазмы.Это указывает на то, что в этих условиях NapA-опосредованная адаптация к окислительному стрессу является относительно медленным процессом. Поскольку мутанты Δ napA чувствительны к менадиону, мы также определили, способен ли менадион индуцировать ядерную локализацию NapA::GFP. Действительно, менадион в концентрации 10 мкМ вызывал накопление ядер NapA после 90-минутной обработки (рис. 3В).

Рисунок 3. NapA индуцируется окислительным стрессом и постепенно накапливается в ядрах в ответ на окислительный стресс.(A) Ядерная локализация NapA увеличивается во время инкубации с H 2 O 2 . Конидии из штамма САМ20 (NapA::GFP) выращивали в течение 18 ч в ММ, а затем подвергали воздействию 2 мМ H 2 O 2 в течение указанного времени (0–120 мин), наблюдали in vivo и фотографировали каждые 10 мин с использованием эпифлуоресцентной микроскопии. Нижняя панель показывает сигнал NapA::GFP и ядер (DAPI) в мицелии, обработанном H 2 O 2 в течение 120 мин, зафиксированном и сфотографированном. (B) Менадион также индуцирует ядерную локализацию NapA. Конидии из штамма САМ20 (NapA::GFP) выращивали в течение 18 ч в ММ, а затем подвергали воздействию 10 мкМ менадиона в течение указанного времени (0–90 мин). Квадраты большего размера на каждом изображении показывают увеличение площадей, обозначенных квадратиками меньшего размера. Бары = 10 мкм.

Функция NapA в антиоксидантной реакции не зависит от пероксиредоксинов GpxA, TpxA и TpxB

Как указывалось ранее, S. cerevisiae пероксиредоксин Gpx3 и S.pombe Tpx1 передает сигнал окисления на Yap1 и Pap1 соответственно. Чтобы определить, участвуют ли гомологичные пероксиредоксины в функции NapA, мы провели поиск в геноме A. nidulans и обнаружили гены AN2846, AN10223 и AN3973 (Oh et al., 2010), которые, согласно их ближайшему гомологу, в S. cerevisiae названы gpxA (Thön et al., 2010), tpxA и tpxB соответственно. Мы создали штаммы, в которых один из этих генов пероксиредоксина был делетирован, и путем полового скрещивания получили тройные, а также четверные мутанты, содержащие делецию Δ napA .В отличие от мутантов Δ napA , мутанты, лишенные одного или всех трех пероксиредоксинов, не были чувствительны к H 2 O 2 или менадиону. Однако одновременная инактивация трех пероксиредоксинов привела к повышению чувствительности к H 2 O 2 , вызванному инактивацией NapA (рис. 4). Это предполагает, что эти 3 белка могут играть частично перекрывающуюся второстепенную функцию в устойчивости H 2 O 2 , отличную от NapA.

Рисунок 4. Пероксиредоксины GpxA, TpxA и TpxB не требуются для H 2 O 2 или устойчивости к менадиону . Конидии (1 × 10 3 ) из штаммов CLK43 (WT), CFL7 (Δ napA ), САМ11 (Δ gpxA ), САМ13 (Δ tpxA ), САМ19 (Δ t8px 9B 9 Δ GPXA δ TPXA δ TPXA δ TPXB ) и CAM16 (δ GPXA δ TPXA δ TPXB δ NAPA ) были инокулированы на добавленные мм плиты, содержащие H 2 O 2 или менадиона (Md) в указанных концентрациях и инкубировали при 37°С в течение 4 дней.

NapA участвует в регулировании развития

Мутанты

Δ napA не обнаруживали каких-либо явных дефектов, за исключением того, что они, по-видимому, развивают больше и более бледные клейстотеции, чем штамм WT. Чтобы изучить это более подробно, мы индуцировали половое развитие в сливающихся культурах и определяли количество клейстотеций, как сообщалось ранее (Kawasaki et al., 2002). Действительно, мутант Δ napA продуцировал примерно в 3 раза больше клейстотеций, чем штамм WT (рис. 5А).Примечательно, что молодые клейстотеции Δ napA были белыми, в то время как у более старых клейстотеций появилась некоторая пигментация (рис. 5B). При наблюдении под микроскопом стало ясно, что клейстотеции Δ napA не пигментированы (рис. 5C, правая панель), но производят пигментированные аскоспоры, которые являются жизнеспособными (не показаны). Ген veA A. nidulans кодирует член семейства грибковых белков, необходимых для образования клейстотеция (Kim et al., 2002) и регуляции вторичного метаболизма (Bayram et al., 2008). Поскольку наши лабораторные штаммы содержат аллель veA1 , который вызывает более высокую продукцию конидий и меньшее количество клейстотеций (Käfer, 1965), мы также оценили фенотипы полового развития Δ napA в присутствии аллеля дикого типа veA . Как и ожидалось, результаты показывают более высокое количество клейстотециев у штамма veA + FGSC4 и даже выше у штаммов Δ napA veA + . Опять же, молодые клейстотеции не были пигментированы, в то время как более старые клейстотеции были непигментированы, но продуцировали пигментированные аскоспоры (не показано).Аналогично, присутствие гена veA дикого типа не модифицировало чувствительность Δ napA к окислительному стрессу. Эти результаты показывают, что NapA подавляет половое развитие и необходим для экспрессии генов, возможно, гена поликетидсинтетазы, связанного с синтезом клейстотециального меланина. Когда были определены уровни конидиации, мы обнаружили, что мутант Δ napA продуцирует половину конидий штамма WT (рис. 6), что указывает на то, что NapA играет роль в процессе конидиации.Мы также исследовали уровни конидиации одинарных, двойных и тройных мутантов пероксиредоксина. Как показано на рисунке 6, инактивация gpxA и tpxB оказала очень незначительное влияние на конидиацию. Напротив, инактивация tpxA снижала конидиацию до уровней, сходных с наблюдаемыми у мутантов Δ gpxA Δ tpxA Δ tpxB и Δ napA . Кроме того, четверка Δ gpxA Δ tpxA Δ tpxB Δ Napa мутантные показали число conidiation несколько выше, чем те, в одном Д tpxA и Δ Napa мутанты, указывая, что функции TpxA и Napa в conidiation не являются аддитивными и, следовательно, предполагают, что эти два белка работают по одному и тому же пути конидиации.Примечательно, что ортологов tpxA индуцируются H 2 O 2 и регулируются гомологами NapA AfYap1 и Bap1 в A. fumigatus (Lessing et al., 2007) и Botrytis ), соответственно. Эти результаты предполагают, что TpxA играет независимую и зависимую от NapA роль в устойчивости к окислительному стрессу и конидиации соответственно.

Рисунок 5. NapA регулирует половое развитие. (A) Делеция napA вызывает преждевременное половое развитие.Конидии из штаммов CLK43 (WT) или CFL7 (Δ napA ) выращивали и индуцировали для полового развития, как сообщалось (Kawasaki et al., 2002). Общее количество клейстотеций на фиксированную площадь подсчитывали под микроскопом для вскрытия и использовали для расчета клейстотеций на см 2 . Столбцы представляют собой стандартную ошибку среднего (SEM). (Б) Клейстотеции 3, 5 и 8 дня эксперимента в (А) были выделены и сфотографированы под препаровальным микроскопом. (C) У мутантов Δ napA развиваются непигментированные клейстотеции, содержащие пигментированные аскоспоры. Клейстотеции WT и Δ napA (Cl) из 5-дневных культур измельчали ​​и фотографировали под микроскопом. Квадратные области на каждом снимке показывают увеличение асков и аскоспор.

Рисунок 6. NapA и TpxA необходимы для нормального бесполого развития . Бесполые споры (1×10 3 ) из штаммов CLK43 (WT), CFL7 (Δ napA ), САМ13 (Δ tpxA ), САМ11 (Δ gpxA ), САМ11 (Δ gpx9B), САМ11 (Δ gpx9B) (Δ GPXA Δ TPXA δ TPXA δ TPXB ), CAM16 (δ GPXA δ TPXA δ TPXB δ NAPA ), CAM17 (δ ALCA ) и CAM18 (δ ALCA Δ napA ), инокулировали на ММ с добавками и инкубировали при 37°C в течение 4 дней.Все конидии собирали и подсчитывали. Столбцы указывают стандартное отклонение от трех независимых экспериментов.

NapA необходим для регуляции генов в конидиях

Чтобы выяснить роль NapA в производстве полностью функциональных конидий, мы решили провести транскриптомный анализ. Для этого мы выделили тотальную РНК из Δ napA и интактных конидий WT из 6-дневных колоний. Два независимых образца от каждого штамма (биологические повторы) обрабатывали для синтеза кДНК и секвенирования ДНК с использованием платформы Illumina.Было получено в среднем 10168 прочтений по 72 п.н. на образец, что составляет почти 96,3% длин генома A. nidulans на образец. Два биологических повтора показали хороший уровень корреляции (r_0,966 для WT и r_0,968 для Δ napA ), а анализ основных компонентов показал четкое разделение между Δ napA и образцами WT. Результаты показывают изменения в экспрессии 284 генов с различиями logFC выше 1,5, но ниже 2 (таблица S4) и 214 генов с изменениями logFC выше 2 (таблицы 1, 2).Последующий анализ будет основан в основном на этих 214 генах, из которых 13 генов регулировались с повышением, а 201 ген с пониженной регуляцией в конидиях Δ napA по сравнению с конидиями WT. Используя анализ обогащения генной онтологии (GO), базу данных генома Aspergillus AspGD (Cerqueira et al., 2014) и ручные аннотации, мы сгруппировали гены, регулируемые NapA, как показано в таблицах 1, 2.

Таблица 1. Регулируемые транскрипты в Δ napA конидии .

Таблица 2. Транскрипты с пониженной регуляцией в конидиях Δ napA .

Наши результаты показывают, что число генов, отрицательно регулируемых NapA, невелико (13) по сравнению с числом генов, положительно регулируемых NapA (201). Среди генов, наиболее сильно репрессируемых NapA, есть предполагаемый HET (гетерокарионная несовместимость), содержащий доменный белок AN7834, богатый цистеином секретируемый белок AN7836 и предполагаемый переносчик ABC AN7839, который, по-видимому, представляет собой единственный переносчик ABC-типа, регулируемый NapA.Кроме того, в эту группу входят гены 3 дополнительных предполагаемых транспортеров (тип MSF), 2 оксидоредуктаз, 1 гидролазы, 1 ацетилтрансферазы, 1 белка с доменом нуклеозидфосфорилазы и 2 белков без идентифицируемых доменов (рис. 7А, таблица 1).

Рисунок 7. NapA необходим для регуляции генов в бесполых спорах . Транскриптомный анализ показывает, что NapA необходим для негативной регуляции по крайней мере 13 генов (A) и позитивной регуляции по крайней мере 201 гена (B) в конидиях. (C) Подтверждение NapA-зависимой экспрессии генов утилизации этанола во время конидиации с помощью количественной ПЦР. Гены alcA, aldA и alcR использовали для подтверждения результатов транскриптома конидий. Экспрессию гена нормализовали по уровням транскриптов гистонов h3B. Данные представляют собой средние значения трех независимых биологических повторов. Столбцы представляют собой стандартное отклонение (SD).

Среди 201 гена, положительно регулируемого NapA (рис. 7B, таблица 2), 12 кодируют предполагаемые (TF), еще не охарактеризованные в A.nidulans , большинство из которых принадлежит к семейству ДНК-связывающих доменов Zn(2)-Cys(6). Примечательно, что 46 генов кодируют различные типы оксидоредуктаз, включая множественные монооксигеназы, дегидрогеназы, несколько членов семейства цитохромных ферментов P450, детоксицирующих лекарственные средства, и каталазу-пероксидазу CatD/CpeA (AN7388). Другие гены кодируют белки с липазной, пептидазной и другими гидролитическими активностями. 32 гена кодируют предполагаемые мембранные белки, участвующие в транспорте сахаров, лекарств, аминокислот, металлов или других метаболитов, 21 из которых являются членами главного суперсемейства фасилитаторов (MSF).29 генов кодируют белки с предсказанной или подтвержденной активностью гидролитических ферментов. Примечательно, что некоторые из них связаны с гидролизом сложных углеводов растительной клеточной стенки, таких как предполагаемая кутиназа AN10346, альфа-амилаза AN3402, эндо-бета-1,6-глюканаза AN3777, ксиланаза AN3613, эндо-полигалактуроназа AN6656, ксилозидаза AN7275. , бета-1,4-эндоглюканаза AN2388, в то время как ксилоза индуцируемая альфа-галактозидаза AGLC / AN8138, ALPA-XYLOSIDASE AGDD / AN7505, предполагаемая бета-глюкозидаза BGLH / AN3903, предполагаемая альфа-амилаза AMYC / AN4507 были обнаружены как NapA, регулируемые значениями logFC от 2 до 1.5 (таблица 2 и таблица S4). Другие гидролазы, такие как предполагаемые бета-лактамазы AN5422 и AN1826, могут быть связаны с деградацией антибиотиков.

Двадцать восемь генов кодируют белки, которые имеют узнаваемые домены, но не принадлежат к предыдущим категориям. Среди них AN2587 демонстрирует самое высокое значение LogFC (8,7) и кодирует предполагаемый мембранный белок с богатым цистеином доменом CFEM, недавно показано, что он участвует в приобретении гема Fe 3+ (Nasser et al., 2016). Это, а также тот факт, что NapA также регулирует редуктазу железа AN7981, предполагаемый гем-связывающий белок AN2778 и гены NRPS SidC (AN0607, биосинтез сидерофоров; таблица S4), подтверждает роль NapA в приобретении железа.Также следует отметить регуляцию NapA нескольких генов, участвующих в биосинтезе вторичных метаболитов (таблицы 2 и таблица S4), таких как стеригматоцистин ( stcU /AN7806), пенициллин ( ipnA /AN2622), монодиктифенон и пренилксантоны (Bok et al., 2009; Sanchez et al., 2011; Andersen et al., 2013) ( xptB /AN12402, mdpB /AN10049, mdpC /AN0146 и mdpD /AN0146 и mdpD

9bial), все с выраженной антимикробной активностью . Другие гены участвуют в биосинтезе аперфуранона ( afoE/ AN1034) или неизвестных метаболитов (PKS AN11191).Напротив, сообщалось, что NapA подавляет продукцию вторичных метаболитов у A. parasiticus (Reverberi et al., 2008) и A. nidulans (Yin et al., 2013) в условиях выращивания, что позволяет предположить, что NapA регулирует вторичный метаболизм противоположными путями во время роста и конидиации. Наконец, NapA регулирует по меньшей мере 54 гена, кодирующих гипотетические белки без узнаваемых доменов (рис. 7В, табл. 2).

Таким образом, наши транскриптомные результаты подтверждают модель, в которой во время конидиации NapA регулирует функции, связанные с успешным прорастанием конидий в естественных условиях.В случае сапрофитного образа жизни A. nidulans это будет включать большую группу ферментов для расщепления растительных сложных углеводов, белков для транспорта соответствующих производных сахаров и ферментов, необходимых для их преобразования в ацетил-КоА. NapA также регулирует производство вторичных метаболитов, таких как пенициллин, который предотвращает рост конкурирующих организмов, а также ферментов и транспортеров для детоксикации препаратов, производимых конкурентами. В том же ряду NapA регулирует ферменты и белки, участвующие в очистке железа, такие как те, которые участвуют в биосинтезе сидерофоров, восстановлении и транспорте железа и приобретении гема.Поскольку такие функции также важны во время патогенных взаимодействий, мы предполагаем, что они, а не роли NapA в детоксикации АФК, могут иметь отношение к критическим вирулентным ролям NapA (Molina and Kahmann, 2007; Guo et al., 2011; Huang et al., 2011). ), особенно когда конидии опосредуют инфекционный процесс.

NapA требуется для

alc Экспрессия генов и использование этанола, арабинозы и фруктозы в качестве единственных источников углерода

Мы обратили наше внимание на то, что уровни мРНК генов alcR (AN8978; таблица S4), alcA (AN8979), alcU (AN8982; таблица S4) и aldA (AN0554), всех членов хорошо -исследованной этанольной системы (Fillinger, Felenbok, 1996), были четко восстановлены в конидиях Δ napA .Этанольная система состоит из генов alcP, alcR, alcO, alcA, alcM, alcS и alcU , все сгруппированы в хромосоме VII, а aldA расположены в хромосоме VIII. Гены alc имеют одинаковую регуляцию, сильно индуцируемую физиологическим индуктором ацетальдегидом и нефизиологическим индуктором 2-бутаноном (Flipphi et al., 2002). Они также находятся под строгим контролем транскрипционного активатора AlcR и репрессируются глюкозой через репрессор CreA (Fillinger and Felenbok, 1996).Однако только AlcR, алкогольдегидрогеназа I AlcA и альдегиддегидрогеназа AldA необходимы для утилизации этанола, а специфическая функция других генов alc неизвестна. Тем не менее, AlcS является мембранным белком, гомологичным транспортерам ацетата, который, тем не менее, незаменим для роста на этаноле, ацетальдегиде или ацетате (Flipphi et al., 2006). Поэтому мы решили подтвердить результаты экспрессии alcR, alcA и aldA с помощью количественной ПЦР. Результаты на рис. 7C показывают, что действительно накопление соответствующих мРНК в конидиях зависит от NapA.

Чтобы проверить физиологическое значение опосредованной NapA регуляции гена alc , мы исследовали способность мутантов Δ napA расти на этаноле в качестве единственного источника углерода. В качестве контроля мы включили мутант creA d 204 , который демонстрирует дерепрессированную экспрессию alcA в присутствии глюкозы (Shroff et al., 1996). Поскольку AlcA превращает аллиловый спирт (AA) в токсичное соединение акролеин, этот мутант creA не может расти на глюкозе плюс AA (рис. 8A, B).Примечательно, что конидии и мицелий Δ napA не могли расти на этаноле, что поддерживало функцию NapA в правильной экспрессии alcA . Однако мутант Δ napA также не мог расти на глюкозе плюс АК (рис. 8А, В). AA/акролеин вызывает окислительный стресс и индуцирует активацию Yap1 у S. cerevisiae (Kwolek-Mirek et al., 2009; Golla et al., 2015), и поэтому он может оказаться особенно токсичным для мутанта Δ napA . Чтобы проверить это, мы создали мутанты Δ alcA и Δ napA Δ alcA и исследовали их на использование этанола и устойчивость к АК.Как видно на фигуре 8C, мутант Δ alcA не чувствителен к H 2 O 2 , не способен расти на этаноле и полностью устойчив к АК. Напротив, мутант Δ napA Δ alcA чувствителен к H 2 O 2 , неспособен расти на этаноле и более чувствителен к АК, чем мутант Δ alcA , что подтверждает идею о том, что 8 nap A мутантов сами по себе более чувствительны к АА. Отсутствие роста в 1% этаноле не устранялось присутствием антиоксиданта N-ацетилцистеина (5 мМ), что позволяет предположить, что такое нарушение связано со сниженной экспрессией генов alc .Однако нельзя исключать, что это может быть связано и с повышенной чувствительностью к этанолу мутантов Δ napA . Таким образом, эти результаты показывают, что NapA необходим для экспрессии регулона alc во время бесполого развития и для роста на этаноле, добавляя новый уровень регуляции к этому хорошо известному пути.

Рисунок 8. NapA необходим для утилизации этанола и устойчивости к аллиловому спирту. (A) Конидии (1 × 10 3 ) из штаммов CLK43 (WT), CFL7 (Δ napA ) и Mh540 ( creA d

894) инокулировали на чашки с добавлением ММ 1% глюкозы, 1% этанола или 1% глюкозы плюс 5 мМ аллилового спирта (АА) и инкубировали при 37°С в течение 4 дней. (Б) Мицелиальные пробки, срезанные с края роста 5-дневных колоний штаммов (А) , переносили на указанные среды и инкубировали при 37°С в течение 4 сут. (В) Конидии (1 × 10 3 ) из штаммов CLK43 (WT), CFL7 (Δ napA ), САМ17 (Δ alcA ) и САМ18 (Δ alcA ) были 09 nap 8 9089 8 инокулировали на чашки с добавками MM, содержащие либо H 2 O 2 в указанных концентрациях, либо 1% глюкозы (MM), 1% этанола или 1% глюкозы плюс 5 мМ аллилового спирта (AA), и инкубировали при 37°C в течение 4 дней.

Эти результаты побудили нас определить, необходимы ли NapA и ТФ SrrA и AtfA для прорастания и роста конидий на этаноле или других альтернативных источниках углерода. Как видно на рисунке 9, NapA также необходим для утилизации арабинозы и фруктозы, в то время как SrrA частично требуется для утилизации глицерина, а AtfA не требуется для утилизации всех протестированных источников углерода. Эти результаты показывают, что NapA играет важную роль в использовании альтернативных глюкозе источников углерода.

Рисунок 9. NapA также необходим для использования арабинозы и фруктозы в качестве единственных источников углерода . Конидии (1×10 3 ) из штаммов CLK43 (WT), COSsrrA3 (Δ srrA ), CFL7 (Δ napA ), TFLΔatfA-04 (Δ atfA ), 90Δf at

NAPA
), CAM6 (δ SRRA δ NAPA ), CAM8 (δ SRRA δ ATFA) и CAM9 (δ SRRA δ ATFA δ NAPA ) были инокулированы на добавленные мм пластины содержащие глюкозу (Glu), арабинозу (Ara), фруктозу (Fruct), галактозу (Gal), ацетат натрия (AcNa), треонин (Thre) или 1% глицерина (Gly) в качестве единственных источников углерода и инкубировали при 37°C в течение 4 дня.

NapA локализуется в ядрах во время роста в этаноле или глюкозном голодании

Обнаружив, что NapA необходим для правильного роста арабинозы и фруктозы, мы исследовали локализацию NapA во время роста в бедных источниках углерода, а также во время глюкозного голодания. Результаты на фиг. 10 показывают, что, поскольку это происходит во время роста в глюкозе, экспрессия NapA очень низка во время роста в арабинозе и фруктозе как единственных источниках углерода. Напротив, экспрессия NapA::GFP индуцировалась во время роста в этаноле, а также во время голодания по глюкозе, а ядерная локализация NapA::GFP обнаруживалась между 60 и 120 минутами после перехода на среду без этанола или глюкозы.Кроме того, мы обнаружили, что обработка осмотического стресса 1 М NaCl способна индуцировать ядерную локализацию NapA при нормальных условиях роста глюкозы (рис. S7), несмотря на тот факт, что мутанты Δ napA не чувствительны к осмотическому стрессу.

Рисунок 10. Глюкозное голодание индуцирует ядерную локализацию NapA . NapA не накапливается в ядрах во время роста на арабинозе или фруктозе как единственных источниках углерода, но накапливается в ядрах во время глюкозного голодания.Конидии из штамма САМ20 (NapA::GFP) выращивали в течение 18 ч в ММ при 37°С, а затем мицелий переносили на ММ с глюкозой или без нее, с фруктозой или глицерином в качестве источника углерода в течение указанного времени (0–120 мин). Образцы мицелия наблюдали in vivo и фотографировали каждые 60 минут с помощью эпифлуоресцентной микроскопии. Нижняя панель показывает ядра (DAPI) и флуоресценцию NapA::GFP в мицелии, голодающем по глюкозе в течение 120 мин, зафиксированные и сфотографированные. Квадраты большего размера на каждом изображении показывают увеличение площадей, обозначенных квадратиками меньшего размера.

Обсуждение

AtfA, SrrA и NapA играют неповторяющиеся и дифференцированные роли в антиоксидантной реакции

По крайней мере три пути, опосредованные ТФ, AtfA, SrrA и NapA, участвуют в ответах грибов на окислительный и другие типы стресса, и мы изучили их здесь в одном и том же организме. Мы сообщили, что четыре каталазы, присутствующие в A. nidulans , проявляют дифференциальную регуляцию во время роста, стресса и развития (Navarro et al., 1996; Navarro and Aguirre, 1998; Kawasaki and Aguirre, 2001).Примечательно, что каталаза CatA обнаруживается только в бесполых и половых спорах, несмотря на то, что мРНК catA накапливается при многих стрессовых условиях (Navarro, Aguirre, 1998; Lara-Rojas et al., 2011). Наши результаты здесь показывают, что TF, AtfA, SrrA и NapA являются важными компонентами в такой регуляции гена каталазы. NapA и SrrA оба необходимы для индукции CatB с помощью H 2 O 2 , только AtfA требуется для экспрессии CatA в конидиях, и ни один из них не требуется для индукции CatB во время поздней стационарной фазы роста, в то время как уровни активности CatD/CpeA находятся под влиянием SrrA.Фенотипический анализ устойчивости к окислительному стрессу с использованием одиночных, двойных и тройных мутантов Δ napA , Δ srrA и Δ atfA также показал, что ТФ NapA, SrrA и AtfA играют различную роль в устойчивости к окислительному стрессу.

Функции Ap1-подобных ТФ у разных грибов обнаруживают как сходство, так и различия. Например, в отличие от наших результатов, делеция yapA у симбиотического гриба Epichloë festucae вызывает чувствительность к H 2 O 2 и t -BOOH в конидиях, но не в мицелиях и YapA, вместо AtfA, необходим для экспрессии специфичной для спор каталазы CatA (Cartwright and Scott, 2013).Сообщалось, что мутанты Neurospora crassa , лишенные гомолога NapA NcAp-1 , не проявляют чувствительности к осмотическому стрессу и имеют лишь небольшую чувствительность к H 2 O 2 (Takahashi et al., 2010), хотя недавняя работа показала что мутанты были чувствительны к осмотическому стрессу, кадмию и H 2 O 2 (Tian et al., 2011). В Magnaporthe oryzae инактивация гомолога NapA MoAP1 вызывает лишь умеренную чувствительность к H 2 O 2 (Guo et al., 2011), тогда как нулевые мутанты Ustilago maydis yap1 чувствительны к H 2 O 2 , и их вирулентность значительно снижена (Molina and Kahmann, 2007). Нуль-мутанты A. fumigatus, yap1 также чувствительны к H 2 O 2 и менадиону, но не обладают патогенностью (Lessing et al., 2007).

Как и в случае Yap1 и Pap1, активация гомологов NapA с помощью H 2 O 2 приводит к накоплению ядер у всех мицелиальных грибов, где это было изучено, и у U.maydis было показано, что два консервативных цистеина Yap1 (Cys-399 и Cys-407) имеют решающее значение как для ядерного накопления, так и для функциональности (Molina and Kahmann, 2007). Дополнительный уровень редокс-регуляции был предложен у A. nidulans , где CCAAT-связывающий комплекс (CBC) репрессирует экспрессию napA при низких уровнях ROS, в то время как высокие уровни ROS приводят к окислению двух цистеинов в субъединице HapC CBC, и активация транскрипции napA (Thön et al., 2010). Мы обнаружили, что в дополнение к H 2 O 2 и менадиону, осмотический стресс (рис. S7), стресс от глюкозного голодания и рост на этаноле также индуцировали ядерную локализацию NapA, подтверждая идею о том, что различные типы стресса могут приводить к окислительному стрессу. стресс (Hansberg and Aguirre, 1990).

Функция пероксиредоксинов GpxA, TpxA и TpxB в антиоксидантной реакции и конидиации

Мы проанализировали роль гомологов пероксиредоксина Gpx3 GpxA и гомологов Tpx1 TpxA и TpxB в антиоксидантных функциях NapA и функциях развития.Мы обнаружили, что ни один из этих пероксиредоксинов не требуется для устойчивости к H 2 O 2 или менадиона и, следовательно, не требуется для активации NapA. Это согласуется с результатами исследования E. festucae , где пероксиредоксины Gpx3 (GpxA) и Tpx1 (TpxA) не были необходимы для накопления ядер, индуцированного YapA H 2 O 2 (Cartwright and Scott, 2013). Напротив, мутантов M. oryzae , лишенных функционального гомолога Gpx3 MoHYR1, чувствительны к H 2 O 2 , не экспрессируют несколько генов, связанных с антиоксидантным ответом, и проявляют пониженную вирулентность.Однако первоначальные данные, показывающие, что мутанты MoYap1 и не подвержены влиянию патогенности, указывают на то, что функции MoHYR1 в отношении вирулентности не опосредованы MoYap1 (Huang et al., 2011). У A. fumigatus AfYap1 также накапливается в ядрах в ответ на H 2 O 2 , и, в частности, гомологу GpxA AspF3 и TpxA требуется AfYap1 для его H 2 O 2 -опосредованной индукции и др. ., 2007). Эти и наши результаты предполагают, что NapA может быть необходим для H 2 O 2 -индуцированной экспрессии gpxA, tpxA и tpxB .На незначительную прямую или косвенную роль этих пероксиредоксинов в детоксикации H 2 O 2 указывает тот факт, что на фоне Δ napA одновременная инактивация Gpx3, TpxA и TpxB приводила к повышенной чувствительности к H . 2 О 2 . Наши результаты предполагают, что TpxA и NapA регулируют конидиацию одним и тем же путем. Одна возможность заключается в том, что NapA опосредует индукцию TpxA во время конидиации, хотя мы не обнаружили мРНК tpxA в наших транскриптомных экспериментах, а TpxA, в свою очередь, может регулировать др. активности, необходимые для полной споруляции.

NapA регулирует развитие

Мы сообщили, что регулируемое производство АФК необходимо для полового развития грибов (Lara-Ortíz et al., 2003; Cano-Domínguez et al., 2008), что продемонстрировано у нескольких грибов (Malagnac et al., 2004; Siegmund и др., 2013; Диршнабель и др., 2014). Помимо своей роли в антиоксидантном ответе, AtfA и SrrA играют разные роли в регуляции генов во время развития. AtfA опосредует роль SakA в половом развитии и конидиальной жизнеспособности (Kawasaki et al., 2002; Lara-Rojas et al., 2011), в то время как SrrA необходим для нормальной конидиации и жизнеспособности конидиев (Vargas-Perez et al., 2007). Сообщаемые здесь результаты раскрывают новую роль NapA в развитии, показывая, что NapA подавляет половое развитие и необходим для полной конидии, а также для накопления множественных мРНК в конидиях. Потребность в повышенных уровнях АФК во время полового развития согласуется с тем фактом, что мутанты Δ napA демонстрируют повышенную продукцию плодовых тел, поскольку NapA необходим для поддержания низких уровней АФК и для экспрессии генов, участвующих в биосинтезе клейстотециального меланина, известный антиоксидант.

Меньшая конидиация, наблюдаемая у мутантов Δ napA , может быть связана с их более низкой экспрессией гена gmcA (AN8547), кодирующего предполагаемую глюкозо-метанол-холиноксидоредуктазу, необходимую для ранних стадий развития конидиофоров (Etxebeste et al., 2012). ). Тот факт, что ортолог GmcA AFUA_3G01580 также индуцируется H 2 O 2 AfYap1-зависимым образом в A. fumigatus (Lessing et al., 2007), предполагает, что gmcA регулируется NapA. по крайней мере, у аспергиллов.Более того, роли NapA в развитии могут сохраняться у грибов. У M. oryzae делеция MoAP1 вызывает лишь умеренную чувствительность к H 2 O 2 , но мутанты демонстрируют резкое снижение образования воздушного мицелия и конидиации. Примечательно, что те же фенотипы наблюдаются у мутантов, затронутых регулируемыми MoAP1 генами MGG_01230 и MGG_15157, кодирующими янтарно-полуальдегиддегидрогеназу MoSsadh и ацетилтрансферазу MoAct соответственно (Guo et al., 2011), которые, однако, мы не определили как NapA-зависимые.У диморфного гриба Talaromyces marneffei , мутанты yapA чувствительны к H 2 O 2 и менадиону, демонстрируют снижение радиального роста, продуцируют конидиофоры с меньшим количеством фиалидов и конидий, а конидии демонстрируют пониженную скорость прорастания, в то время как дрожжевые клетки не подвергаются бинарному делению (Dankai et al., 2016). В целом роль ТФ в развитии, долгое время связанная только с детоксикацией АФК, подтверждает роль АФК в качестве сигналов развития (Hansberg and Aguirre, 1990; Aguirre et al., 2005).

Гены, регулируемые NapA во время бесполого развития

Сравнение между Ap1-подобными зависимыми регулонами при стрессе H 2 O 2 показывает общие черты у разных грибов. Анализ ДНК-микрочипов yap1 -зависимых генов в U. maydis выявил 221 даун-регулируемый ген с кратностью изменения >1,5, включая гены ферментов, разлагающих АФК, и ферментов, участвующих в биосинтезе низкомолекулярных антиоксидантов и образовании НАДФН (Molina и Кахманн, 2007).Сходным образом у Cochliobulus heterostrophus CHAP1-зависимые гены включали гены тиоредоксинредуктазы, γ-глутамилцистеинсинтетазы, глутатионредуктазы, глутатионсинтетазы и тиоредоксина (Lev et al., 2005). У B. cinerea было обнаружено, что гены каталазы C, тиоредоксинредуктазы, глутаредоксина, глутатион-S-трансферазы1, тиоредоксина и гипотетической глутатион-S-трансферазы являются Bap1-зависимыми (Temme and Tudzynski, 2009), и аналогичная картина была наблюдается в A . fumigatus (Lessing et al., 2007).

В целом, такая относительно консервативная H 2 O 2 -индуцированная Ap1-опосредованная экспрессия генов отличается от той, которую мы наблюдаем во время конидиации. Действительно, мы не находим генов, участвующих в основных путях образования NADPH или GSH. Вместо этого мы находим большое количество генов, участвующих в оттоке лекарств и детоксикации, включая несколько генов ферментов с предполагаемой активностью цитохрома Р450, а также других оксидаз.Примечательно, что Yap1 (Lee et al., 1999) и Pap1 (Chen et al., 2008) регулируют гены, кодирующие насосы оттока и дегидрогеназы, которые необходимы для защиты от многих лекарств. Фактически, pap1 был впервые идентифицирован как ген, сверхэкспрессия которого придает устойчивость к таким препаратам, как брефельдин А, стауроспорин или кофеин (Toda et al., 1991). Кроме того, Кальво и соавт. (2012) показали, что в ответ на H 2 O 2 Pap1 требуется фактор транскрипции Prr1 для активации антиоксидантных, но не генов лекарственной толерантности, обеспечивая возможный механизм, объясняющий основную роль, которую NapA играет в регуляции гены лекарственной толерантности при конидиации.Действительно, возможность того, что NapA играет перекрывающиеся, но разные функции во время окислительного стресса, конидиации и полового развития, заслуживает дальнейшего изучения.

Среди NapA-зависимых генов мы также идентифицировали двух членов надсемейства купинов, которое включает металлозависимые и независимые ферменты, а также каталитически неактивные белки, связанные с абиотическим стрессом и покоящимися структурами. AN8614 кодирует однодоменный купин, состоящий из 153 аминокислот, проявляющий сходство с зародышами и оксалатоксидазами (Dunwell et al., 2000), некоторые из которых неожиданно проявляют также активность супероксиддисмутазы (Woo et al., 2000). AN8368 кодирует белок из 305 аминокислот, идентифицированный как белок, подобный сферулину 4. Мы обнаружили, что AN8368 является ортологом AN2952 и A. fumigatus и A. clavatus Sph4, которые соответствуют гликозидгидролазе, необходимой для биосинтеза экзополисахарида галактозаминогалактана (Bamford et al., 2015).

Роль NapA в катаболизме углерода

Конидии и мицелий из мутантов Δ napA неспособны расти на этаноле и арабинозе и демонстрируют сниженный рост на фруктозе как единственных источниках углерода.Дерепрессия alcA во время конидиации наблюдалась ранее у дефектных по конидиации мутантов, несущих аллели пораженного гена, слитые с промотором alcA (Arratia-Quijada et al., 2012). Отсутствие роста на этаноле можно хотя бы частично объяснить тем, что NapA необходим для полной экспрессии генов alcR, alcA и aldA во время конидиации и, предположительно, также во время роста мицелия. Поскольку NapA необходим для нормальной экспрессии AlcR, а этот TF необходим для его собственной транскрипции, кажется вероятным, что AlcR опосредует регуляцию alcP, alcA, alcM, alcS и aldA , осуществляемую NapA.В этом сценарии полная экспрессия alcR может потребовать дерепрессии CreA, активации с помощью NapA, а также аутоиндукции AlcR. Тот факт, что промотор alcR содержит предполагаемые сайты связывания Ap1, согласуется с этой интерпретацией. Кажется маловероятным, что CreA подавляет экспрессию napA , потому что антиоксидантная функция NapA должна быть необходима при нормальном метаболизме глюкозы. Кроме того, CREA D 204 204 мутантов не показывают повышенную устойчивость к H 2 O 2 и анализ QPCR не показали увеличенные уровни мРНК NAPA в Conidia от CREA d 204 мутант по сравнению с конидиями дикого типа (не показаны).Три линии доказательств указывают на то, что утилизация этанола представляет собой состояние, при котором антиоксидантная роль NapA становится более важной. Во-первых, NapA необходим для полной экспрессии большинства генов alc во время конидиации. Во-вторых, рост этанола индуцирует экспрессию napA и локализацию NapA в ядре. В-третьих, NapA необходим для роста в этаноле. Имеющиеся данные указывают на то, что токсичность этанола опосредована ацетальдегидом, продуктом AlcA, который сам по себе может вызывать окислительный стресс. Интересно, что считалось маловероятным, что катаболизм этанола сам по себе требует столь высоких уровней экспрессии и тонкой регуляции генов alc (Flipphi et al., 2006). Мы добавили еще один уровень регуляции, который может помочь понять физиологическое значение этой сложной регуляции.

Потребность NapA в использовании арабинозы и фруктозы может быть объяснена на разных уровнях. Во-первых, NapA необходим для накопления транскриптов xylitol/sorbitol dehydrogenase (AN2666) в конидиях и, возможно, в мицелиях. AN2666 на 52% идентичен ферменту A. niger XdhA, который участвует в превращении ксилита в D-ксилулозу во время метаболизма арабинозы (de Groot et al., 2007). Ксилитол/сорбитолдегидрогеназа также на 77% идентична SdhA, ферменту, участвующему в обратимом превращении фруктозы в сорбит (Koivistoinen et al., 2012). Это говорит о том, что AN2666 участвует в ассимиляции фруктозы и необходим для ассимиляции арабинозы. Кроме того, транспорт арабинозы и/или фруктозы может быть нарушен у мутантов Δ napA , учитывая, что NapA регулирует несколько генов, кодирующих белки с транспортной активностью. Среди них AN10891 и AN2665 кодируют белки, которые на 28 и 26% идентичны B.cinerea специфический переносчик фруктозы FRT1 (Doehlemann et al., 2005). Во-вторых, метаболизм арабинозы и фруктозы имеет некоторые общие этапы регуляции. Активаторы транскрипции Aspergilli AraR, GalR и XilR регулируют метаболическое превращение L-арабинозы, D-галактозы и D-ксилозы соответственно. Недавний отчет показывает, что как AraR, так и XlnR регулируют гены катаболизма пентозы, а также оксидоредуктивный катаболический путь D-галактозы (Kowalczyk et al., 2015). Однако интересно, что мутанты, лишенные как AraR, так и XlnR, по-прежнему обнаруживают заметный рост на арабинозе, что указывает на участие дополнительных регуляторных механизмов.Также интересно, что A. niger XlnR каким-то образом связан с метаболизмом АФК, поскольку нулевые мутанты xlnR чувствительны к окислительному стрессу и демонстрируют качественное увеличение уровней АФК (Raulo et al., 2016). В-третьих, гомологи NapA необходимы для экспрессии ферментов, участвующих в генерации клеточной восстановительной способности (NADPH, GSH и тиоредоксины). Хотя это не было обнаружено во время конидиации, во время роста мутантов A. nidulans Δ napA наблюдается пониженное отношение GSH/GSSG и значение 1.6-кратное снижение общего содержания глутатиона по сравнению со штаммом WT (Thön et al., 2010). Это согласуется с тем фактом, что мутанты Δ napA очень чувствительны к AA/акролеину, который, как известно, вызывает истощение GSH (Kwolek-Mirek et al., 2009). Такое снижение восстановительной способности может создать дополнительные трудности в катаболизации более требовательных к этим ресурсам источников углерода. Действительно, катаболизм этанола и арабинозы приводит к дисбалансу окислительно-восстановительных кофакторов (Seiboth and Metz, 2011).

Роль гомологов NapA в метаболизме углерода сохраняется у грибов. В S. cerevisiae участие Yap1 в ответ на углеродный стресс было предложено после того, как он был обнаружен в двухгибридных анализах в качестве взаимодействующего с субъединицей Sip2 киназы Snf1, необходимого для адаптации к ограничению глюкозы, и показал, что среда смещается от глюкозы в глицерин или в среду, лишенную глюкозы, индуцирует накопление ядер Yap1 (Wiatrowski and Carlson, 2003). Точно так же в году С.pombe глюкоза, но не азотное голодание, индуцирует ядерную локализацию Pap1 в процессе, который зависит от стресса MAPK Spc1/Sty1 (Madrid et al., 2004). Однако прямого участия Yap1 или NapA в утилизации углерода в этих случаях не показано.

В природе грибковые споры прорастают в средах, содержащих различные, часто бедные источники углерода, а также лекарства, вырабатываемые конкурирующими организмами или полученные из детрита. Кроме того, конидии содержат химические вещества и токсины, полученные в результате вторичного метаболизма, а также аутоингибиторы прорастания.Наши результаты подтверждают предположение о том, что окислительный стресс возникает во время конидиации и что NapA играет решающую роль в регуляции множества генов во время этого процесса. Хотя скорость прорастания конидий не снижается у мутантов Δ napA в лабораторных условиях, набор генов, регулируемых NapA во время конидии, предполагает, что они могут быть важны для прорастания спор в естественных гетерогенных средах.

Вклад авторов

JA: Спроектировал эксперименты, написал MS и получил финансирование.AM, FL и OS: Проведение и разработка экспериментов, участие в написании MS.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами CONACYT CB-2014-01-238492, Investigación en Fronteras de la Ciencia 2015-I-319 и PAPIIT-UNAM IN208916. AM получила докторскую стипендию от CONACYT, и эта работа является частью ее докторской диссертации.Д. Диссертация в качестве студента программы Maestría y Doctorado en Ciencias Bioquímicas в Национальном автономном университете Мексики. Мы благодарим отделы молекулярной биологии, имиджегенологии и компьютерных технологий IFC-UNAM. Мы также благодарим Рикардо Гранде, Веронику Хименес-Хасинто и Алехандро Санчес-Флорес за поддержку секвенирования и биоинформатики в рамках «Unidad de Secuención Masiva y Bioinformática» «Laboratorio Nacional de Apoyo Tecnológico a las Ciencias Genómicas», CONACyT #260481, в Институте биотехнологии/УНАМ.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/article/10.3389/fmicb.2017.00516/full#supplementary-material

.

Ссылки

Агирре Дж., Риос-Момберг М., Хьюитт Д. и Хансберг В. (2005). Активные формы кислорода и их развитие у микробных эукариот. Тенденции микробиол. 13, 111–118. doi: 10.1016/j.tim.2005.01.007

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Андерсен, М.R., Nielsen, J.B., Klitgaard, A., Petersen, L.M., Zachariasen, M., Hansen, T.J., et al. (2013). Точное предсказание кластеров генов вторичных метаболитов у мицелиальных грибов. Проц. Натл. акад. науч. США 110, E99–E107. doi: 10.1073/pnas.1205532110

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Араужо-Базан, Л., Фернандес-Мартинес, Дж., де лос Риос, В.М., Этчебест, О., Альбар, Дж.П., Пенальва, М.А., и др. (2008). NapA и NapB являются членами семейства Aspergillus nidulans Nap/SET, а NapB представляет собой ядерный белок, специфически взаимодействующий с импортином альфа. Генетика грибов. биол. 45, 278–291. doi: 10.1016/j.fgb.2007.08.003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Арратия-Кихада, Дж., Санчес, О., Скаццоккио, К., и Агирре, Дж. (2012). FlbD, фактор транскрипции Myb Aspergillus nidulans , уникальным образом участвует как в бесполой, так и в половой дифференцировке. Эукариот. Ячейка 11, 1132–1142. doi: 10.1128/EC.00101-12

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Асано, Ю., Хагивара Д., Ямашино Т. и Мизуно Т. (2007). Характеристика транскрипционного фактора NapA типа bZip в отношении реакции на окислительный стресс у Aspergillus nidulans . Биологи. Биотехнолог. Биохим. 71, 18:00–18:03. doi: 10.1271/bbb.70133

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бамфорд, Северная Каролина, Снарр, Б.Д., Гравелат, Ф.Н., Литтл, Д.Дж., Ли, М.Дж., Захариас, К.А., и соавт. (2015). Sph4 представляет собой гликозидгидролазу, необходимую для биосинтеза галактозаминогалактана в Aspergillus fumigatus . J. Biol. хим. 290, 27438–27450. doi: 10.1074/jbc.M115.679050

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Байрам О., Краппманн С., Ни М., Бок Дж. В., Хелмштадт К., Валериус О. и соавт. (2008). Комплекс VelB/VeA/LaeA координирует световой сигнал с развитием грибков и вторичным метаболизмом. Наука 320, 1504–1506. doi: 10.1126/science.1155888

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бок, Дж.В., Чанг, Ю.М., Шевчик, Э., Рейес-Домингес, Ю., Дэвидсон, А.Д., Санчес, Дж.Ф., и соавт. (2009). Регуляция кластеров биосинтетических генов на уровне хроматина. Нац. хим. биол. 5, 462–464. doi: 10.1038/nchembio.177

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бак, В., Куинн, Дж., Сото Пино, Т., Мартин, Х., Салдана, Дж., Макино, К., и др. (2001). Пероксидные сенсоры для активируемой стрессом митоген-активируемой протеинкиназы делящихся дрожжей. Мол.биол. Ячейка 12, 407–419. doi: 10.1091/mbc.12.2.407

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кальво, И. А., Гарсия, П., Айте, Дж., Идальго, Э. (2012). Факторы транскрипции Pap1 и Prr1 совместно активируют гены антиоксидантов, но не толерантности к лекарствам в ответ на H 2 O 2 . Рез. нуклеиновых кислот. 40, 4816–4824. doi: 10.1093/nar/gks141

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Кано-Домингес, Н., Альварес-Дельфин, К., Хансберг, В., и Агирре, Дж. (2008). НАДФН-оксидазы NOX-1 и NOX-2 нуждаются в регуляторной субъединице NOR-1 для контроля дифференцировки и роста клеток в Neurospora crassa . Эукариот. Ячейка 7, 1352–1361. doi: 10.1128/EC.00137-08

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Картрайт, Г. М., и Скотт, Б. (2013). Окислительно-восстановительная регуляция AP-1-подобного транскрипционного фактора YapA у грибкового симбионта Epichloe festucae . Эукариот. Ячейка 12, 13:35–13:48. doi: 10.1128/EC.00129-13

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Cerqueira, G.C., Arnaud, M.B., Inglis, D.O., Skrzypek, M.S., Binkley, G., Simison, M., et al. (2014). База данных генома аспергилл: курирование нескольких видов и включение данных RNA-Seq для улучшения аннотаций структурных генов. Рез. нуклеиновых кислот. 42, Д705–Д710. doi: 10.1093/nar/gkt1029

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чен, Д.R., Wilkinson, C.R.M., Watt, S., Penkett, C.J., Toone, W.M., Jones, N., et al. (2008). Множественные пути по-разному регулируют глобальные реакции на окислительный стресс у делящихся дрожжей. Мол. биол. Ячейка 19, 308–317. doi: 10.1091/mbc.E07-08-0735

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Dankai, W., Pongpom, M., Youngchim, S., Cooper, C.R. Jr., and Vanittanakom, N. (2016). yapA кодирует фактор транскрипции bZIP, участвующий в толерантности к стрессу у патогенного гриба Talaromyces marneffei . PLoS ONE 11:e0163778. doi: 10.1371/journal.pone.0163778

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Деголс Г. и Рассел П. (1997). Отдельные роли киназы Spc1 и фактора транскрипции Atf1 в УФ-ответе Schizosaccharomyces pombe . Мол. Клетка. биол. 17, 3356–3363. doi: 10.1128/MCB.17.6.3356

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Деголс Г., Шиодзаки К.и Рассел, П. (1996). Активация и регуляция активируемой стрессом протеинкиназы Spc1 у Schizosaccharomyces pombe . Мол. Клетка. биол. 16, 2870–2877. doi: 10.1128/MCB.16.6.2870

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

de Groot, M.J.L., van den Dool, C., Wösten, H.A.B., Levisson, M., vanKuyk, P.A., Ruijter, G.J.G., et al. (2007). Регуляция генов катаболического пути пентозы Aspergillus niger . Пищевая техника.Биотехнолог. 45, 134–138.

Академия Google

Делоне, А., Пфлигер, Д., Барро, М.Б., Винь, Дж., и Толедано, М.Б. (2002). Тиолпероксидаза является рецептором H 2 O 2 и редокс-преобразователем в активации генов. Сотовый 111, 471–481. doi: 10.1016/S0092-8674(02)01048-6

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Диршнабель, Д. Э., Новрузян, М., Кано-Домингес, Н., Агирре, Дж., Тейчерт, И.и Кюк, У. (2014). Новое понимание роли НАДФН-оксидаз в половом развитии и прорастании аскоспор у Sordaria macrospora . Генетика 196, 729–744. doi: 10.1534/genetics.113.159368

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дёлеманн, Г., Молитор, Ф., и Хан, М. (2005). Молекулярная и функциональная характеристика специфического переносчика фруктозы из серой плесени Botrytis cinerea . Генетика грибов.биол. 42, 601–610. doi: 10.1016/j.fgb.2005.03.001

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Данвелл, Дж. М., Хури, С., и Гейн, П. Дж. (2000). Микробные родственники запасных белков семян высших растений: сохранение структуры и разнообразие функций в ходе эволюции надсемейства купинов. Микробиолог. Мол. биол. Версия . 64, 153–179. doi: 10.1128/MMBR.64.1.153-179.2000

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Этхебесте, О., Herrero-García, E., Cortese, M.S., Garzia, A., Oiartzabal-Arano, E., de los Ríos, V., et al. (2012). GmcA является предполагаемой глюкозо-метанол-холиноксидоредуктазой, необходимой для индукции бесполого развития у Aspergillus nidulans . PLoS ONE 7:292. doi: 10.1371/journal.pone.0040292

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Филлинджер С. и Феленбок Б. (1996). Недавно идентифицированный кластер генов в Aspergillus nidulans включает пять новых генов, локализованных в области alc, которые контролируются как специфическим трансактиватором AlcR, так и общим репрессором углеродного катаболита CreA. Мол. микробиол. 20, 475–488. doi: 10.1046/j.1365-2958.1996.5301061.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Флипфи, М., Коциалковска, Дж., и Феленбок, Б. (2002). Характеристики физиологических индукторов пути утилизации этанола (alc) у Aspergillus nidulans . Биохим. J. 364, 25–31. дои: 10.1042/bj3640025

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Флипфи, М., Robellet, X., Dequier, E., Leschelle, X., Felenbok, B., and Vélot, C. (2006). Функциональный анализ alcS, гена кластера alc в Aspergillus nidulans . Генетика грибов. биол. 43, 247–260. doi: 10.1016/j.fgb.2005.12.008

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фурукава К., Хоши Ю., Маэда Т., Накадзима Т. и Абэ К. (2005). Aspergillus nidulans Путь HOG активируется только двухкомпонентным сигнальным путем в ответ на осмотический стресс. Мол. микробиол. 56, 1246–1261. doi: 10.1111/j.1365-2958.2005.04605.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Голла, У., Банди, Г., и Томар, Р.С. (2015). Молекулярные механизмы цитотоксичности аллилового спирта (акролеина) у почкующихся дрожжей. Хим. Рез. Токсикол. 28, 1246–1264. doi: 10.1021/acs.chemrestox.5b00071

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Го М., Чен Ю., Ду Ю., Донг Ю., Го В., Чжай С. и др. (2011). Фактор транскрипции bZIP MoAP1 опосредует ответ на окислительный стресс и имеет решающее значение для патогенности рисового пирикуляриоза Magnaporthe oryzae . Патог PLoS. 7:e1001302. doi: 10.1371/journal.ppat.1001302

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хагивара Д., Асано Ю., Маруи Дж., Йошими А., Мизуно Т. и Абэ К. (2009). Транскрипционное профилирование для сигнального пути Aspergillusnidulans HogA MAPK в ответ на флудиоксонил и осмотический стресс. Генетика грибов. биол. 46, 868–878. doi: 10.1016/j.fgb.2009.07.003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хагивара Д., Мацубаяси Ю., Маруи Дж., Фурукава К., Ямасино Т., Канамару К. и др. (2007). Характеристика гистидинкиназы NikA, участвующей в передаче сигнала фосфорелей Aspergillus nidulans , с особым упором на реакцию на фунгициды. Биологи. Биотехнолог. Биохим. 71, 844–847.doi: 10.1271/bbb.70051

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хан, К. Х., Пак, Дж. С., Че, К. С., и Хан, Д. М. (2010). Простая идентификация мутации veA1 в Aspergillus nidulans . J. Microbiol. 48, 885–887. doi: 10.1007/s12275-010-0506-y

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хан, К. Х., и Праде, Р. А. (2002). Связанное с осмотическим стрессом поддержание полярного роста у Aspergillus nidulans . Мол. микробиол. 43, 1065–1078. doi: 10.1046/j.1365-2958.2002.02774.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хансберг, В., и Агирре, Дж. (1990). Гипероксидантные состояния вызывают дифференцировку микробных клеток путем изоляции клеток от кислорода. Дж. Теор. биол. 142, 201–221. doi: 10.1016/S0022-5193(05)80222-X

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хилл, Т.В., и Кефер, Э. (2001). Улучшенные протоколы для минимальной среды Aspergillus: исходный раствор микроэлементов и минимальной среды. Генетика грибов. Newsl. 48, 20–21. дои: 10.4148/1941-4765.1173

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Хуанг, К., Чиммек, К.Дж., Каплан, Дж.Л., Свейгард, Дж.А., и Донофрио, Н.М. (2011). HYR1-опосредованная детоксикация активных форм кислорода необходима для полной вирулентности рисового пирикуляриоза. Патог PLoS. 7:e1001335. doi: 10.1371/journal.ppat.1001335

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кавасаки, Л.и Агирре, Дж. (2001). Множественные гены каталазы по-разному регулируются у Aspergillus nidulans . J. Бактериол. 183, 1434–1440. doi: 10.1128/JB.183.4.1434-1440.2001

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кавасаки, Л., Санчес, О., Шиодзаки, К., и Агирре, Дж. (2002). Киназа SakA MAP участвует в передаче сигнала стресса, половом развитии и жизнеспособности спор у Aspergillus nidulans . Мол. микробиол. 45, 1153–1163. doi: 10.1046/j.1365-2958.2002.03087.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кавасаки Л., Вайсонг Д., Даймонд Р. и Агирре Дж. (1997). Два дивергентных гена каталазы по-разному регулируются во время развития Aspergillus nidulans и окислительного стресса. J. Бактериол. 179, 3284–3292. doi: 10.1128/jb.179.10.3284-3292.1997

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ким, Х., Хан К., Ким К., Хан Д., Джанг К. и Че К. (2002). Ген veA активирует половое развитие у Aspergillus nidulans . Генетика грибов. биол. 37, 72–80. doi: 10.1016/S1087-1845(02)00029-4

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Койвистойнен О.М., Ричард П., Пенттиля М., Руохонен Л. и Мойзита Д. (2012). Сорбитолдегидрогеназа Aspergillus niger , SdhA, является частью оксидоредуктивного пути D-галактозы и необходима для катаболизма D-сорбита. Письмо ФЭБС. 586, 378–383. doi: 10.1016/j.febslet.2012.01.004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ковальчик, Дж. Э., Грубен, Б. С., Батталья, Э., Вибенга, А., Майор, Э., и де Врис, Р. П. (2015). Генетическое взаимодействие Aspergillus nidulans galR, xlnR и araR в регуляции высвобождения D-галактозы и L-арабинозы и экспрессии генов катаболизма. PLoS ONE 10:43200. doi: 10.1371/journal.pone.0143200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кволек-Мирек, М., Беднарска С., Бартош Г. и Билински Т. (2009). Токсичность акролеина связана с окислительным стрессом, вызванным истощением глутатиона в дрожжах Saccharomyces cerevisiae . Клеточная биология. Токсикол. 25, 363–378. doi: 10.1007/s10565-008-9090-x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лара-Ортис, Т., Риверос-Росас, Х., и Агирре, Дж. (2003). Активные формы кислорода, генерируемые микробной НАДФН-оксидазой NoxA, регулируют половое развитие у Aspergillus nidulans . Мол. микробиол. 50, 1241–1255. doi: 10.1046/j.1365-2958.2003.03800.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лара-Рохас Ф., Санчес О., Кавасаки Л. и Агирре Дж. (2011). Фактор транскрипции Aspergillus nidulans AtfA взаимодействует с MAPK SakA, регулируя общие реакции на стресс, развитие и функции спор. Мол. микробиол. 80, 436–454. doi: 10.1111/j.1365-2958.2011.07581.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, Дж., Godon, C., Lagniel, G., Spector, D., Garin, J., Labarre, J., et al. (1999). Yap1 и Skn7 контролируют два специализированных регулона реакции на окислительный стресс у дрожжей. J. Biol. хим. 274, 16040–16046. doi: 10.1074/jbc.274.23.16040

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лессинг Ф., Книмейер О., Возниок И., Леффлер Дж., Курзай О., Хартл А. и соавт. (2007). Регулятор транскрипции Aspergillus fumigatus AfYap1 представляет собой основной регулятор защиты от активных промежуточных соединений кислорода, но он необязателен для патогенности в модели интраназальной инфекции у мышей. Эукариот. Сотовый 6, 2290–2302. doi: 10.1128/EC.00267-07

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лев, С., Хадар, Р., Амедео, П., Бейкер, С.Е., Йодер, О.К., и Хорвиц, Б.А. (2005). Активация AP1-подобного фактора транскрипции патогена кукурузы Cochliobolus heterostrophus в ответ на окислительный стресс и сигналы растений. Эукариот. Ячейка 4, 443–454. doi: 10.1128/EC.4.2.443-454.2005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мадрид, М., Soto, T., Franco, A., Paredes, V., Vicente, J., Hidalgo, E., et al. (2004). Совместная роль Atf1 и Pap1 в детоксикации окислительного стресса, вызванного лишением глюкозы у Schizosaccharomyces pombe . J. Biol. хим. 279, 41594–41602. doi: 10.1074/jbc.M405509200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Маланьяк Ф., Лалюк Х., Лепер Г. и Силар П. (2004). Две изоформы НАДФН-оксидазы необходимы для полового размножения и прорастания аскоспор у нитчатого гриба Podospora anserina . Генетика грибов. биол. 41, 982–997. doi: 10.1016/j.fgb.2004.07.008

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Миллар, Дж. Б., Бак, В., и Уилкинсон, М. Г. (1995). Pyp1 и Pyp2 PTPases дефосфорилируют осмосенсорную MAP-киназу, контролирующую размер клеток при делении у делящихся дрожжей. Гены Дев. 9, 2117–2130. doi: 10.1101/gad.9.17.2117

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мой-Роули, У. С., Харшман, К.Д., и Паркер, К.С. (1989). YAP1 дрожжей кодирует новую форму семейства jun белков-активаторов транскрипции. Гены Дев. 3, 283–292. doi: 10.1101/gad.3.3.283

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Насер, Л., Вайсман, З., Пинский, М., Амартели, Х., Двир, Х., и Корницер, Д. (2016). Структурные основы приобретения гемового железа грибковыми патогенами. Нац. микробиол. 1:16156. doi: 10.1038/nmicrobiol.2016.156

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Наварро, Р.Э. и Агирре Дж. (1998). Посттранскрипционный контроль опосредует специфичную для типа клеток локализацию каталазы а во время развития Aspergillus nidulans . J. Бактериол. 180, 5733–5738.

Реферат PubMed | Академия Google

Наварро Р.Э., Стрингер М.А., Хансберг В., Тимберлейк В.Е. и Агирре Дж. (1996). catA, новый ген Aspergillus nidulans , кодирующий регулируемую в процессе развития каталазу. Курс. Жене. 29, 352–359.doi: 10.1007/s002940050056

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Наяк Т., Шевчик Э., Окли С.Е., Османи А., Укил Л., Мюррей С.Л. и соавт. (2006). Универсальная и эффективная система нацеливания на гены для Aspergillus nidulans . Генетика 172, 1557–1566. doi: 10.1534/genetics.105.052563

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Нгуен, А. Н., Ли, А., Плэйс, В., и Шиодзаки, К. (2000).Многоступенчатые фосфорелеобразные белки передают сигналы окислительного стресса протеинкиназе, активируемой стрессом делящихся дрожжей. Мол. биол. Ячейка 11, 1169–1181. doi: 10.1091/mbc.11.4.1169

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Нгуен, А. Н., и Шиодзаки, К. (1999). Вызванная тепловым шоком активация стресс-киназы MAP регулируется треонин- и тирозин-специфическими фосфатазами. Гены Дев. 13, 1653–1663. doi: 10.1101/gad.13.13.1653

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

О, Ю.Т., Ан, К.С., Ким, Дж.Г., Ро, Х.С., Ли, К.В., и Ким, Дж.В. (2010). Протеомный анализ ранней фазы прорастания конидий у Aspergillus nidulans . Генетика грибов. биол. 47, 246–253. doi: 10.1016/j.fgb.2009.11.002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Qiao, J., Kontoyiannis, D.P., Calderone, R., Li, D., Ma, Y., Wan, Z., et al. (2008). Afyap1, кодирующий транскрипционный фактор bZip Aspergillus fumigatus , способствует реакции на окислительный стресс, но не является существенным для вирулентности этого патогена у мышей с иммуносупрессией циклофосфамидом и триамцинолоном. Мед. Микол. 46, 773–782. дои: 10.1080/13693780802054215

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Куинн Дж., Малакаси П., Смит Д. А., Читам Дж., Бак В., Миллар Дж. Б. и др. (2011). Двухкомпонентное опосредованное восприятие перекиси и передача сигнала у делящихся дрожжей. Антиоксидант. Окислительно-восстановительный сигнал. 15, 153–165. doi: 10.1089/ars.2010.3345

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Рауло Р., Кокольски М. и Арчер Д.Б. (2016). Роль факторов транскрипции цинковых пальцев XlnR, ClrA и ClrB в расщеплении лигноцеллюлозы Aspergillus niger . Амб Экспресс 6:5. doi: 10.1186/s13568-016-0177-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Reverberi, M., Zjalic, S., Ricelli, A., Punelli, F., Camera, E., Fabbri, C., et al. (2008). Модуляция антиоксидантной защиты у Aspergillus parasiticus участвует в биосинтезе афлатоксина: роль гена ApyapA. Эукариот. Мобильный 7, 988–1000. doi: 10.1128/EC.00228-07

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Санчес, Дж. Ф., Энтвистл, Р., Хунг, Дж. Х., Яегаши, Дж., Джайн, С., Чанг, Ю. М., и другие. (2011). Геномный анализ делеций выявил путь биосинтеза пренилксантона у Aspergillus nidulans . Дж. Ам. хим. соц. 133, 4010–4017. дои: 10.1021/ja1096682

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Санчес, О.и Агирре, Дж. (1996). Эффективная трансформация Aspergillus nidulans путем электропорации проросших конидий. Генетика грибов. Информационный бюллетень. 43, 48–51. дои: 10.4148/1941-4765.1317

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Санчес, О., Наварро, Р. Э., и Агирре, Дж. (1998). Повышенная частота трансформации и маркировка генов развития в Aspergillus nidulans за счет интеграции, опосредованной рестрикционными ферментами (REMI). Мол. Ген.Жене. 258, 89–94. дои: 10.1007/s004380050710

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шерер М., Вей Х. Дж., Лизе Р. и Фишер Р. (2002). Aspergillus nidulans Ген каталазы-пероксидазы (cpeA) транскрипционно индуцируется во время полового развития посредством фактора транскрипции StuA. Эукариот. Ячейка 1, 725–735. doi: 10.1128/EC.1.5.725-735.2002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шиодзаки, К.и Рассел, П. (1996). Конъюгация, мейоз и реакция на осмотический стресс регулируются киназой Spc1 через транскрипционный фактор Atf1 у делящихся дрожжей. Гены Дев. 10, 2276–2288. doi: 10.1101/gad.10.18.2276

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шрофф, Р. А., Локингтон, Р. А., и Келли, Дж. М. (1996). Анализ мутаций в гене creA, вовлеченном в репрессию углеродного катаболита у Aspergillus nidulans . Кан.Дж. Микробиол. 42, 950–959. doi: 10.1139/m96-122

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Зигмунд У., Хеллер Дж., ван Кан Дж. А. и Тудзынски П. (2013). Комплексы NADPH-оксидазы в Botrytis cinerea : свидетельство тесной связи с ER и тетраспанином Pls1. PLoS ONE 8:e55879. doi: 10.1371/аннотация/84c258cf-4f98-43d8-a4f0-7032cba36f22

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Тачибана, Т., Окадзаки С., Мураяма А., Наганума А., Номото А. и Куге С. (2009). Основная индуцированная пероксиредоксином активация фактора транскрипции yap1 опосредована редукционно-чувствительными дисульфидными связями и демонстрирует низкий уровень активации транскрипции. J. Biol. хим. 284, 4464–4472. doi: 10.1074/jbc.M807583200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Такахаши М., Ямасита К., Шиодзава А., Итииши А., Фукумори Ф. и Фуджимура М. (2010).AP-1-подобный фактор транскрипции, NAP-1, регулирует экспрессию генов глутатион-S-трансферазы и NADH:flavin oxidoreductase у Neurospora crassa . Биологи. Биотехнолог. Биохим. 74, 746–752. doi: 10.1271/bbb.

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Темме, Н., и Тудзынски, П. (2009). Игнорирует ли Botrytis cinerea H 2 O 2 индуцированный окислительный стресс во время инфекции? Характеристика белка активатора серой гнили 1. Мол. Взаимодействие растительных микробов. 22, 987–998. doi: 10.1094/MPMI-22-8-0987

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Тон М., Аль Абдаллах К., Хорчански П., Шарф Д. Х., Эйзендл М., Хаас Х. и др. (2010). CCAAT-связывающий комплекс координирует реакцию окислительного стресса у эукариот. Рез. нуклеиновых кислот. 38, 1098–1113. doi: 10.1093/nar/gkp1091

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Тода Т., Шимануки М.и Янагида, М. (1991). Гены делящихся дрожжей, которые придают устойчивость к стауроспорину, кодируют Ар-1-подобный фактор транскрипции и протеинкиназу, связанную с киназами Erk1/Map2 млекопитающих и почкующихся дрожжей fus3 и Kss1. Гены Дев. 5, 60–73. doi: 10.1101/gad.5.1.60

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Варгас-Перес И., Санчес О., Кавасаки Л., Джорджеллис Д. и Агирре Дж. (2007). Регуляторы ответа SrrA и SskA являются центральными компонентами системы фосфорилирования, участвующей в передаче сигналов стресса и бесполом спорообразовании у Aspergillus nidulans . Эукариот. Ячейка 6, 1570–1583. doi: 10.1128/EC.00085-07

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Виванкос, А.П., Кастильо, Э.А., Бито, Б., Никот, К., Айте, Дж., Толедано, М.Б., и соавт. (2005). Цистеин-сульфиновая кислота в пероксиредоксине регулирует H 2 O 2 -восприятие с помощью антиоксидантного пути Pap1. Проц. Натл. акад. науч. США 102, 8875–8880. doi: 10.1073/pnas.0503251102

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Виванкос, А.П., Кастильо, Э.А., Джонс, Н., Айте, Дж., Идальго, Э. (2004). Активация окислительно-восстановительного сенсора Pap1 перекисью водорода требует модуляции концентрации внутриклеточного оксиданта. Мол. микробиол. 52, 1427–1435. doi: 10.1111/j.1365-2958.2004.04065.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Wiatrowski, H.A., and Carlson, M. (2003). Yap1 накапливается в ядре в ответ на углеродный стресс у Saccharomyces cerevisiae . Эукариот. Ячейка 2, 19–26. doi: 10.1128/EC.2.1.19-26.2003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ву, Э. Дж., Данвелл, Дж. М., Гуденаф, П. В., Марвье, А. С., и Пикерсгилл, Р. В. (2000). Гермин представляет собой гомогексамер, содержащий марганец, с активностью оксалатоксидазы и супероксиддисмутазы. Нац. Структура биол. 7, 1036–1040. дои: 10.1038/80954

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Инь, В.B., Reinke, A.W., Szilágyi, M., Emri, T., Chiang, Y.M., Keating, A.E., et al. (2013). Факторы транскрипции bZIP, влияющие на вторичный метаболизм, половое развитие и реакцию на стресс у Aspergillus nidulans . Микробиология 159, 77–88. doi: 10.1099/мик.0.063370-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ю, Дж. Х., Хамари, З., Хан, К. Х., Сео, Дж. А., Рейес-Домингес, Ю., и Скаццоккио, К. (2004). ПЦР с двойным соединением: молекулярный инструмент на основе ПЦР для манипуляций с генами в мицелиальных грибах. Генетика грибов. биол. 41, 973–981. doi: 10.1016/j.fgb.2004.08.001

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Привет, мир! — Rotunda Brewing Co

Правильный промокод Bet9ja.com для получения эксклюзивного бонуса
в размере 100 000 NGN: YOHAIG.

Промо-код или бонусный код Bet9ja даст вам приветственный бонус
и бесплатные ставки при успешном первом депозите.

Вы можете использовать свой бесплатный доступ к ставкам на спорт, виртуальные виды спорта, виртуальные ставки на футбол, виртуальные футбольные игры, виртуальные игры
, игры казино, скачки, европейские лиги, английскую премьер-лигу, американский футбол, зум-футбол, футбольные матчи
и другие популярные европейские лиги.

Bet9ja — крупнейшая нигерийская онлайн-букмекерская контора, принадлежащая KC Gaming Networks Limited. Bet9ja предоставила вам платформу, на которой мы объясняем коды бронирования Bet9ja.

Каждый может подтвердить тот факт, что когда дело доходит до
онлайн-ставок и азартных игр, Bet9ja заметно выделяется среди других.

Превзойти ожидания игроков, используя и предлагая великолепно
удобный для потребителя интерфейс, хорошо продуманные и простые для понимания условия
и условия использования, а также целый набор опций для облегчения спортивных
действий со ставками и другими формами. играть.

Понимание того, что такое коды бронирования и как их
использовать, — это ваш путь к правильному стратегическому выбору при размещении денег
на Bet9ja. Это приближает победу команды гостей или ничью.
Больше 0. Это означает, что будет забит хотя бы один гол.
И меньше 0. Больше 1. Есть три возможных последствия:
1-я команда гостей забьет больше голов в 1-м тайме 2-я группа гостей забьет больше голов во втором тайме и равная группа гостей забьет одинаковое количество голов
в обоих матчах. 1-я и 2-я половины.

Если команда хозяев не забивает ни одного намерения,
преобладающий выбор является четным. Если команда гостей не засчитывает ни одного гола, победный выбор считается равным. Это имеет аналогичную альтернативу, как и основные альтернативы.
Вам необходимо выбрать, какие из них: дома, на выезде и вничью, а также если результат может привести к больше или меньше 1.
Коды бронирования Bet9ja. Мы используем файлы cookie, чтобы
предоставляли вам наилучшие возможности на нашем веб-сайте.

ПРОГНОЗЫ НА ФУТБОЛ И КОДЫ BET9JA
Если вы продолжите использовать этот сайт, мы будем считать, что вы им довольны.
Ok Политика конфиденциальности. Если вы хотите получить легкие деньги, вы
можете попытать счастья и сделать ставку на одном из самых популярных нигерийских букмекерских сайтов – bet9ja.
Но чтобы победить, нужно знать, как работает система. Если вы
знаете коды матчей и коэффициенты bet9ja, ваши шансы на победу значительно возрастут.

Пока значение всех кодов не представлено на сайте web.
Коэффициенты в ставках указывают ценник места для каждой команды.
Пишется номером. Если вы хорошо разбираетесь в этой области, вы поймете сумму
, которую они представляют.Неважно, какую сумму вы поставите на ставку
, она умножит ее на число, представленное в коэффициенте.
Если вы делаете ставку и выбираете победу Манчестер Юнайтед, коэффициент на Манчестер Юнайтед указывается как 2.

Чем выше коэффициент, тем выше сумма денег, которую вы
выиграете.

Вам нужны коды для представления результата
каждого совпадения. Но вам также нужно знать значение
каждого кода, чтобы не ошибиться, делая
свой прогноз bet9ja.Если вы посмотрите на главное меню вкладок в web.
DC: вы можете выбрать один из трех вариантов ниже:.
Однако, если вы не можете самостоятельно спрогнозировать расходы на матч
, вы также можете использовать сайты прогнозирования bet9ja.

Также есть разные интернет-сайты, например, где уже предсказан результат любого матча
. Так что иногда они могут нарочно дать вам неверный прогноз.

Так что будьте осторожны и удачи вам в ваших ставках! Главная Спрашивайте законно Спрашивайте законно.
Как использовать старую мобильную Bet9ja – регистрация, вход, проверка купона, мобильное приложение, магазин.

Что нужно, чтобы начать успешный бизнес по производству пальмового масла.
Правила вывода средств с Bet9ja для победителей и обладателей бонусов из Нигерии. Продолжайте читать этот обзор
, и вы получите всю необходимую информацию. Вы
узнаете, как использовать промокод Bet9ja, чтобы получить этот бонус,
, а также получите советы по другим предложениям и рынкам ставок.

Полные условия предложений по промокоду bet9ja перечислены в разделе «Положения и условия»
.Принцип работы бонуса довольно прост. При использовании этого промо-кода Bet9ja,
, применяются следующие условия:. Bet9ja — это веб-сайт онлайн-ставок и казино
, расположенный в Нигерии. У них есть безопасная и надежная платформа для онлайн-ставок, оптимизированная для нигерийского рынка.
Компания имеет лицензию на юридическую деятельность в Нигерии, имеет лицензию Совета по лотереям штата Лагос
, лицензию на букмекерскую контору и азартные игры, выданную штатом Осун, а также лицензию
на деятельность во всех штатах, где ставки на спорт
разрешены в Нигерии.

Они предлагают коэффициенты на крупные события в Европе и других частях мира.
Читайте дальше, чтобы узнать больше об этом специальном промо-коде
Bet9ja вознаградит вас и как заставить его работать на ваш заработок.

С более чем 10 вариантами ставок на спорт
и дополнительными преимуществами с промо-кодом, Bet9ja предоставляет вам широкий выбор на выбор.
Вы можете получить бонус от ставок на любой из этих исходов, а промокод Bet9ja дает вам более высокий процент за каждую дополнительную ставку
, которую вы делаете.

Футбольные рынки разделены по лигам, с международными клубами, а также
Нигерии, Англии и шести основных европейских лиг. Также предлагаются другие низшие лиги
, и они перечислены в алфавитном порядке, чтобы их было легко просматривать.

Bet9ja также предлагает ставки Antepost на некоторые рынки футбола
, например, на чемпионат мира по футболу и на все ведущие международные клубы
и национальные сборные. Ставки Antepost, также известные как фьючерсы, дают вам фиксированные коэффициенты
на эти предстоящие события.Вы можете выбрать
, какую команду вы ожидаете выиграть с определенным коэффициентом по вашему выбору, а
— это список того, когда должно быть принято решение об этом событии.

Играя как обычно, у вас есть возможность каждую неделю выигрывать джекпот в миллионы найр.
У Bet9ja есть новая функция: Bet9ja Zoom soccer позволяет вам каждый день наблюдать за реальными лигами, так как
всегда будет матч, доступный ежедневно и в течение года, так что вам
больше не придется беспокоиться о том, что
лига приближается к конец.

По сути, это виртуальная футбольная игра, напоминающая ставки на виртуальный футбол
. Zoom Soccer — отличный продукт, который стоит попробовать, если вы еще не пробовали его
. Bet9ja Zoom Soccer имитирует настоящие спортивные рынки и спортивные лиги.
Все спортивные лиги имеют одинаковые названия команд.
Даже результаты требуют времени для обработки, как и реальный процесс футбольных матчей.
В то же время вы можете бронировать матчи со своего мобильного устройства или посетить любой из
точек Bet9ja по всей стране.

Опять же, все команды будут начинаться с буквы Z. В отличие от других виртуальных игр, масштабный футбол, играемый на вашем мобильном устройстве с кодом бронирования
или играемый в магазине, что делает его более реальной ставкой. Коды ставок и символы Bet9ja один
из первых процессов обучения, с которыми вы, как ожидается, познакомитесь, поскольку их много
. Охватывая все основные спортивные события в Европе и мире, букмекерская компания установила стандарт качества онлайн,
мобильных и розничных продаж в Нигерии.

Они безопасны и надежны, так как работают с лучшими операторами в мире, чтобы обеспечить
лучший опыт ставок для игроков.

Выигрыш тоже реальный. Вы можете играть в игры и выигрывать.

Вы можете перевести свой выигрыш прямо на свой банковский счет в любое время,
когда захотите. Каждый день тысячи игроков снимают свои
выигрыша, и Bet9ja гарантирует выплату по каждой выигрышной ставке.

Kunle Soname приобрела более 70% акций ведущего португальского футбольного клуба
.Как новичок, вам необходимо потратить время на изучение различных кодов ставок
Bet9ja и их значения, чтобы не делать ставки
на неправильные типы ставок.

Со следующими кодами ставок Bet9ja и их значением вы будете ошеломлены обилием возможностей
, которые вы упускаете из-за того, что не используете различные варианты для размещения ставок.

Каждому коду ставок Bet9ja присваивается определенное число
коэффициентов, предоставленное букмекерами.Шансы создаются с помощью множества факторов, таких как исторические данные, погода, домашние или выездные встречи, вероятность
, статистика и форма.

Популярная ставка на победу, ничью или проигрыш любимой команды
не всегда дает высокие коэффициенты, поэтому важно понимать коды ставок и типы ставок.
Этот код указывает, что команда гостей выиграет или сыграет вничью, но обе команды не наберут
очков друг против друга.

Чтобы выиграть пари, команда гостей должна выиграть или и
и т. д., или сыграть вничью. Этот код означает, что вы
делаете ставку на победу команды гостей или ничью в матче
, и обе команды забьют друг другу .
Чтобы победить, команда гостей должна выиграть или или и так далее
, или сыграть вничью и т. д. Этот код означает, что команда хозяев выиграет или сыграет вничью, но обе команды не забьют друг другу
очков. То есть для того, чтобы вы выиграли, команда хозяев
должна выиграть или и т. д. или сыграть вничью. Этот код
означает, что вы делаете ставку на победу команды хозяев
или ничью в игре, а также на то, что обе команды забьют друг против друга
гола.

Например, команда хозяев может выиграть матч, или
, или сыграть вничью, и так далее, чтобы вы выиграли.Чтобы пройти квалификацию, вам необходимо внести депозит в размере от N до N. Не забудьте выполнить требования по отыгрышу
: сделайте ставку на весь депозит, отыграйте бонус 10
раз с коэффициентом минимум 3. Если вам нужна дополнительная информация, взгляните на абзац ниже.
При регистрации в Bet9ja Nigeria с этим промо-кодом вы получите шанс претендовать на N Betj9a является крупнейшим нигерийским онлайн-букмекером
и спонсирует местную Национальную лигу
.

Узнайте, что нужно сделать, чтобы получить бонус
, и почему Bet9ja — букмекерская контора, достойная вашего времени.
Выполните следующие шаги, и вы получите свои деньги. Чтобы вывести деньги, вам нужно будет выполнить
условий, выставленных букмекерской конторой. Они включают в себя требования по отыгрышу
, которые необходимо выполнить, чтобы выплатить свой выигрыш из бонусных денег.

Внимательно прочитайте их, потому что если вы сделаете что-то не так
, вы рискуете потерять свои деньги. Как только вы переведете
денег, вы сможете снять наличные — теперь они ваши.
Bet9ja — это безопасная платформа для онлайн-ставок на спорт, предлагающая лучшие рынки и выгодные предложения.

Так что, если вы приехали из штата, где
ставки разрешены законом, можете быть уверены, что не нарушаете никаких правил.

Каждый зарегистрированный игрок может принять участие бесплатно
. Достаточно зайти на страницу Super9ja
и создать прогноз на точный счет на 6 игр.

Набор матчей меняется еженедельно, что
означает, что вы получаете новый шанс каждые 7 дней.

И поверьте нам, это стоит попробовать.Но букмекер знает это
и хорошо платит за старание и вашу удачу. Bet9ja также предлагает
очень прибыльных джекпота, где вы можете разыгрывать миллионы каждую неделю.

Bet9ja Titan Jackpots — это самые крупные онлайн-джекпоты в Нигерии, которые дают вам возможность
выигрывать крупные миллионы найр каждую неделю.
Джекпоты Титана можно выиграть в лиге Bet9ja. Ознакомьтесь с лучшими советами и кодами Bet9ja для каждой игры Серии А.

Вы ищете прогноз на футбольный матч, которому можно доверять?
Советы по ставкам на футбол и советы, подтверждающие вашу интуицию? Тогда вы находитесь в правильном месте.

Каждый день примерно в дюжине футбольных соревнований наши футбольные эксперты предлагают свои личные прогнозы после долгих размышлений и обновлений в режиме реального времени на основе различных событий.
Принимая во внимание все наиболее важные факторы, которые могут повлиять на матч, наша команда специалистов
будет давать вам свое мнение о лучших матчах
каждую неделю, а также о ставках, которым следует отдавать приоритет в ваших букмекерских купонах.

От состояния игры команд до предыдущих прямых матчей, от недавней статистики важных игроков, текущего статуса двух клубов или
различных генеральных классификаций, в качестве клиента,
в качестве гостя, атаки, защиты, карточек , иногда более сотни показателей оцениваются в реальном времени, чтобы получать прогнозы, которые всегда ближе к реальности игр.

Другим, но не менее важным моментом является эмоциональный и человеческий аспект, который
очень присутствует в каждом из наших футбольных прогнозов, благодаря чему наш анализ не ограничивается только цифрами, как это имеет место на многих других сайтах спортивных прогнозов. Наши футбольные эксперты увлечены
игрой и в конечном итоге предсказывают столь же страстных
болельщиков.

Фактор, объясняющий здравый смысл и общий
успех нашего веб-сайта, посвященного ставкам на футбол.
Несмотря на то, что подавляющее большинство веб-сайтов предлагают платные услуги и ваш надежный код предсказания
, Bet9jacode также предлагает то же самое.
Поэтому не стесняйтесь заглянуть в наш VIP-раздел, чтобы получить доступ к персонализированным прогнозам.
Мы предпочитаем обмен опытом и свободное и неограниченное распространение наших анализов.

Наша команда футбольных специалистов ограничена, поэтому может случиться так, что некоторые футбольные матчи, на которые я хотел бы сделать ставку, не покрываются кодовыми предикторами Bet9ja.

Что делать в этом случае? Удовлетворить себя ограниченным мнением
, основанным лишь на нескольких цифрах? Очевидно нет. Выполняя шаги, которые вы будете выполнять
, вы сможете выполнять автономный анализ
для определенных футбольных прогнозов большую часть времени.
Оставайтесь с нами. Первый этап, как вы должны рассчитать, состоит из
наблюдения за недавним состоянием формы двух команд, заинтересованных
в игре, в которой вы хотите закрепить свой прогноз.

Как правило, наблюдатели учитывают последние 5 соответствующих матчей.

Bet9ja: коды ставок и значение
Для наших экспертов гораздо актуальнее оценивать последние два матча
обеих формаций, которые указывают наиболее близкое состояние к тому, которое будет
в следующей игре, в которой вы хотите bet.Добро пожаловать на страницу с бонусами и акциями Bet9ja для нигерийцев.

Бонус предлагается только новым нигерийским клиентам, которые
пополняют свои счета с помощью обычных платежных систем, например,
пользователь не имеет права на получение бонуса, если его средства были переведены с другого счета.
Если вы новичок в Bet9ja, вы можете зарегистрировать свою учетную запись, используя промо-код Bet9ja
super9ja, который автоматически вводится при мобильной регистрации, а затем вы можете сделать
первый депозит.

После депозита соответствующие средства появятся на вашем бонусном счете
. Чтобы иметь возможность перевести эти деньги в свои основные, у вас есть
, чтобы отыграть 10-кратную сумму депозита на ставки с коэффициентом 3.

Создайте учетную запись в Bet9ja. Используйте промо-код bet9ja super9ja Пополните свой баланс.
Прокрутите соответствующие деньги, чтобы их можно было снять.
Каждый ранг напрямую влияет на количество очков, которые вы зарабатываете с каждой ставкой, которые в конце каждого месяца определяют призы
, которые вы можете получить.

В то время как продвижение по рангам происходит линейно, вы получаете новый ранг в течение календарного месяца,
вы сохраняете этот ранг в начале следующего
ранга, чтобы сохранить его.
В вашей учетной записи есть специальный индикатор прогресса, показывающий, как далеко вы продвинулись в своем текущем ранге.
Поддержите текущий ранг в системе. Получайте денежные призы!
Для тех, кто хочет испытать свою удачу, Bet9ja предлагает абсолютно БЕСПЛАТНУЮ игру на предсказания с еженедельным джекпотом в 10 миллионов найр.

Чтобы получить эти деньги, вам нужно зайти на веб-страницу Super9ja и
выбрать результаты 6 выбранных матчей. Вам также будет предложено ввести
общее количество забитых голов, но это вступает в силу
только в случае ничьей. Турнирное положение определяется вашим прогнозным счетом, который
рассчитывается отдельно для каждого матча, а затем суммируется.

Иметь учетную запись Bet9ja. Посещайте страницу Super9ja еженедельно, чтобы делать прогнозы
. Выберите исходы и очки для 6 показанных матчей.
Подождите, пока игры успокоятся, и надейтесь на лучшее.

Принимая во внимание, что Bet9ja работает исключительно для граждан Нигерии, не рекомендуется использовать этот конкретный сайт ставок
, если вы из другой страны.
Если вы пытаетесь зарегистрироваться с мобильного устройства, этот код вводится автоматически.

Хотя специального бездепозитного бонуса нет, Super9ja предлагает
возможность испытать свою удачу бесплатно.Шаг
1. Шаг 2. Шаг 3. Шаг 4. Активатор квалификационных ставок Тип бонуса очки
система Временные рамки Календарный месяц Регион Нигерия.
Присоединяйтесь к Bet9ja.

FAQ помощь. Доступны ли бонусы для других стран?
Есть ли промокод? Есть ли бездепозитный бонус?

Новые клиенты смогут делать ставки в режиме реального времени на спортивные рынки
на Bet9ja.

Они могут делать спортивные ставки на своем телефоне, мобильном устройстве (мобильное приложение) на футбольные матчи, американский футбол, скачки, премьер-лигу и еще
.

Их требования к ставкам включают минимальный депозит в размере 100 фунтов стерлингов.

Используйте промо-код Bet9ja YOHAIG, чтобы получить шанс выиграть мини-джекпоты,
титановых джекпота, джекпот красного титана или джекпот золотого титана.

Как узнать самолет на котором летишь. Интересный онлайн! Наблюдение в режиме реального времени

Аэрофлот — МГА СССР
В Советском Союзе министерство занималось перевозкой пассажиров на коммерческой основе Гражданская авиация — МГА .

Структурная МГА состояла из нескольких органов управления ( УГА ), в основном привязанных к определенным территориям. В каждой из республик СССР свое управление было в каждой республике, а в России их было несколько — ввиду больших размеров страны.
Каждое из управлений состояло из авиационных столярных (АО или АО), а те в свою очередь — из летных частей (ЛУ). В реестре операторы указаны иерархически: МГА -> Таджикский УГА -> Душанбинский ОАО -> 186 Ло .

Аэрофлот — это собирательное название МГА вместе со всеми его подразделениями и авиалиниями.

Каждый авианосец существовал и развивался относительно независимо от других. Образцовым аналогом авианосцев сегодня являются авиалинии — конечно, с поправкой на время.
Когда в 1991-93 годах «Аэрофлот» распался на самостоятельные авиакомпании, большинство из них стали наследниками тех и ло. Например, Саратовский ОАО Волга УГА преобразован в авиакомпанию «Саратовские авиалинии», а Шереметьевский ОАО — В «Аэрофлот — российские авиалинии» (с присвоением общего бренда «Аэрофлот»).

На этой странице представлена ​​структура MGA в виде диаграммы. Следует иметь в виду, что за время существования МГА многие органы управления были реформированы, созданы и выкуплены.

Представленная схема не отражает структуру МГА на конкретную дату, а скорее показывает максимально разветвленное «дерево» всех подразделений, существовавших за всю историю МГА. Это сделано как для удобства быстрого поиска, так и для наглядности. Более подробная история каждого из органов управления и авианосцев находится в соответствующих разделах по ссылкам.Наименования УИГ и АО в этой таблице представлены в основном по состоянию на конец 1980-х гг.

На бортовые номера Самолеты и вертолеты Аэрофлота. Все борта, эксплуатируемые в МГА, несли бортовой номер типа СССР-85005, пять цифр были уникальными в каждый конкретный момент времени. Периодически к новому Солнцу могли приписывать бортовые списанные «Сан».
Первые две цифры в общем случае определяли тип самолета. Например, 85хххх — Ту-154, 42хххх — Як-42 (и ранее — Ту-104), полный список Такие диапазоны смотрите в соответствующем разделе.

На ведомственных сторонах . Регистрационные номера типа СССР-ХХХХХ использовались не только в аэрофлоте, но и в ВВС, КГБ, МАП и других министерствах и ведомствах. Часто в целях конспирации такие борта даже окрашивались в бело-голубую ливрею и несли надпись «Аэрофлот» с символикой МГА. Строгих правил по этому поводу нет, на борту выбивается из общей последовательности, и во многих сторонах можно узнать только по реестрам.Такие доски

Отправляясь в путешествие на самолете, многих мучают такие вопросы, как марка лайнера, на котором лететь, его возраст. Ответы на них многие хотели бы знать как для уверенности в своей безопасности, так и для того, чтобы выбрать удобное место при регистрации. Не всегда на сайте авиакомпании можно найти точную информацию. Но расстраиваться не стоит, зная номер рейса можно многое прояснить. Например, получить ответ на вопрос: «Как узнать какой самолет по номеру рейса».

Забронировав билет и получив его в электронном виде по почте, вы можете узнать из него и номер рейса, он будет выглядеть примерно так QF 8132 или SU 0102. Еще один способ узнать номер вашего рейса вы можете, введя Сервис Яндекс-расписание. Необходимо в соответствующей форме набрать город отправления/прилета и система выдаст вам варианты. Зная время, вы точно определяете номер рейса. Его также можно узнать, просмотрев таблицу онлайн нужного аэропорта на его официальном сайте.В крайнем случае номер вашего маршрута можно узнать, позвонив в справочную службу аэропорта. Теперь узнаем, как узнать тип самолета по номеру рейса

Определить тип самолета по номеру рейса

Каждая авиакомпания старается привлечь на свои рейсы как можно больше пассажиров, предлагая им все новые услуги, отмахиваясь от сомнений. Зная, что большинство пассажиров беспокоятся о своей безопасности, и хотят узнать, какой будет самолет по номеру рейса, авиакомпании разрабатывают специальные дополнительные услуги.Например, авиакомпания Аэрофлот разработала новую опцию онлайн-табло, где можно узнать номер рейса:

.
  • время отправления/прибытия;
  • вкладыш типа
  • ;
  • количество мест в различных классах обслуживания прочая информация.

В форме выбираем дату нашего полета и входим в слой, в открывшемся окне мы увидим детали полета: тип машины, количество мест в разных классах, название самолет (в Аэрофлоте все лайнеры называют какой-либо выдающейся личностью и т.д.).

Онлайн табло Аэрофлот

Другие услуги по определению типа самолета

Если вы не нашли нужную услугу на официальном сайте вашей авиакомпании, и не понимаете, как узнать тип самолета по номеру рейса, советуем вам обратиться к другим ресурсам . Например, на http://avia.pro можно узнать тип самолета по номеру рейса и авиакомпании. Для этого на ресурсе есть простая форма, в которой укажите тип авиакомпании, номер рейса и нажмите кнопку «Искать».Система выдаст подробную информацию об этом рейсе:

Наблюдение в режиме реального времени

Зная номер рейса, вы можете смотреть его в режиме реального времени на таких сервисах, как Flaigtradar 24, Plane Finder, Flaigt Aware, если на самолете установлено соответствующее навигационное оборудование. Можно узнать не только тип машины, но и скорость и высоту полета, но это уже можно сделать, если лайнер в полете.

Узнать, на каком самолете вы отправитесь в отпуск, достаточно легко.Тип самолета указан на сайте вашей авиакомпании в данных о рейсах, также эту информацию можно найти на сайте аэропорта в расписании рейсов. Однако иногда перевозчик может при необходимости заменить один лайнер на другой, если воздушное судно заполнено не полностью. Особенно часто это происходит на чартерных рейсах.

Как узнать какой самолет полетит другим рейсом?

В билете чаще всего указан номер вашего рейса, но иногда его не пишут.В любом случае, его всегда можно найти на сайте авиакомпании. После того, как вы узнали свой номер рейса, вам необходимо:

1. Перейдите на сайт www.flightradar24.com.

2. Введите номер вашего рейса в графу поиска.

На экране появится таблица, в которой слева будет отображаться дата рейса (date), пункты отправления и прибытия (FROM и TO Counts), модель и бортовой номер вашего самолета (Count Aircraft). Например: «A321 (VQ-BEG)», где A321 — модель лайнера, а VQ-Beg — его бортовой номер.При нажатии на нее выдается информация обо всех рейсах этим самолетом за последнее время.

Где и как узнать возраст самолета и историю его эксплуатации?

После того, как вы станете знаменитым самолетом, на котором будете летать, вы сможете увидеть его возраст и историю эксплуатации. Для этого вам нужно:

1. Введите бортовой номер самолета в графу поиска на сайте www.planeSpotters.net

2. Нажмите на серийный номер найденного самолета (Считайте «C/N»).После этого появится информация о его первом полете (First Flight), сроке службы (AGE), авиакомпаниях (Airline), которые эксплуатировали корабль и авариях (Remarks) с ним, если таковые были.

Как я могу следить за маршрутом полета?

Если на самолете летит близкий вам человек, то вы можете в режиме реального времени следить за маршрутом полета лайнера. Для этого вам необходимо ввести номер рейса в графу поиска, после чего вы перейдете на страницу, где нужно будет нажать либо на иконку с самолетиком, либо на иконку с треугольной скобкой (при наведении курсором мыши появляется надпись Go to Flight ).В последнем случае также можно следить за скоростью и устранять лайнер.

Приветствую вас, любители путешествий! Я снова с вами — Елена Исхакова. А мы поговорим о том, как узнать самолет по номеру рейса.

«Интересно, сколько лет самолету, на котором мне завтра лететь?»

«Сколько выездов он совершил за свою жизнь в мастерской?»

«Что это вообще за самолет?»

Узнаешь себя? Не скажу, что регулярно, но время от времени в голове возникают такие вопросы.Отправляя материал по Интернету, я пришел к неутешительному выводу.

Авиакомпания не сообщает возраст самолета, на котором нам предстоит переехать.

Средний возраст компании аэропарка и названия моделей, которые находятся в этом парке — это все, что может узнать путешественник. И еще: перед вылетом заявленную плату можно легко заменить на другую. Однако не стоит расстраиваться. За сочетанием букв и цифр аэрошурта скрывается ряд других не менее полезных данных.

В этой статье:

Как узнать номер рейса

Обычно номер рейса указывается в билете или если речь идет об электронном билете. Вид у него примерно такой QF 8132. или такой LH 1325. .

Но если вы не знаете номер рейса, вы можете воспользоваться Яндекс. Расписание. Набрав город отправления и город прибытия в соответствующей строке, вы получите всевозможные варианты. Если еще знать время — то задача заметно упростится.

Второй вариант: Вы можете увидеть табло нужного онлайн-аэропорта. И третий вариант (не очень удобный): Звоните и ездите по аэропортам.

Парусный спорт онлайн

Став, наконец, счастливым обладателем информации об интересующем номере рейса, вы сможете лицезреть его в режиме реального времени. Это может быть полезно, если вам нужно с кем-то встретиться. То есть вы, например, можете убедиться, что самолет летел в нужном направлении и пора ехать в аэропорт.

Как это работает?

Подавляющее большинство самолетов оснащены специальными навигационными приборами. Их наличие позволяет летательному аппарату примерно каждую секунду передавать по радио сообщения о своих координатах, скорости и высоте полета и другие полезные данные.

Какую информацию мы получаем?

  • Откуда взялся авиалайнер
  • Куда пойти
  • Куда летит
  • Когда придет.

Назову несколько самых известных авиалинкеров — сайтов, где можно отслеживать информацию о рейсах:

ФлагТрадар 24.: по интерактивной карте Вы можете наблюдать за движением самолета + дополнительная информация о высоте и скорости полета. Подробно об услуге рассказывает здесь:

Flaigt Aware.: Зная авиакомпанию и номер рейса, вы получите достоверную информацию о маршруте самолета + погоде в пути, времени задержки посадки или вылета, номерах стоек и терминалов для выхода.

ПОИСК САМОЛЕТА.: На интерактивной карте нас интересует самолет. Нажав на нее, получаем следующие данные: тип самолета, его бортовой номер, маршрут, скорость и высота полета.Вот просто жесть, сколько самолетов!


Перечисленные выше сервисы могут идти как с компьютера, так и с мобильного телефона.

Flighthero Free — онлайн табло и статус полета (есть приложение для iOS и Android). Он определит точное местонахождение лайнера в пространстве и его скорость (если самолет летит из/в Америку) или приблизительную для остальных аиршорсов. Здесь же можно найти нужный самолет по номеру рейса и дате или по пути и дате.Есть схемы терминалов крупных аэропортов, что иногда очень нужно.

А еще на сайтах некоторых перевозчиков (например, Люфтганза, Аэрофлот) также есть специальные мобильные приложения, позволяющие следить за статусом рейса.

Вот такая утилита. Надеюсь, вам понравилась статья. Если да, поделитесь с друзьями. Уверен, что им тоже будет очень интересно. А если вы еще не подписаны на обновления моего блога, сделайте это: вас ждет море всего интересного! А для меня сегодня все еще так далеко!

Перед авиаударом у каждого возникают вопросы по условиям, комфортности и уровню безопасности полетов.Многих туристов интересует тип самолета и его эксплуатация, ведь никто не откажется убедиться в том, что полет будет идеальным. Кроме того, обладая необходимой информацией, можно заранее выбрать место на борту с более удобным расположением или дополнительным расстоянием для ног.

На официальном сайте авиаперевозчика информация о предстоящем рейсе может быть представлена ​​не в полном объеме, но сейчас это не проблема. Можно воспользоваться советами родственников и друзей, неоднократно совершавших авиаперелеты, но лучше опираться на самый достоверный источник.

Авиакомпании зашифровали большое количество Данных в коде, который присваивается каждому маршруту. Определяем, как узнать тип самолета по номеру рейса, а также быстро находим характеристики выбранного рейса в интернете.

Уникальная серия и код позволяют получить много информации, связанной с полетом, в частности узнать марку вашего самолета. Номер рейса состоит из двух заглавных латинских букв и четырехзначного числа, например, SU 0102 или QF 8132.

Посмотреть можно следующими способами:

  • во время бронирования, глядя на электронный билет;
  • воспользовавшись расписанием Яндекса — сервис подберет любые возможные варианты при наличии исходной информации о городах отправления и прибытия, планируемой дате и времени;
  • на официальной странице аэропорта — просматривая табло онлайн (электронное расписание рейсов), клиенты видят в списке маршрутов все данные о соответствующих вылетах;
  • позвонив по телефону на горячую линию Сотрудник аэропорта — отдел обслуживания клиентов работает круглосуточно, поэтому любой вопрос будет рассмотрен незамедлительно.

Любой вариант поможет туристу быстро и точно найти важную информацию. Но сегодня это стал поиск информации по авиабилетам в Яндекс. Активному пользователю необходимо знать, что сервис постоянно обновляется, и перед планированием полета проверять и учитывать все изменения. Далее остановимся на том, как узнать что за самолет по номеру рейса, имея такую ​​информацию.

Основной целью любого авиаперевозчика является привлечение большего количества клиентов и увеличение пассажиропотока.Для этого постоянно ведется работа по внедрению новых интересных предложений и услуг. Узнав тип воздушного судна по номеру рейса, состояние воздушного судна, пассажиры меньше опасаются за безопасность и комфортность предстоящего полета.

Итак, команда крупнейшей российской авиакомпании Аэрофлот разработала электронную форму для желающих уточнить необходимую информацию о времени взлета и посадки, типе авиалайнера и количестве различных типов посадочных мест на авиалайнере.Достаточно внести некоторые данные, и информация о рейсе отобразится на странице.

В специальных полях необходимо прописать номер рейса и планируемый срок пребывания в городе, а на экране появятся данные о типе самолета, наборе кресел в каждом классе обслуживания, наименовании самолетов (почти все бортовые «Аэрофлота» названы именами выдающихся людей).

Постепенный рост интереса к интерактивному способу подачи информации о рейсах показал, что его следует развивать в этом направлении.

Официальные сайты авиационных компаний редко предоставляют информацию о марках самолетов и комплектации мест в салоне. Недостающую информацию можно уточнить на других сервисах, разработанных специально для пассажиров.

Например, портал Авиа.Про предлагает упрощенную процедуру, с помощью которой пользователь может узнать все с названием пассажирского перевозчика и кодом маршрута. Принципы работы таких ресурсов схожи и практически ничем не отличаются.Нужно просто сделать исходные данные.

Другие функции для пользователей

Некоторые услуги разрешены по номеру, указанному в билете, отслеживать ход поездки онлайн.

К ним относятся системы:

  • ФлагТраДар 24;
  • Искатель самолетов;
  • Флэигт в курсе.

Технически это осуществимо при наличии современного специального навигационного оборудования.

Благодаря обновлению технической базы многих отечественных и зарубежных авиакомпаний лайнеры становятся наиболее удобным и недорогим средством передвижения на дальние расстояния.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.

2019 © Все права защищены. Карта сайта