Большинство пассажиров упавшего в Иране лайнера летели транзитом
https://ria.ru/20200108/1563182418.html
Большинство пассажиров упавшего в Иране лайнера летели транзитом
Большинство пассажиров упавшего в Иране лайнера летели транзитом — РИА Новости, 08.01.2020
Большинство пассажиров упавшего в Иране лайнера летели транзитом
Большинство пассажиров потерпевшего крушение под Тегераном самолета должны были лететь через Украину транзитом, заявил в среду на брифинге президент… РИА Новости, 08.01.2020
2020-01-08T12:03
2020-01-08T12:03
2020-01-08T12:03
в мире
киев
тегеран (город)
международные авиалинии украины
boeing 737-800
крушение украинского самолета в иране
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/156318/18/1563181878_0:195:3072:1923_1920x0_80_0_0_8c9fd212c48b74b4d288bb87a2d5f74e.jpg
КИЕВ, 8 янв – РИА Новости. Большинство пассажиров потерпевшего крушение под Тегераном самолета должны были лететь через Украину транзитом, заявил в среду на брифинге президент «Международных авиалиний Украины» (МАУ) Евгений Диане.Boeing 737-800 «Международных авиалиний Украины» потерпел крушение вскоре после вылета из аэропорта на юге Тегерана в среду рано утром. Он направлялся в Киев. На борту лайнера находились около 180 человек, все они погибли.
киев
тегеран (город)
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2020
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/156318/18/1563181878_159:0:2890:2048_1920x0_80_0_0_a392671d64e651e112d32e28d55166d4.jpgРИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
в мире, киев, тегеран (город), международные авиалинии украины, boeing 737-800, крушение украинского самолета в иране
история разработки, схема салона, отзывы
B738 (самолет «Боинг 737-800») – реактивный пассажирский авиалайнер, который рассчитан на выполнение среднемагистральных рейсов. Его технические характеристики отвечают всем современным международным стандартам безопасности. Самолеты данной модификации являются самыми востребованными во всем мире.
B738 (самолет): фото, история разработки, особенности
К разработке авиалайнеров нового поколения компания «Боинг» приступила в 1991 году, когда появились самолеты «Аэробус» семейства А320. В конце 1993 года, после проведения консультационной работы с будущими потенциальными заказчиками была официально запущена программа разработки самолетов «Боинг-737NG».
Новое семейство NG включает модификации 737-600, -700, -800 и -900. Отличительными особенностями семейства являются новая удлиненная на 5,5 м форма крыльев с вертикальными законцовками, усовершенствованная авионика, более эффективные и экономичные двигатели. B738 – самолет, пришедший на замену «Боингу 737-400» и являющийся удлиненной версией модификации 737-700. Дисплеи приборных панелей в пилотской кабине сконструированы на основе электронно-лучевых трубок. Также данная модификация отличается экономичностью по сравнению с другими воздушными судами, например с MD-80. Так, авиакомпания «Аляска Эйрлайнз» смогла сэкономить до 2000 долларов при одном перелете, заменив данные самолеты на «Боинг 737-800».
B738 (самолет «Боинг 737-800») начали проектировать в 1994 году, а уже в 1997-ом были успешно проведены летные испытания. С марта 1998-го начались поставки авиалайнеров новой модификации. Первый заказчик самолетов «Боинг 737-800» – компания Hapag-Lloyd Flug, которая сейчас носит название TUIfly.
Летно-технические характеристики
- Длина фюзеляжа – 39,5 м.
- Высота – 12,5 м.
- Площадь крыльев – 125 м.
- Максимальная вместимость топливных баков – 26020 л.
- Расход топлива на эшелоне – 3200 л в час.
- Предельная дальность перелета – 5400 км.
- Предельное значение скорости – 851 км/ч.
- Максимальная провозная способность – 189 пассажиров при одном классе сервиса, 160 – при двух.
Схема салона
Рассмотрим классическую компоновку B738 (самолет). Схема, представленная ниже, имеет два класса обслуживания. Самые комфортные кресла обозначены зеленым. Самые неудобные и не очень удачные места выделены красным и желтым цветами.
Самые лучшие кресла располагаются в 6 и 13 ряду. Между классами обслуживания имеется перегородка. Данные ряды считаются наиболее комфортными благодаря большому пространству для ног и откидывающимся спинкам кресел. 13 ряд является аварийным, поэтому не предназначен для пассажиров с детьми. Пространство между 13 и 12 рядом всегда должно быть свободным.
Менее комфортным является 12 аварийный ряд. Спинки кресел здесь не откидываются, но расстояние до ближайшего 11 ряда достаточно большое.
Не самый удачный ряд – 11. Спинки кресел здесь жестко фиксированы и не откидываются, а расстояние до ближайшего ряда сравнительно узкое. Также некомфортными считаются места у коридора в предпоследнем ряду, поскольку располагаются около туалетов. Самые неудобные сидения находятся в последнем ряду, поскольку не имеют откидывающихся спинок и располагаются около туалетов.
Представленный вариант компоновки – классический. Любая авиакомпания, эксплуатирующая данные самолеты, может менять компоновку в зависимости от своих потребностей.
B738 (самолет): отзывы пассажиров
Путешественники, летавшие на «Боинге 737-800», оставляют в сети Интернет как отрицательные, так и положительные отзывы.
Среди отрицательных моментов путешествия выделяют:
- Узкое пространство между креслами в некоторых компоновках.
- Сильный шум в салоне во время взлета.
- Узкие проходы между рядами.
- Иллюминаторы располагаются низко.
- Сильная болтанка при турбулентности по сравнению с «Аэробусом А320».
- Сильная вибрация в последних рядах.
Среди положительных моментов:
- Удобные багажные полки.
- В первых рядах вибрация во время полета практически отсутствует.
- Комфортная температура в салоне.
- Самолет быстро набирает высоту при взлете.
- Быстрая посадка.
- Мощные двигатели.
- Безопасность.
B738 (самолет «Боинг 737-800») на сегодняшний день является одним из самых востребованных авиалайнеров в мире. В авиапарках различных перевозчиков он начал появляться с 1998 года. Согласно статистике, каждые пять секунд на Земле взлетает и садится «Боинг 737-800». Данный самолет признан одним из самых безопасных. Конструкторы постоянно работают над повышением степени безопасности воздушного судна.
Страховой кризис взвинтит цены на авиабилеты
Иностранные авиакомпании начали отказываться летать над украинским небом. Пока это не массовое явление, однако отечественные перевозчики, вопреки своей воле, также рисковали частично перестать обеспечивать авиасообщение между Украиной и другими странами.
Причина – в отказе мировых компаний страховать полеты в воздушном пространстве нашей страны.
Норвежский авиаперевозчик приостановил полеты над Украиной
Это вынудило владельцев самолетов, также иностранных, которые предоставляют воздушные суда украинским перевозчикам в лизинг, потребовать вернуть их на территорию ЕС.
Так, компании SkyUp, выполнявшей 13 февраля рейс из португальской Мадейры в Киев, из-за требований лизингодателя пришлось совершить посадку в Кишиневе. Остаток маршрута до украинской столицы клиентам пришлось преодолевать на предоставленных авиаперевозчиком автобусах.
Впрочем, правительство уже приняло меры, чтобы не допустить полной остановки авиасообщения Украины с внешним миром.
На данный момент все выглядит так, что эта угроза отведена, однако политическая напряженность, даже если она не получит развития, не пройдет бесследно для отечественного авиарынка – некоторые эксперты спрогнозировали подорожание билетов из-за роста стоимости страховых услуг мировых компаний.
Как развивались события и чего удалось добитьсяОбострение политической напряженности еще в январе вынудило европейские авиакомпании пересмотреть графики рейсов в/из Украины. К примеру, 23 января немецкая Lufthansa перестала выполнять полеты в Киев в вечернее время, чтобы не оставлять экипажи на ночь в украинской столице.
С конца прошлой недели, на пике опасений о возможном вторжении РФ, ситуация усугубилась – началось все с заявления нидерландского перевозчика KLM о приостановке полетов в Украину. При этом обоснованием этого послужило решение нидерландского Министерства иностранных дел о присвоении Украине красного уровня опасности поездок.
Все это, напомним, происходило на фоне эвакуации ряда иностранных дипмиссий из Киева и призывов иностранных государств к своим гражданам скорее покинуть территорию нашей страны.
Иностранные авиакомпании отказываются от ночных стоянок в Киеве и меняют графики полетов
Украинские перевозчики продолжали выполнять рейсы в штатном режиме до субботы 12 февраля, когда, как сообщили в SkyUp, лизингодатель (резидент Ирландии) их самолета, летевшего из столицы португальского острова Мадейра Фуншала в Киев, потребовал как можно скорее вернуть судно на территорию ЕС.
Это стало следствием сообщений крупнейших мировых страховых компаний о том, что их услуги не будут распространяться на машины, влетающие в воздушное пространство Украины.
Нашим авиакомпаниям пришлось подчиниться требованиям владельцев самолетов – так, МАУ начала вывозить суда, принадлежащие компаниям Sasof III, Awas 36820 Trust и ALC B738 29674 на хранение в Европу. Всего же требование коснулось 23 самолетов, принадлежащих МАУ, SkyUP, а также украинскому лоукост-перевозчику Bees Airline.
Параллельно с этим от отдельных депутатов Верховной Рады – Алексея Гончаренко из «Евросолидарности» и внефракционного Александра Дубинского – прозвучали утверждения, что украинские власти готовятся закрыть воздушное пространство страны и приостановить работу всех аэропортов.
Однако этого на данный момент так и не произошло – более того, правительству, по всей видимости, удалось урегулировать проблему.
Кризис получилось урегулировать деньгамиКак объяснял у себя в телеграм-канале замминистра инфраструктуры Мустафа Найем, с 13 февраля власти начали переговоры с посольствами стран, где размещены страховые компании, чтобы добиться снятия их ограничений.
Вместе с тем Кабмин увеличил резервный фонд госбюджета на 16,6 млрд грн – эти деньги будут храниться на эскроу-счете Мининфраструктуры, их используют только при необходимости «обеспечения безопасности полетов в Украине для страховых компаний, компаний-перестраховщиков, лизинговых компаний и авиаперевозчиков».
Ryanair прогнозирует повышение тарифов на европейские авиарейсы: в чем причина
Указанных средств должно хватить на страховку как минимум 23 воздушных суден, заверили в ведомстве.
В итоге во второй половине понедельника SkyUp сообщил о достижении договоренностей со страховщиками – это позволило компании возобновить продажу билетов на вылет из Украины, которую компания ранее приостановила на три дня, с 14 по 16 февраля, до разрешения страхового кризиса.
«Переговоры со страховщиками были сложными, и зарубежные партнеры продолжают регулярно оценивать собственные риски и вести мониторинг ситуации. Однако сейчас совместными усилиями с Мининфраструктуры и правительством мы сумели добиться результатов – полеты в Украине остаются безопасными и защищенными«, – заявил гендиректор перевозчика Дмитрий Сероухов, не вдаваясь в подробности.
Искусственная паникаВся возникшая ситуация со страховым кризисом вызвала подозрения у одного из наших собеседников, эксперта общественной компании «Европатруль» Вячеслава Коновалова. Он обратил внимание, что из иностранных компаний об остановке перелетов в Украину объявили только KLM и норвежская авиакомпания Norwegian.
Все остальные продолжали выполнять рейсы даже в ситуации, когда иностранные лизингодатели выдвигали требования к украинским компаниям вернуть суда на территорию Евросоюза.
«Похоже, что кто-то в авиаотрасли специально захотел устроить панику и вынести вопрос со страховщиками, которые не любят оглашения внутренних бизнес-процессов, в публичное поле. Может, это было сделано для получения поддержки от правительства Украины, которую ранее компании, пострадавшие от коронакризиса, не получали. Теперь же они несколько сократят свои издержки за счет бюджетных средств«, – высказал свою версию событий Коновалов.
Одним из аргументов к высказанному выше, по мнению эксперта, является то, что часть рейсов украинские авиакомпании продолжили выполнять после сообщений о претензии страховщиков, но до завершения переговоров с ними правительства.
В украинский авиастартап InputSoft влили $120 тыс. инвестиций
В свою очередь авиационный эксперт Богдан Долинце предположил, что иностранные авиакомпании смогли беспрепятственно продолжить осуществление рейсов в Украину, в то время как отечественные перевозчики столкнулись с претензиями страховых компаний, благодаря переориентации собственных суден на украинское направление, а лизинговых – на оставшиеся.
«У иностранных компаний может быть много лизингодателей, а, к примеру, у SkyUp, видимо, много самолетов принадлежат одному собственнику. Из-за этого могла возникнуть такая кризисная ситуация«, – высказал мнение эксперт.
Кроме того, он отметил, что в пользу иностранным компаниям мог сыграть отказ от ночных стоянок в Украине – вероятно, для части лизингодателей и страховщиков этого условия было достаточно, чтобы разрешить пользователям суден продолжить выполнять рейсы.
В то же время у украинских компаний могло не оказаться доступа к опции отказа от ночных стоянок на территории Украины.
История аукнется туристамОценивая действия правительства, Долинце указал, что создание властями страхового фонда на 16,6 млрд грн могло стать лишь дополнительным доводом в переговорах с иностранными страховщиками для снятия ограничений.
Однако последние, вероятно, пошли на уступки украинским властям и авиакомпаниям исходя из отсутствия обоснований для чрезмерно жесткой политики – ведь пока ни украинские, ни европейские авиарегуляторы не вводили каких-либо запретов на полеты в украинском воздушном пространстве, что могло бы стать основанием для снятия с себя страховых обязательств.
«В будущем такая жесткая политика могла бы стать поводом для украинских перевозчиков подать судебные иски к страховщикам и лизингодателям из-за полученных убытков«, – указал эксперт авиарынка.
Антонова вытесняют с рынка грузовых перевозок: Airbus заявил о создании собственной авиакомпании
Впрочем, пока Долинце сомневается, что страховой кризис привел к значительным прямым убыткам перевозчиков. Однако вся возникшая ситуация должна увеличить соответствующие затраты бизнеса – они, между тем, будут переложены на путешественников.
«В ближайшее время из-за переоценки страховщиками уровня угроз при осуществлении полетов в Украину, отечественным и иностранным перевозчикам придется начать отчислять страховые взносы в большем размере. Все это повлияет на стоимость билета для конечного потребителя – возможно, отдельные рейсы станут даже менее рентабельными или нерентабельными вовсе«, – говорит Долинце.
При этом эксперт полагает, что даже в случае деэскалации не следует ожидать возвращения страховых ставок на докризисный уровень. Ведь те допсоглашения, которые страховые компании, перевозчики и собственники самолетов подпишут сейчас, могут быть пересмотрены только с началом нового финансового года.
Отдельно стоит отметить, что правительство на момент сдачи этого материала не сообщило, удалось ли договориться со страховщиками о снятии всех ограничений на перелеты и, если да, то на каких условиях.
| НЕИЗВЕСТНЫЙ STRING продукт! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [6] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [16] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [2] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [8] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [4] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [3] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА prod! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [46] UNKNOWN STRING prod! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [17] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [3] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [4] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [3] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [3] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [13] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [2] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [2] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [5] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [4] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [8] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [44] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА prod! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [1] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [14] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [3] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [2] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [2] НЕИЗВЕСТНАЯ СТРОКА продукта! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [48] UNKNOWN STRING prod! НЕИЗВЕСТНОЕ имя STRING! [10] ^ вверху | Ильюшин Ил-76/Ил-78 Candid/Mainstay/Midas Алжир [2] Ирак Иракские авиалинии [ 2] СССР/Россия Атлант-Союз [1] Аэрофлот [2] другие [19] Украина другие [1] Если Вы хотите поделиться профилями этого самолета с нашими посетителями — напишите вебмастеруНапишите вебмастеру Статьи об этом самолете Вы можете прочитать на дружественном сайте Уголок Неба (только на русском языке) | На сайте нашего партнера «Paper Aviation» есть материалы по этому самолету: — Книги и журналы (можно скачать !)
Страницы: [ 1 2 все ] Последнее обновление: 04.01.2013 ПАЛИТРА КРЫЛА проект бесплатен и доступен для всех. У редактора нет любые юридические претензии в отношении авторских прав на материалы, включенные в настоящий документ. Учитывая необходимые информация, имя автора всегда будет полностью указано. Если вы найдете свою фотографию включены сюда без каких-либо авторских прав (или с неправильным указанием), пожалуйста, сообщите сразу к вебмастеру и подсказка будет внесена коррекция. |
Образование гидратов в линии отходящих газов флюид-каталитического крекинга
Апрель-2019
Блокировка гидратами привела к внезапной потере потока отходящих газов установки FCC и скачку давления в системе. Комплексное устранение неполадок позволило принять меры по исправлению положения.
АКИЛ АЛЬ МУХАРРАКИ, АШИШ ДЕШПАНДЕ и ГРЕГОРИ М ЛИЛБЕРН
Бахрейнская нефтяная компания
Резюме статьи
Установка каталитического крекинга с псевдоожиженным катализатором (FCC) в компании Bahrain Petroleum Company (Bapco) представляет собой установку Model II, разработанную UOP, и является лишь второй установкой FCC, построенной за пределами США.Он был запущен в мае 1945 года, всего через три года после того, как на нефтеперерабатывающем заводе Exxon в Бэйтауне, штат Луизиана, США, была введена в эксплуатацию первая установка FCC. Устройство Bapco является одним из очень немногих оригинальных устройств Model II, которые до сих пор находятся в эксплуатации.
Установка FCC компании Bapco изначально была спроектирована и эксплуатировалась как двухступенчатая конверсионная установка для производства высокооктанового авиационного бензина. Первоначальная проектная мощность составляла 18 000 баррелей в сутки. В 1953 г. на установке была проведена капитальная реконструкция, в результате которой мощность была увеличена до 30 000 баррелей в сутки при параллельном подключении двух реакторов при конверсии 45 об.%.В течение следующих 10 лет устойчивая максимальная мощность постепенно увеличивалась, и к середине 1960-х годов она составила около 36 000 баррелей в сутки, хотя конверсия оставалась низкой, в диапазоне от 45 до 50 об.%, чтобы выполнить задачу Bapco по максимальному увеличению производства дизельного топлива. К началу 2000 года проектная мощность установки FCC составляла 43 000 баррелей в сутки, а сырьем в основном был изомат, представляющий собой неконвертированное масло с установки мягкого гидрокрекинга HVGO (2HDU).
В 2004 году в рамках проекта по переработке остатков установки FCC была проведена капитальная реконструкция установки FCC.Основная цель состояла в том, чтобы перерабатывать тяжелую нефть, такую как вакуумный остаток и черный некондиционный газойль (BSGO), из предшествующих установок вакуумной перегонки с использованием новейших доступных технологий. Модернизация включала преобразование блока в блок с одним реактором и установку современной отпарной колонны с насадкой в реакторе и контроля температуры в зоне смешения (MTC) на подающем стояке, что позволило перерабатывать более тяжелое сырье и в конечном итоге привело к сокращению нефтеперерабатывающего завода. бассейн мазута за счет преобразования тяжелого сырья в более легкие и более ценные продукты.
На протяжении всей истории установки FCC компании Bapco стояки с регенерированным катализатором (RCSP) сталкивались с потерей псевдоожижения и нестабильностью циркуляции катализатора. Эти RCSP имеют необычно большую длину – 125 футов, что делает их очень чувствительными к небольшим изменениям скорости аэрации, потока катализатора и свойств катализатора. Работа одного реактора совместно с МТК, которые были частью проекта переработки остатков, привела к увеличению скорости циркуляции катализатора в RCSP, что значительно улучшило поток и стабильность катализатора, и теперь RCSP стал намного менее чувствителен к изменениям свойства катализатора и скорость аэрации воздуха.
В 2007 году были введены в эксплуатацию новые и модернизированные установки, связанные с проектом производства дизельного топлива с низким содержанием серы. Введена в эксплуатацию новая установка гидрокрекинга HVGO (1HCU), а установка 2HDU была модернизирована с установки гидрокрекинга легкого HVGO на установку гидроочистки дизельного топлива со сверхнизким содержанием серы, что значительно снизило доступность сырья для установки FCC. В то время доступное сырье для установки составляло 25 000 баррелей в сутки и представляло собой смесь неконвертированной нефти из 1HCU и «избыточного» HVGO из пула HVGO завода. Этот дефицит сырья установки FCC дал возможность перерабатывать больше тяжелой нефти в соответствии с целями проекта по переработке мазута.
В конце 2011 года была введена в эксплуатацию установка Bapco по производству смазочных базовых масел (LBOU), которая перерабатывала неконвертированное масло из 1HCU. Это привело к еще одному существенному снижению скорости подачи установки FCC и возможности дальнейшего увеличения содержания тяжелой нефти. В настоящее время установка работает непрерывно в режиме переработки мазута с производительностью 13 000 баррелей в сутки, при этом перерабатывается больше тяжелой нефти, чем когда-либо прежде. Включение тяжелой нефти в сырье достигает 60% по сравнению с 8% 10 лет назад, а содержание углерода в сырье по Конрадсону достигает 6.5 мас.%, а содержание металлов на циркулирующем катализаторе обычно 10 000 ч./млн. Это наиболее тяжелое сырье в регионе MENA для установки FCC, работающей без охладителя катализатора. Основным преимуществом стало дальнейшее устойчивое снижение производства мазута на НПЗ и увеличение прибыли НПЗ.
Как и ожидалось, при переработке более тяжелого сырья с более высоким содержанием серы содержание сероводорода (h3S) в отходящих газах установки FCC увеличилось. Однако, несмотря на то, что в рамках проекта по переработке остатков были проведены тщательные проверки HAZOP и управление изменениями, проектная группа не оценила влияние более высокого содержания h3S в отходящих газах установки FCC.Не предполагалось, что более высокое содержание сероводорода в конечном итоге приведет к образованию гидратов в линиях отходящих газов после газопоглотителя, что приведет к повторяющимся засорениям и нарушениям процесса. Эти инциденты снизили доступность технологических установок, что привело к финансовым потерям и потенциальному риску технологического оборудования из-за избыточного давления.
Блок FCC
Неочищенная нефть установки FCC, которая в основном представляет собой HVGO, прокачивается через систему предварительного подогрева сырья, где она нагревается потоками горячих продуктов из основного ректификационного блока (C601, см. рис. 1).Предварительно нагретое сырое нефтяное сырье затем смешивается с исходным тяжелым нефтяным сырьем, и объединенный поток исходного сырья впрыскивается в питающий стояк реактора вместе с распыляющим паром через пять питающих форсунок. Рециркулирующий поток продукта тяжелой каталитической нафты (HCN) также впрыскивается в питающий стояк, чтобы повысить температуру смеси в зоне стояка, уменьшить дельта-кокс и обеспечить переработку большего количества тяжелой нефти.
Пары верхнего погона реактора, которые представляют собой смесь паров углеводородных продуктов и пара из восходящего стояка и отпарной колонны реактора, поступают в нижнюю часть C601, где они частично конденсируются и фракционируются в тяжелый газойль цикла (HCGO), легкий циклический газойль (LCGO), цельная каталитическая нафта (WCN) и влажный газ.
ВХН и жирный газ направляются на переработку на установку концентрирования газа (ГКУ). ВХН перекачивается в питающий барабан ГПА (V509). Влажный газ, насыщенный водой из реакционной секции установки FCC, и отпарный пар, используемый в боковых отпарных установках C601 HCGO и LCGO, также направляется в V509 через компрессор влажного газа (WGC).
Система отходящих газов установки FCC
Газ из V509 поступает в абсорбер GCU (C701) и контактирует с тощей нефтью (неотбензиненный LCGO), которая поглощает тяжелые углеводороды из газа и возвращает их в C601 (см. рис. 2).Нафта из V509 направляется в колонну депропанизации (C702) для удаления легких углеводородных газов, а затем обрабатывается в ряде дистилляционных колонн для извлечения СНГ и продуктов легкой, средней и тяжелой нафты.
C702 работает при нормальном давлении 260 фунтов на кв. дюйм. Давление отходящего газа C702 снижается через клапан регулирования давления (PV3) до давления в головке C701, равного 135 фунтов на кв. дюйм. Поток отходящих газов C702 объединяется с отходящими газами из C701, и общее давление отходящих газов снижается через клапан регулирования давления C701 (PV1) до 67 фунтов на кв. барабан (В738).Отходящий газ из V738 поступает на установку очистки олефинового газа для удаления сероводорода, а затем в систему топливного газа нефтеперерабатывающего завода.
Давление после PV1 практически постоянно, поскольку оно зависит от давления в системе топливного газа. Отходящие газы также подвергаются охлаждению Джоуля-Томсона, поскольку они дросселируются в PV1.
Любое внезапное нарушение скорости потока отходящих газов может вызвать сбои в системе топливного газа и сбои в нагревателях, расположенных ниже по потоку.
Составы отходящих газов и h3S
Содержание h3S в объединенных отходящих газах увеличивается по мере увеличения содержания серы в сырье установки FCC; чем больше включение тяжелой нефти в сырье установки FCC, тем выше содержание h3S в отходящих газах.После пуска 1HCU в 2007 г. содержание h3S в отходящих газах установки FCC увеличилось с 3 мольных % до 4,4 мольных %, а после ввода в эксплуатацию LBOU в 3 квартале 2011 г. оно увеличилось до 8,5 мольных %. -качества газа показаны в таблице 1.
Ceratopsia), новый пситтакозавр из нижнего мела Северо-Восточного Китая на JSTOR
. АбстрактныйНовый вид пситтакозавров, Psittacosaurus meileyingensis, основан на хорошо сохранившемся черепе с упомянутыми черепными и посткраниальными остатками.Череп высокий относительно своей длины и имеет субкруглый профиль. Отличительные характеристики нового вида включают низкий рог на квадратно-скуловой кости и выступающий вентральный фланец на зубной кости. Открытие Psittacosaurus meileyingensis и Psittacosaurus mongoliensis в одной и той же формации убедительно свидетельствует об их сосуществовании.
Информация о журналеЖурнал палеонтологии позвоночных (JVP) публикует оригинальные статьи по всем аспектам палеонтологии позвоночных, включая биостратиграфию, эволюцию, функциональная морфология, ихнология, палеоантропология, палеобиогеография, палеоэкология, филогения, систематика, тафономия и происхождение позвоночных.JVP был опубликован с 1984 г. Обществом палеонтологии позвоночных (СВП). Журнал был основана в 1980 году доктором Иржи Зидек в Университете Оклахомы. Подписка к печатному изданию JVP и приложениям к нему (иногда мемуары SVP и ежегодный том Program and Abstracts) входит в стандартный и студенческий членство в SVP (www.vertpaleo.org)
Информация об издателеОсновываясь на двухсотлетнем опыте, Taylor & Francis за последние два десятилетия быстро выросла и стала ведущим международным научным издательством.Группа издает более 800 журналов и более 1800 новых книг каждый год, охватывающих широкий спектр предметных областей и включающих оттиски журналов Routledge, Carfax, Spon Press, Psychology Press, Martin Dunitz и Taylor & Francis. Taylor & Francis полностью предана своему делу. публикации и распространению научной информации самого высокого качества, и сегодня это остается первоочередной задачей.
SimCity — Часто задаваемые вопросы по зонированию/строительству пончиков — Super Nintendo — By Cyan of Doma
________________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ SNES SimCity Donut Building/Часто задаваемые вопросы по верхнему зонированию/Руководство от Saint Cyan Версия 1.1 30.06.2007 Электронная почта: [email protected] _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ Содержание: I.Предлог II.Выбор хорошей карты III.Изучение техники сборки пончиков IV.Верхнее зонирование V. Начало работы VI. Дары и стратегия VII.Читы и секреты VIII.Часто задаваемые вопросы IX.Кредиты X. Юридический _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ Я.Предлог Что ж, это будет мой третий FAQ, так что потерпите меня в этом. Я видел несколько других замечательных часто задаваемых вопросов/руководств по этой старой игре, но ни одно из них не затрагивает вопросы, которые я буду освещать здесь. Мотивация для этого часто задаваемых вопросов исходит от нового открытие, которое я обнаружил, которое включает все подарки, используемые для строительства пончика метод полного раскрытия потенциала. Я также редко вижу, чтобы кто-то обсуждал это игра больше, но с ее переизданием для виртуальной консоли Wii я надеюсь, он снова обретет популярность.Пожалуйста, помните, что это руководство не на 100 процентов точна и не завершена, поэтому будет много грядущих обновлений. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (я). История версий FAQ принят. Завершено обновление версии 1.1, исправлены некоторые повторяющиеся текст, незначительные ошибки формата. Добавлен подраздел Катастрофы/Стратегии. Версия Завершено обновление 1.2, добавлен подраздел решения городских проблем, мелкие обновления всюду._________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ II. Выбор хорошей карты Есть около 2000 карт, которые вы можете выбрать, чтобы начать строить свой города, большинство из них плохо приспособлены для строительства мегаполиса размером город, из-за количества и расположения воды. я перечислю топ 2 карты для строительства огромного города. Это карты № 061 и 137. Для более подробную информацию о картах вы можете проверить Вебграфика отличная Лучшая карта FAQ здесь, на gamefaqs.Тем не менее, эти 2 являются лучшими, если не считать ни одного. Держите в Имейте в виду, что вам нужна карта с хорошим участком земли в центре карта. Карты с большим количеством воды посередине повредят более высокая плотность населения, обычно встречающаяся там. Не выбирайте один карты острова. Хотя у вас есть весь центр карты для работать, у вас никогда не будет достаточно места, чтобы охватить население в 500 000 человек. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ III.Обучение технике сборки пончиков Хорошо, если вы читаете это, вы, скорее всего, знаете, как это сделать. Однако Расскажу подробно для тех, кто играет в первый раз. Этот метод строительства использует жилые и коммерческие зоны в шаблонах. из 8, образуя квадрат с открытым местом для подарков, парков или полиции/пожарных отделы. Вот пример, каждая буква представляет собой зону, T представляет железнодорожные пути, P представляет полицейское управление. Вот ссылка к моему снимку экрана, который показывает сборку пончика, чтобы вы могли лучше идея.Также я покажу вам, как построить свой стадион по образцу. С будет представлять зону стадиона. http://img.photobucket.com/albums/v738/sfrickinc/000_0773.jpg ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~~ ~~~~~~~~Т РРР Т РРР Т ССС Т ССР Т~~~~~~~~~ ~~~~~~~~Т РПР Т РПР Т КПК Т ССР Т~~~~~~~~~ ~~~~~~~~Т РРР Т РРР Т ССС Т РРР Т~~~~~~~~~ ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Это основной метод, обратите внимание, никаких промышленных зон, я покажу вам. как разместить их при начале работы в разделе номер V.Теперь, когда вы знаете, как построить пончик, пора научиться максимизировать его полную потенциал! _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ IV. Верхнее зонирование Это лучшая часть руководства. Здесь вы узнаете секрет верхнее зонирование, метод, который я, кажется, открыл первым, или по крайней мере, первый, кто выложил это на всеобщее обозрение.Используя это как вашей стратегии, вы можете раскрыть весь потенциал своих даров, распространить стоимость вашей земли, чтобы даже края карты и все в между! Следующая ссылка представляет собой карту стоимости земли. Это показывает полную потенциал метода верхнего зонирования, возможно, усовершенствованного, который у меня есть наконец достигнуто. Как только вы подтвердите, что вы заперты в топе схема зонирования, ваша карта стоимости земли должна быть чем-то похожа на эту один. http://img.photobucket.ком/альбомы/v738/sfrickinc/000_0762.jpg На данный момент это лучший город, который я сделал с точки зрения стоимости земли. ряды 6х5 в верхних зонах было трудно работать и поддерживать достаточное количество промышленности, но общее количество зон I на самом деле очень мало для размера мегаполиса город. Это показывает истинный потенциал метода верхнего зонирования, оставляя у вас больше места для зон R и C, и приятный визуальный эффект со всеми топы у вас есть. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (я).Метод верхнего зонирования Теперь, первое, что нужно помнить, пытаясь начать успешный топ схема зонирования заключается в сохранении непосредственно перед размещением первого подарка, чтобы вы может найти, где разместить подарок для его максимального потенциала. я покажу как начать работу с этим в следующем разделе, здесь мы будем только посмотрите, как определить, есть ли у вас успешный паттерн верхней зоны. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (ii).Первые несколько подарков Как только вы получите свой первый подарок, скорее всего, Дом мэра, НЕ поставь еще. Я НАСТОЯТЕЛЬНО предлагаю вам вместо этого потратить все свои деньги на получить подарок банка, затем использовать денежный код (см. раздел читы/секреты) так что вы можете строить свободно. Я обычно строю около 3 пончиков, 2 жилых 1 Коммерческий, а в центре добавьте парки или PD. Убедитесь, что все идеальные условия для роста, к этому времени у вас наверняка будет горожане, требующие пожарной части и стадиона, строят их._________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (iii). Как найти высокую стоимость земли Теперь, с вашими подарками банка и дома, выберите один из ваших коммерческих пончиков. блочные зоны для размещения банка в центре. Сейчас это важно, постройте еще несколько промышленных зон, чтобы стимулировать рост сразу после того, как вы разместите банк. Подождите несколько минут, затем проверьте карту стоимости земли.Если блок пончиков вокруг банка, что означает, что все 8 зон кажутся красными или оранжевый квадрат, то вы на пути к удачному узору! Если это не полностью оранжевый или красный квадрат, а только маленький прямоугольник, тогда вы должны начать сначала и разместить свои пончики по-другому. Сейчас если все 8 зон в конечном итоге являются зонами C с высокой стоимостью земли, следующим шагом будет построить еще один пончик из R-зон рядом/над/под хай стоимость земли один. Затем сконструируйте еще один блок-пончик, но на том же линия в качестве вашего блока пончиков с высокой стоимостью земли.Вот пример. Б это банковская зона. H будет подарком дома. Помните, что ваш узор размещения подарка в любой другой зоне блока пончиков НИКОГДА НЕ ДОЛЖЕН ИЗМЕНЯТЬСЯ, даже если это всего один пробел, это не будет работать правильно. Так что будьте осторожны, когда пытаетесь продолжить свой рисунок над водой. к другой форме рельефа. ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ ~~~~~~~~Т РРР Т РРР Т ССС Т~~~~~~~~~ ~~~~~~~~T RHR T RPR T CBC T~~~~~~~~~ ~~~~~~~~Т РРР Т РРР Т ССС Т~~~~~~~~~ ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (4).Поиск шаблона верхнего зонирования Еще раз подождите немного и проверьте карту стоимости земли. Если эта зона также выглядит как полный красный или оранжевый квадрат, а все зоны R заканчиваются вверх является высоким значением, то установлен шаблон верхнего зонирования! если ты продолжайте строить по этой схеме либо по горизонтали, либо по вертикали означает, что каждый второй блок пончиковых зон с подарком в центре БУДЕТ оказаться во всех верхних зонах, просто следите за тем, чтобы не потерять рост, будь то катастрофа или плохое планирование.Используя этот шаблон, вы не можете только принесите высокую стоимость земли к краям карты, вы также поправитесь ценности земли между каждым блоком зон с подарками и полностью сбалансированный город! Все это плюс вы можете быть уверены в правильном размещении подарка никогда не станет жертвой плохого роста или стоимости земли! Планирование наперед также становится проще, так как у вас есть готовый шаблон и вы можете визуализировать, как вы хотите расширить свои зоны. Дом подарок, кажется, не искра высокая стоимость земли, скажем, зоопарка или большинства других жилых даров.Чтобы быть уверенным, что вы зафиксировали верхний шаблон зонирования, создайте еще один блок зон в том же шаблоне / ряду и поместите другой подарок в правильное место. Если этот подарок дает вам полный оранжевый/красный квадрат для карты стоимости земли и находится в той же строке, что и ваш банк/дом, то Вы можете быть уверены, что схема верхнего зонирования сработала. Даже если дом появляется только как меньший прямоугольник, пока другие 2 верхние зоны находятся на одной линии и идеально следуют шаблону, зоны R вокруг дом, в конечном счете, все достигнет вершины._________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (в). Космические ряды Ряды зон между вашими верхними зонами - это то, к чему я пришел. вызов "Космические ряды". Для блоков пончиков в этих строках вы должны попытаться всегда размещайте PD в центре блока. Это снизит уровень преступности а также помочь выровнять радиус действия вашей полиции. Исключением из этого являются блоки зон, лежащие вдоль скрытого креста карты, которые Я расскажу дальше.Эти ряды зон не будут иметь роста и высокая стоимость земли в других, верхних зонированных рядах, если они не находятся рядом с центр карты. В конце игры некоторые из этих зон не будут видны какое-либо развитие, тщательно размещайте I зоны в этих областях, но не не ставьте слишком много. Вот хороший пример, T — треки, R — резидент- nial, C коммерческий, I промышленный, P полицейский участок, G подарок, N для неосвоенной зоны, S для пробела, Z для верхний зональный ряд.Иногда вы обнаружите, что у вас есть 1 или 2 подарка зоны, оставшиеся после того, как вы полностью завершили верхний шаблон зонирования. Место эти подарки рядом с центром карты, или между 2 вашей верхней зоной блоки. ~~~~~~~~~~ZZZ~~~SSS~~~ZZZ~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ Z~~~~~~~T RRR T CCC T RRR T~~~~~~~Z Z~~~~~~~T RGR T CPC T RGR T~~~~~~~Z Z~~~~~~~T RRR T CCC T RRR T~~~~~~~Z ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ С~~~~~~~Т РРР Т РНР Т РРР Т~~~~~~~С S~~~~~~~T RPR T NPN T RPR T~~~~~~~S С~~~~~~~Т РРР Т ННР Т РРР Т~~~~~~~С ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ Z~~~~~~~T CCC T RRR T RRR T~~~~~~~Z Z~~~~~~~T CGC T RPR T RGR T~~~~~~~Z Z~~~~~~~T CCC T RRR T RRR T~~~~~~~Z ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ZZZ~~~SSS~~~ZZZ~~~~~~~~~~~ Итак, что бы я сделал здесь, так как этот центральный блок зон не работает? ну есть..... ~~~~~~~~~~ZZZ~~~SSS~~~ZZZ~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ Z~~~~~~~T RRR T CCC T RRR T~~~~~~~Z Z~~~~~~~T RGR T CPC T RGR T~~~~~~~Z Z~~~~~~~T RRR T CCC T RRR T~~~~~~~Z ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ С~~~~~~~Т РРР Т РИР Т РРР Т~~~~~~~С S~~~~~~~T RPR T IPI T RPR T~~~~~~~S S~~~~~~~T RRR T CIR T RRR T~~~~~~~S ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ Z~~~~~~~T CCC T RRR T RRR T~~~~~~~Z Z~~~~~~~T CGC T RPR T RGR T~~~~~~~Z Z~~~~~~~T CCC T RRR T RRR T~~~~~~~Z ~~~~~~~~ТТТТТТТТТТТТТТТТТТ~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ZZZ~~~SSS~~~ZZZ~~~~~~~~~~~ Разместив эти I-зоны именно таким образом, они не повлияют на верхние зоны с более высокой стоимостью земли, так как выход загрязнения будет как раз застенчивый из тех зон высокой ценности.Это также может даже вызвать новый рост в этом районе, так как зоны R ближе к зонам I, что означает новую работу рост и сокращение времени в пути для граждан в этом районе. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (ви). Крест стоимости земли Наконец, еще одна вещь, заслуживающая внимания. Вы знаете, как, когда вы прокручиваете на карте появится маленькое поле с вашим местоположением и номером карты в верхний правый угол экрана? Видите там пунктирный крест? Это почти как индикатор того, где зоны могут иметь наибольший потенциал.По большей части центр карты будет иметь лучшую стоимость земли. и рост. Однако, если вы строите свои блоки пончиков в соответствии с этим (крест) и использовать подарки, они с гораздо большей вероятностью окажутся в итоге волчками. Посмотрите на фото моего города-мегаполиса по этой ссылке. http://img.photobucket.com/albums/v738/sfrickinc/000_0776.jpg Обратите внимание, как стоимость земли выше вдоль той (перекрестной) земли, которую я построили зоны вдоль. Учитывайте это при строительстве своего города._________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ Раздел V. Начало работы Прежде всего, я хочу дать вам общее представление о том, как начать. Это не обязательно должно быть точно так же, как вы планируете построить, но это работал отлично для меня каждый раз, когда я использую его. После этих шаги по порядку должны быть простым способом начать работу. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (я).Шаг за шагом 1. Выберите свою карту и используйте простую настройку для получения 20 000 стартовых денег. Постройте 2 АЭС рядом друг с другом, в дальнем углу вашей карты. Установите свои налоги на 0 процентов и установите скорость игры на самая низкая настройка. 2. Начните строить свои промышленные зоны вдоль края карты, в узор, похожий на этот. Имейте в виду, что пространство является ключевым, постарайтесь сохраняйте шаблоны ровными и как можно более близкими с полной направляющей покрытие./ будет представлять край карты, N будет представлять атомная электростанция. ////////////////// /NN /ТТТТ /II Т /II Т /ТТТТ /II Т /II Т /ТТТТ 3. Начните строить свои жилые и коммерческие зоны в пончике модели, располагая их как можно ближе к промышленным зонам, но держите их как минимум на расстоянии 2/3 зоны от них, так что загрязнение не навредить их потенциалу. Также постройте пожарную часть и несколько отделения полиции по мере необходимости.4.После того, как у вас будет 2 полноценных жилых и 1 полноценный коммерческий блок, начните подключив их к мощности вместе со своими промышленными зонами и получив рельсы поставил. НИКОГДА не пользуйтесь дорогами, пока вы не будете готовы получить Парк развлечений или Казино в подарок, в этом случае ОБЯЗАТЕЛЬНО построить длинную дорожку дорог. После того, как вы получите подарок, сразу же снесите бульдозерами все дороги. 5. К этому времени у вас должно быть не менее 5 ПД, 1 ФД, 8-12 И зон, 16-20 Р зон и 8-10 коммерческих зон.Израсходуйте оставшиеся деньги на парки или все, что вы считаете нужным. 6. После того, как вы убедитесь, что у всего есть электричество и полный железнодорожный/полицейский радиус, установите максимальную скорость игры. 7. Ваша деревня должна стать городом, вы получаете подарок мэрии. Этот должно произойти не позднее апреля. 8. Ваш город должен стать городом, надеюсь, самое позднее к ноябрю. Вы получаете подарок банка. 9. Настало время использовать чит-код на деньги (см. раздел секретов).Это использовать не позднее декабря, так что бюджет/чит возьмет свое эффект. 10. К январю у вас должно быть максимальное количество денег и 2 или более подарков для работы. с участием. Я пока не рекомендую использовать подарки PDHQ. Сохраните их для позже, когда вы строите вокруг центра карты. Об этом когда граждане будут требовать стадион, постройте их в районе назначенный для него. Вам понадобятся еще 2 стадиона позже, для дополнительных Подарок зоопарка, но этот ВСЕГДА останется в вашем городе или горожанах будет требовать этого, и ваши жилые зоны пострадают.11. Сейчас самое время сохранить игру и начать пробовать Верхнее Зонирование. метод (см. раздел IV). Если ваши попытки верхнего зонирования не работают, затем сбросьте это сохранение, прежде чем вы зря потратили свои дары, и повторите попытку. Этого должно быть достаточно, чтобы вы начали. Теперь пришло время, чтобы я начал разрабатывать общую стратегию игры. я разделю каждый раздел стратегии на каждом уровне города, которого вы достигаете. я буду также разработать все виды стратегии._________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ VI. Подарки и стратегия Прежде всего, нам нужно просмотреть контрольный список подарков. Получение ВСЕХ из них имеет решающее значение для превращения вашего города в мегаполис. Я покажу каждый подарок и как его получить. Я также покажу вам, какие зоны получат наилучшие выгоды от размещения этого подарка в центре блока пончиков.Никогда не размещайте подарки рядом с промышленными зонами! Всего можно получить 28 подарков без обмана. Взять их все, чтобы у вас был полный потенциал. Свалки не учитываются в этом подсчете так как сумма, которую вы получаете, зависит от выбранной вами карты. Вот подарок контрольный список. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (я). Контрольный список подарков: Дом мэра <-> Достичь 2000 населения <-> Жилой Банк <-> Достигните 10 000 населения и используйте все свои деньги <-> Коммерческий Штаб-квартира полиции <-> Постройте 6, 12 и 18 PD, чтобы получить все 3 <-> Жилые Fire HQ <-> Постройте 6, 12 и 18 FD, чтобы получить все 3 <-> Residential Зоопарк <-> 2 возможно, построить 1, затем еще 2 стадиона <-> Жилой Парк развлечений/казино <-> 5 доступных, постройте длинный участок рельсов для первые 2, затем длинный участок дорог для остальных 3 <-> жилой для парка развлечений, рекламы для казино Библиотека <-> 3 возможных, зависит от количества школ/больниц <-> Resi- зубной Экспо <-> Построить морской порт и аэропорт <-> Коммерческий Железнодорожный вокзал <-> 2 возможно, построить 50, затем 250 тыс. путей <-> Коммерческий Ветряная мельница <-> 2 возможных, полностью развить 100, затем 250 зон <-> Коммерческая Городской парк <-> 3 возможных, постройте 300, 600 и 900 единиц парка <-> Оба Статуя Марио <-> Достичь 500 000 населения <-> Оба Фонтан <-> Игра до 1950 года <-> Оба Свалка <-> Полностью развить определенные проценты карты <-> Дополнительные земли _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (ii).Общая стратегия Итак, теперь, когда мы знаем, как получить все подарки и где их разместить, пришло время перейти к некоторой общей стратегии. ~ Внимательно следите за барами спроса. Вы хотите, чтобы спрос был как можно выше когда дело доходит до зон R и C. I зона спроса почти всегда будет быть очень высоким, если вам удастся удержать его на низком уровне, начните строить как можно больше зоны R до тех пор, пока спрос на зоны I снова не возрастет. Если спрос на зоны C начинает снижаться, не беспокойтесь об этом слишком сильно, но попытайтесь построить больше зон R или I.Если спрос на зоны R начнет снижаться, тогда вы хотите быстро построить зоны I и зоны C в меньшей степени. Вы никогда не хотите, чтобы спрос в зоне R был низким, никогда. ~ Поддерживайте близость между вашими PD, жилыми и коммерческими зонами. ~ Вы хотите, чтобы ваш процент зоны был сбалансирован. Около 50-60 процентов город должен быть жилым, 15-20 процентов коммерческим и 20-30 процентов промышленный, когда он полностью сделан. Следите за датчиком спроса в правом верхнем углу экрана.Если они все выше RCI буквы, постройте больше таких зон. Если ниже, то постройте больше других типы зон. Эти проценты НЕ включают другие типы зон. ~Электростанции важны, вам никогда не понадобится больше 12, если только вы стекируете зоны (см. раздел «Читы/секреты»). Постройте их все трогательно друг друга, вдоль угла/края карты. Размещение 13-го может быть полезно, если у вас очень большое количество зон. ~ Следите за своими картами и голосовыми меню.Никогда не оставайтесь без взглянув на них. ~ Постройте свой аэропорт и морской порт в углах карты или в изолированном площадь. Они выделяют много загрязнений. ~ Сохраняйтесь чаще! Если вы столкнулись с катастрофой в середине сборки, и не сохранял какое-то время, ты будешь ненавидеть себя за то, что не сохранил чаще. ~ Если вы попали в бедствие, такое как Землетрясение или Торнадо, вы можете просто хочу перезапустить последнее сохранение, так как наносимый урон почти всегда неисправимый.~ Если вы играете на консоли SNES, опасайтесь ошибки запуска. Каждый раз, когда вы нужно загрузить свой город, уровень преступности взлетает до небес и действительно вредит вашему подсчет населения. Избежать этого невозможно, и это может стоить более 5000 человек потеряно. ~ Сохраните свои подарки PDHQ в центре карты. Вот где самая высокая плотность людей будет, и использование других подарков в ваших блоках пончиков здесь не покроет уровень преступности. ~ Как только вы получите 3 подарка FDHQ и 3 библиотеки, начните искать больницу, школа и зоны ФО.Снести их все бульдозерами, кроме, может быть, больницы и школы в зонах с низкой стоимостью земли. Они бесполезны и занимают место, вы следует перестроить эти области с зонами R или C. ~ Приступая к работе, выровняйте внешние районы вашего города парками. Этот имеет тенденцию помогать намного больше в начале игры. ~ Держите свои зоны R и C высокими в начале игры. Как только вы нажмете Население 100 000 человек, переключите свое внимание на зоны I. ~ Будьте готовы к кораблекрушению или авиакатастрофе, они довольно распространены.если ты если такое случится, быстро снесите бульдозерами прилегающие территории, чтобы предотвратить пожары от распространения. Затем постройте массовые ПЗ вокруг области. ~Возьмите подарок Парка Развлечений вместо Казино. Казино вызывает преступность, в стоимость нескольких дополнительных долларов в конце года. Помните, что для получить все 5 подарков в парке развлечений, вы должны сделать длинный участок дороги но будете сносить их бульдозерами, как только у вас будут все 5. ~ ВСЕГДА поддерживайте финансирование на уровне 100 процентов.~НИКОГДА не используйте угольные электростанции. ~ Ищите затемнения в зонах R с низкой стоимостью земли, они там распространены. ~ Не запутайтесь с макетом вашего города. Держите его как можно более чистым. ~ При строительстве вашего аэропорта/морского порта помните, что вам НЕ НУЖНО включите их, чтобы получить желаемый эффект. Это может снизить риск кораблекрушения или авиакатастрофы. Однако, как только вы достигнете 100 000 населения, они должны быть включены. ~ В начале работы создавайте шаблоны блоков пончиков равномерно вокруг центра. карты.Причина в том, что рост, как правило, лучше в начале части игры, и получить хороший рост в конце игры легче когда у вас есть только центр карты для строительства, и все остальное вокруг него уже развито. Итак, построив «Рамку» вокруг центре карты вы можете получить наилучшие результаты. ~ Стройте коммерческие зоны, которые находятся далеко от центра карты рядом с вода. Там у них гораздо больше шансов добиться большего успеха. ~ Используйте дары свалки с умом.Используя их для зон R в воде, вокруг центра карты работает хорошо. Или если у вас есть блок пончиков зон, которые вписываются в шаблон для верхней зоны, но не могут быть полными блок пончиков из-за воды, используйте их там и поместите подарок посередине для максимального потенциала. ~ Сбалансируйте свои зоны R и C. Вы не хотите, чтобы блок зон R находиться очень далеко от зон C или блоков зон C в любой точке. ~Мне нравится устанавливать минимальную скорость игры, когда я строю больше чем 2 блока пончиков за раз.Затем я включаю его обратно на самый высокий настройка и проверка карты стоимости земли или другой статистики, пока я жду чтобы увидеть, будет ли хорошо развиваться вновь построенный район. ~ Когда вы доберетесь до отметки в 300 000, важна каждая деталь. В этот момент в игре вам нужно начать тщательно строить и планировать предстоящий. Проверьте свое меню Totals и следите за суммой в каждой зоне. ~ Как только в вашем городе проживает около 450 000 человек, здесь вызов начнется.Зоны внутри или вокруг углов карты произойдет значительное снижение стоимости земли и плотности населения. Если у вас есть высокий спрос на коммерческие или промышленные зоны, которые вы скорее всего, в этот момент придется перезонировать эти области в зону C блоки-пончики или поместите туда пару I-зон. ~ Типичный мегаполис имеет около 400+ зон R, 130-180 зон I, 100- 130 зон C и примерно 75-95 отделений полиции. Имейте это в виду, как вы строите свой город и внимательно следите за полосами спроса.~ Любая береговая линия, которая не была застроена, вы должны разместить парки. ~ Обязательно получите ВСЕ подарки к тому времени, когда ваш город будет готов. Получающий Фонтан обычно самый сложный, так как требует много времени. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (iii). Обращение и решение городских проблем Здесь я расскажу о решении проблем, с которыми будут сталкиваться ваши граждане. жалобы в вашем голосовом меню.~Преступление~ Преступление не трудно исправить. Просто отсканируйте карту уровня преступности, чтобы проблемные зоны в желтом или оранжевом цвете, а полицейские участки в эти области. Также сбалансируйте свои полицейские участки и помните, что подарок PDHQ будет охватывать почти вдвое больший радиус, чем обычная зона PD. ~Расходы на жилье~ Это, пожалуй, самая распространенная жалоба горожан. Исправление может быть несколько сложно, консультант по играм, доктор Райт скажет вам, что вам нужно построить зоны I и C ближе к вашим зонам R и попытаться сохранить ваши зоны с более высокой стоимостью земли ограничены.Я не согласен с последней частью совет, который он дает, у вас никогда не будет достаточно зон с высокой стоимостью земли, если вы Спроси меня. Построение большего количества I-зон — это то, как я решаю проблему стоимости жилья. Этот не является серьезной проблемой, которая повредит росту, но, скорее всего, постоянный. ~Налоги~ Это легко, если только вы не используете чит на деньги (см. раздел VII-и). Игры начинают вас с ставки налога по умолчанию в размере 7 процентов. Со временем горожане начнут жаловаться на это, так что если у вас проблемы с ростом, снизьте налоговую ставку примерно на 2 или 3 процента, пока они снова не начнут жаловаться на это.Если вы собираетесь чтобы использовать чит на деньги, просто уменьшите его до 0 процентов. ~Безработица~ Еще одна очень распространенная проблема, которую также довольно легко исправить. Только что строить больше зон I и зон C в меньшей степени. Если ваша карта заполнена, тогда вам придется повторно зонировать некоторые из ваших зон R, которые не делаешь очень хорошо. Хотя первоначальная потеря может вас обеспокоить, как только новая там начинают развиваться зоны и безработица снижается, ваше население Марк собирается подняться.~Загрязнение~ Возможно, самая распространенная проблема, а также одна из самых сложных для устранения. Вы должны тщательно сбалансировать проблемы безработицы и загрязнения. То промышленные зоны очень важны, и вы должны иметь большое количество их, чтобы сдержать безработицу. Однако они собираются загрязнять и распространить их, как предполагает доктор Райт, будет непросто. По большей части сохранение зон I на краю карты будет сокращать вниз от общего количества загрязнений.Добавление парков вокруг зоны I также может сократить его. Не существует простого решения проблемы загрязнения и жалобы на это, снос бульдозерами этих зон I повредит вашему население отметьте любым способом, которым вы его нарежете. Все, что вы действительно можете сделать здесь, это сканировать для самых высоких зон загрязнения и бульдозерных I зон в этих районах. Не сносите бульдозерами слишком много, только те, которые уменьшат загрязнение. больше всего в этой области, затем перестройте эти зоны в зоны C. Вас также следует попытаться построить новые зоны I в областях карты, которые не развиты. хорошо.~Трафик~ Это никогда не должно быть проблемой. Просто вообще не пользуйтесь дорогами, если это не пора идти за 3 подарками в парке развлечений. Как только вы получите подарки, вы должны снести бульдозерами все дороги, которыми вы пользовались сразу. ~Огонь~ Если это ваша основная проблема, у вас большие проблемы. Есть огонь бушует где-то в вашем городе, найдите его и позаботьтесь о нем как можно скорее. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (4).Катастрофы Здесь я собираюсь обсудить, как восстанавливаться после аварий, и зная когда перезапустить, когда ущерб слишком велик. Если вы когда-нибудь потеряете подарок зону к катастрофе, рассмотрите возможность сброса до последнего сохранения. Также держите в Имейте в виду, что в конце игры рост намного медленнее, а это означает, что те Зоны с более высокой стоимостью земли, которые вы потеряли, никогда не восстановятся при восстановлении. А Последнее замечание: пожарные команды жизненно важны для восстановления после стихийных бедствий в содержащих пожары. Однако, как только все пожары потухнут, снесите их бульдозерами. прочь.~Огонь~ Пожары, как правило, начинаются в коммерческих зонах с высокой стоимостью земли. Если у тебя есть вырваться, быстро снести бульдозерами ВСЕ окружающие зоны, а обломки оставить за зонами, близкими к огню. Получите пожарные части мириться очень быстро вокруг огня и питания их. Если огонь распространится на центр зоны, вся зона взорвется пламенем, нехорошо. Если вас поразил пожар, и подарочная зона была повреждена или уничтожена, Я предлагаю перезапустить ваше последнее сохранение, так как подарки являются наиболее ценными зоны, которые вы можете иметь.Другие стихийные бедствия, скорее всего, вызовут пожары, но есть шанс, что случайный вырвется наружу. ~Наводнение~ Наводнение происходит в районах вдоль береговой линии. Паводковые воды возьмут из любых зон или других вещей на своем пути, вызывая пожары или потерянные зоны. Опять же, если вы потеряете подарки из-за наводнения, сбросьте свое последнее сохранение. То лучший способ оправиться от наводнения - это то же самое с пожарами, снести бульдозерами уберите опасные зоны, а затем восстановите после того, как вода отступит.Место- создание парков вокруг наводнения МОЖЕТ замедлить его развитие, но это не подтверждено. ~Торнадо~ Торнадо – одно из самых опасных бедствий. В начале игры это не так уж сильно беспокоит, так как торнадо вряд ли поразит ваш маленький город. Однако, как только вы начнете выбегать из комнаты, торнадо проложить путь разрушения через город. Если воронкообразное облако попадает в центр зоны, он взорвется и подпитает путь огня что торнадо уже вырезал.Восстановление после торнадо не будет легко, рассмотрите возможность сброса, если вы сильно пострадали или потеряли подарки в шторм. Попробуйте угадать, куда движется торнадо, и снесите бульдозером расчистите путь для него до начала пожаров, если вы хотите попытаться восстановить пораженные участки. ~Авиакатастрофа/Кораблекрушение~ Эти бедствия довольно часты, но не так страшны, как большинство других те. Авиакатастрофа может быть серьезной в зависимости от того, где она разбилась. Если он врезается в центр зоны или в многолюдный квартал вашего города затем действуйте быстро, чтобы потушить огонь.Если подарок потерян, сбросить. Корабль- Крушение обычно не представляет большой угрозы. Он ударит вдоль береговой линии или в многолюдные участки дорожек или линий электропередач в море. Обязательно отремонтируйте любой потерянные следы или линии электропередач. Иногда, если кораблекрушение близко к земле на берегу может начаться пожар, быстро справьтесь с ним. ~Атака монстров~ Это бедствие похоже на торнадо, но немного хуже и длится намного дольше. дольше. Боузер появится в вашем городе и начнет прокладывать путь разрушения, разжигание пожаров.До атаки еще далеко заканчивается, так бульдозер впереди него, как с торнадо. Еще раз, если что потеряны подарки или нанесен значительный ущерб, сбросьте до последнего сохранения. ~Ядерный кризис~ Эта катастрофа произойдет вокруг ваших атомных электростанций. Что просходит заключается в том, что вы увидите несколько значков радиации в зоне поражения. Эти значки полностью убивают стоимость земли и рост, что означает эту область карты нельзя использовать для восстановления до истечения 5 лет после катастрофы.А редкая, но серьезная катастрофа, восстановление зависит от того, какую часть карты вы уже пользовались. Если карта заполнена, необходимо дождаться, пока значки все пошли восстанавливать там. ~Землетрясение~ Это, безусловно, худшее бедствие, которое вы можете иметь. В зависимости от того, насколько тяжелым шкала Рихтера показывает землетрясение (см. меню истории) и определяет количество разрушений. Экран будет трястись, и вы услышите, что звук разрушаемых зон / начинают появляться случайные пожары по всему миру карта.Это единственная катастрофа, которая не ограничивается определенной территорией. Любая часть города уязвима для землетрясения. Восстановление от этого катастрофа очень сложна, так как вы должны сканировать карту, чтобы найти пострадавших районах, что требует времени, пока бушуют другие пожары. Каждый раз, когда меня бьют с этой катастрофой нанесенный ущерб практически невосполним, и я сброс к моему последнему сохранению. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (в).Уровень за уровнем Далее мы собираемся перейти к прохождению каждого уровня вашего города. я организовали их для решения наиболее распространенных проблем на каждом уровне город. ~Деревня~ Здесь не о чем беспокоиться. Построить 2 атомные электростанции в одном углов карты, постройте I зоны по краям карты. Ты не должно быть проблем с преодолением 2000 населения. Сохранение зон С и зоны I ограничены на данном этапе, вам нужны в основном зоны R.~Город~ Сохраните этот подарок Дома, пока у вас не будет Банка. Постройте несколько больше зон C и еще несколько зон R. Также постройте пожарную часть. Держите своих ограниченных граждан счастливыми, добавляйте парки. Построить еще несколько я зоны на данном этапе. Достичь 10 000 населения не должно быть проблемой для вы считаете, что у вас достаточно зон R. ~Город~ Постройте стадион и начните строить еще несколько I-зон. Начните размещать свои подарки и ищем топовый образец зонирования.Сохраняйте и экспериментируйте чаще! Убедитесь, что вы размещаете свои PD так, чтобы они уравновешивали общий радиус. Также внимательно следите за картами стоимости земли и уровня преступности. на ваших барах спроса. ~Столица~ Теперь становится интересно. Постройте свой аэропорт и морской порт в изолированном площадь. Подумайте о снижении налогов, если вы еще этого не сделали, и проверьте, что голосовое меню часто. К настоящему моменту у вас должен быть готовый шаблон блока пончиков. качайте, и, надеюсь, лучший метод зонирования тоже сработает для вас.Держать вы сосредоточены на создании большого количества PD, чтобы люди были счастливы и, в основном, создание большого количества R-зон. Используйте эти дары с умом, каждый из них жизненно важен. Постарайтесь также разложить их, не кладите рядом 2 одинаковых подарка. друг другу, если это не подарок PD или FDHQ. ~Мегаполис~ На этом этапе у вас должен быть город хорошего размера, несколько подарков и хорошее количество зон R. Настало время переключить свое внимание на массовое развитие зон I и C.Продолжайте строить свои R-зоны, но попробуйте строить в основном промышленные и в меньшей степени коммерческие. Получение большое количество зон I теперь имеет решающее значение для достижения высокой отметки в 500 000. Приблизительно к отметке в 450 000 становится трудно увеличить это население, из-за нехватки места и проблем большого города. Преступность будет несколько выше в областях просто не избежать этого. Будьте умнее, размещая свои PD в противостоять этому. Примерно в это же время ваши зоны R и C будут развиваться с одинаковой скоростью. намного медленнее, чем раньше, и вы начнете видеть некоторые зоны, которые вообще не развиваются.Эти области - те части, которые вы должны как-то попробовать построить больше зон I, удерживая при этом загрязнение и преступность под контролем. Самый большой ключ к 500 000 — это промышленность и заполнение всех зон до последней. можно на карту. Если вы получили лучший метод зонирования для работы в На этом этапе количество дополнительных зон I, необходимых для 500 000, должно быть намного меньше, чем было бы, если бы ваши дары не работали. ~Мегаполис~ Ты сделал это! На самом деле нет никакой причины, кроме ваших собственных целей, продолжать здание сейчас.К этому моменту карта должна быть почти заполнена, так что Подарок с фонтаном и статуей Марио должен быть размещен в блоках пончиков вокруг в центре карты или в областях, которые, как вы знаете, хорошо подойдут в зависимости от вашего шаблона блоков пончиков. Мой лучший результат — около 640 000 населения, потом я сдался. я еще не пробовал стек зон. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ VII.Читы и секреты В этом разделе будут рассмотрены различные методы читерства для получения большого количества деньги на ранней стадии, различные секреты, которые могут помочь вашему городу, и метод зонного стекирования. Также включен код Game Genie для более быстрой игры. играть. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (я). Обман с деньгами Это может сэкономить вам МНОГО времени при попытке построить мегаполис размером с город.Это довольно просто, но может запутать, если вы не будете внимательно читать. лли. Первое, что вы хотите сделать, учитывая, что вы только начинаете Новая игра состоит из 5 станций PD, нескольких железнодорожных путей и FD. Это значит, что вам придется заплатить за них финансирование в конце года. Затем просмотрите раздел 5, если вы действительно пытаетесь построить хороший город. Если вы просто хотите попробовать код или повозиться, установите налоги на 0. процентов и быстро потратить все свои деньги.Теперь подождите, пока вы бюджет меню появляется в конце декабря. ПЕРЕД тем, как вы покинете этот экран, выбрав- идя с цифрами, убедитесь, что вы держите кнопку L и установите все ваше финансирование до 0 процентов, а затем выйти. Все еще удерживая кнопку L, теперь вы должны быть на главном экране карты, подождите около 2 секунд и удерживая кнопку L, снова войдите в меню бюджета. Теперь установите все ваши средства вернутся к 100 процентам, все еще удерживая кнопку L, затем выйдите.Наконец, когда вы вернетесь на главный экран карты, отпустите Кнопка L, и тогда у вас должно быть максимальное количество наличных денег! Быть уверенным чтобы сохранить перед тем, как попробовать этот чит. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (ii). Бесплатное финансирование Прежде всего, отключите опцию автоматического бюджета, если она у вас включена. Когда в конце декабря появится экран бюджета, установите все финансирование на 0 процентов, затем выйдите и быстро сохраните игру.Когда перезагружаешь игру вы должны быть в январе, не заплатив ни цента за эти средства, которые теперь установлены на 100 процентов, как будто ничего не произошло. Остерегайтесь Ошибка запуска при выполнении этого чита. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (iii). Ошибка запуска Когда вы перезагружаете уже сохраненный город на консоли SNES, игра собирается начать с огромного уровня преступности и потери власти во всем город.Избежать этого невозможно, и это повредит вашему населению. отметка на целых 5000 и более. Хорошей новостью является то, что он восстанавливается в быстрый темп, но вы все равно потеряете потенциал, несмотря ни на что. Есть только один способ избежать ошибки, это построить весь город за один раз. сидите, или используйте эмулятор. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (4).999 альтернативных стартовых карт Выберите карту, чтобы начать, затем, когда вы будете готовы начать строительство, выберите перейти в меню и начать новый город. Когда карта загружается, все еще на том же номер, это будет совсем другая карта! Это работает только для единый номер карты, который вы выбираете перед входом в меню перехода. Ты сможешь ознакомьтесь с часто задаваемыми вопросами о лучших картах, размещенными здесь, на Gamefaqs, чтобы узнать, какие вообще лучший. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (в).Стекирование зон Это метод игры, который может удвоить население обычного, не сложенный город размером с мегаполис. Это очень долгий и утомительный процесс, если вы собираетесь попробовать, но результаты для вашей популяции и популярности плотность потрясающая. Вот как это сделать. Сначала постройте жилую зону, включите ее и дождитесь маленького значка. дома начинают формироваться вокруг R в центре зоны. Эти маленькие значки можно снести бульдозерами, но оставить зону R нетронутой.Таким образом, сдвинув каждую иконку вокруг буквы R, вы можете разместить еще одну. зона, которая перекрывает то, что было бы краем зоны R. С участием чрезмерное злоупотребление этим методом, вы можете втиснуть почти втрое больше зон, в отличие от кольцевого здания или других типов застройки. Любое здание можно сложить, сначала снеся бульдозерами маленькие значки. зоны R подальше, а затем построить зону такого типа непосредственно рядом с снесли бульдозером зону R и, наконец, всю зону R снесли бульдозером. нажав на Р.Получившийся взрыв вынесет кусок Зона/здание, которое вы разместили рядом с ним, освободив больше места. Ты сможешь также тройной стек зон. Вот ссылка на город, сделанный The Cynic доски сообщений gamefaqs SNES Simcity, которая использует стекирование зон для крайность. http://www.geocities.com/TimesSquare/Lair/3439/stuff/millioncity2.html Как видите, население ОГРОМНОЕ. Он также использовал хаки для этого хотя он использовал только бесконечный подарочный код и потратил большую часть своего время и усилия на этот город без сомнения._________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ (ви). Коды Game Genie В настоящее время у меня есть только код повышения скорости игры. Смотреть для получения дополнительных кодов в будущем обновлении. Увеличьте скорость игры: ДД67-ДФАА _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ VIII.Вопросы-Ответы В этом разделе будут рассмотрены наиболее часто задаваемые вопросы, которые я вижу об этой игре. ---- В: Как контролировать уровень преступности? A: Создайте больше PD с близкой частотой друг к другу. ---- В: Как восстановиться после аварий? О: См. раздел VI-iii, где приведены советы по их преодолению. ---- В: Загрязнение — моя самая большая проблема, как я могу уменьшить его и при этом сохранить мои рабочие места в промышленных зонах? A: Загрязнение будет там, независимо от того, что вы делаете.Просто попробуй сведите его к минимуму, если это ваша самая большая проблема. ---- В: Какой метод разработки лучше? О: На этот вопрос нет реального ответа. Однако объединение зон (раздел VII-v) было доказано, что он дает самое большое количество населения, большинство намного больше 1 млн. Это все дело вашего собственного вкуса, я люблю сам использую метод строительства пончика, так как он дает городу баланс и позволяет максимально использовать потенциал стоимости земли. ---- Еще больше часто задаваемых вопросов._________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ IX. Кредиты Я хотел бы, прежде всего, поблагодарить Gamefaqs за то, что сделали это руководство даже существует. Maxis и Nintendo также заслуживают благодарности за создание игры. А большое спасибо от меня завсегдатаям в городе-призраке доски, которую мы есть для игры SNES. WebGraphics, JJholt, Poolshark, The Cynic и кого-то еще я забыл упомянуть.Выражаем большую благодарность компании WebGraphics, которая обратил мое внимание, что вы можете получить в общей сложности 5 Развлечений Парк подарков, а не 3. _________________________________________________________________________ \______________________________________________________________________________/ Х. Юридический Скучный юридический раздел. Угадайте, что это руководство защищено авторскими правами, поэтому, если вы думаете, что хотите скопируйте его, я предлагаю вам сказать мне, и дать мне и другим, у кого есть помогли мне их должный кредит.Если вы этого не сделаете, то ваш квадрат, и, следовательно, может грозить тюремный срок. Не стесняйтесь копировать что хотите отсюда пока кредит дается.
Структурная основа для рекрутирования коактиваторов CBP/p300 трансактивационными доменами STAT1 и STAT2
Abstract
Коактиваторы транскрипции CBP/p300 опосредуют экспрессию генов путем интеграции клеточных сигналов посредством взаимодействия с несколькими факторами транскрипции. Чтобы выяснить молекулярную и структурную основу CBP-зависимой экспрессии генов, мы определили структуры доменов CBP TAZ1 и TAZ2 в комплексе с доменами трансактивации (TAD) преобразователя сигнала и активатора транскрипции 2 (STAT2) и STAT1 соответственно.Несмотря на топологическое сходство доменов TAZ1 и TAZ2, тонкие различия в упаковке спиралей и поверхностных канавках составляют основные детерминанты селективности по мишеням. Наши результаты предполагают, что TAZ1 преимущественно связывает длинные TAD, способные контактировать с несколькими поверхностными бороздками одновременно, тогда как меньшие TAD, которые ограничены одной непрерывной связывающей поверхностью, образуют комплексы с TAZ2. Комплексообразование для обоих STAT TAD включает сопряженное складывание и связывание, обусловленное межмолекулярными гидрофобными и электростатическими взаимодействиями.Фосфорилирование S727, необходимое для максимальной транскрипционной активности STAT1, не усиливает связывание ни с одним из доменов CBP. Поскольку разные STAT TAD распознают разные области CBP/p300, существует возможность поливалентного связывания гетеродимерами STAT, что может усиливать привлечение коактиваторов к промоторам.
Ключевые слова: CREB-связывающий белок, структура ЯМР, р300, STAT1, STAT2
Введение
Многие пути передачи сигналов сходятся в коактиваторных комплексах транскрипции, которые функционируют как узлы в сложных сетях белок-белковых взаимодействий, обрабатывающих клеточные сигналы и регулируют экспрессию генов (Naar et al. , 2001).Один из наиболее широко изученных коактиваторов транскрипции, CREB-связывающий белок (CBP) (Chrivia et al. , 1993) и его паралог p300 (Eckner et al. , 1994), стимулируют экспрессию генов посредством активности гистон-ацетилтрансферазы и интегрируют сигналы. которые способствуют росту, трансформации, развитию клеток и другим важным клеточным процессам (Goodman and Smolik, 2000). Более 300 белков были классифицированы как партнеры по связыванию CBP/p300 (Kasper et al. , 2006), и многие из взаимодействий картируются в областях CBP/p300 с удивительно высокой избыточностью.Эти области представляют собой «ворота», где сходятся клеточные сигналы, и экспрессия генов может подавляться конкурирующими ядерными факторами или усиливаться за счет совместного рекрутирования CBP/p300 и компонентов транскрипционного аппарата.
CBP и p300 являются модульными белками, которые содержат глобулярные домены, разделенные длинными внутренне неупорядоченными областями (Dyson and Wright, 2005). Домены TAZ1 и TAZ2 CBP (Ponting et al. , 1996) (иногда называемые Ch2 и Ch4 соответственно) опосредуют взаимодействия с доменами трансактивации (TAD) многочисленных факторов транскрипции.Идентичность последовательностей между CBP и p300 в этих модулях высокая (> 95%), что свидетельствует о сохранении функции, структуры и специфичности связывания. Несмотря на то, что домены TAZ1 и TAZ2 имеют одинаковую укладку, четыре α-спирали, стабилизированные тремя атомами цинка (De Guzman et al. , 2000, 2005), они высоко избирательны в своих взаимодействиях и связывают различные поднаборы мотивов трансактивации.
Чтобы исследовать детерминанты селективности связывания партнеров доменами TAZ1 и TAZ2 CBP, мы охарактеризовали их взаимодействия с выбранными TAD из семейства белков преобразователя сигнала и активатора транскрипции (STAT).Путь JAK-STAT играет центральную роль в передаче сигналов цитокинов от клеточной мембраны к ядру и последующей активации генов. Члены семейства STAT участвуют в разнообразных биологических процессах и конститутивно активируются при многих злокачественных новообразованиях и заболеваниях человека (O’Sullivan et al. , 2007). Белки STAT активируются фосфорилированием тирозина и гомо- или гетеродимеризацией через консервативный домен Sh3. Семь белков STAT человека содержат плохо консервативный С-концевой TAD, который проявляет переменную трансактивационную активность (Shen and Darnell, 2001) и напрямую взаимодействует с CBP/p300 (Brierley and Fish, 2005).
TAD STAT1 и STAT2 селективно связываются с доменами TAZ2 и TAZ1 CBP/p300, соответственно (Bhattacharya et al. , 1996; Zhang et al. , 1996). С-концевой TAD субъединицы p65 комплекса NF-κB также взаимодействует с доменом TAZ1 (Gerritsen et al. , 1997). Поскольку CBP/p300, по-видимому, экспрессируется в предельных концентрациях в большинстве клеток, эти факторы транскрипции могут либо конкурировать за связывание со специфическим доменом TAZ, либо совместно рекрутировать CBP/p300 за счет одновременного связывания TAZ1 и TAZ2.Сообщалось об обоих случаях: TADs STAT2 и p65 конкурируют за связывание с доменом Ch2 p300 in vitro и in vivo (Hottiger et al. , 1998), а N- и C-концевые области CBP сотрудничает, чтобы опосредовать синергетическую экспрессию STAT1/NF-κB определенных воспалительных генов (Hiroi and Ohmori, 2003). В дополнение к пути NF-κB, CBP/p300 представляет собой точку схождения между JAK/STAT и другими сигнальными путями, включая Ras/AP-1 (Horvai et al. , 1997), SMAD (Ghosh et al. , 2001) и пути Src/Hif-1α (Gray et al. , 2005).
Чтобы выяснить структурную основу для скоординированной экспрессии генов и рекрутирования CBP/p300 белками STAT, мы определили структуры домена TAZ1 в комплексе с TAD STAT2 и домена TAZ2 в комплексе с TAD STAT1. Оба TAD по своей природе неструктурированы и претерпевают переходы укладки при связывании с TAZ, что приводит к образованию межмолекулярного гидрофобного ядра. Интересно, что хотя механизмы связывания в этих двух комплексах сходны, а домены TAZ1 и TAZ2 сходны топологически, структуры связанных STAT1-TAD и STAT2-TAD сильно различаются.Незначительные различия в упаковке спиралей между TAZ1 и TAZ2 приводят к существенно различающимся бороздкам на поверхности для связывания мишеней и, по-видимому, являются первичными детерминантами селективности по мишеням.
Результаты
Аффинность и селективность связывания
Предыдущие исследования картировали взаимодействия между С-концевыми TADs STAT1 (Zhang et al. , 1996), STAT2 (Bhattacharya et al. , 80Schuringa 1996). al , 2001) и STAT4 (O’Sullivan et al , 2004) к областям CBP, охватывающим домены TAZ1 или TAZ2 ().Чтобы исследовать относительную аффинность связывания этих TAD для изолированных доменов TAZ1 или TAZ2, мы выполнили 90 508 in vitro 90 509 экспериментов по вытягиванию вниз. Аминокислотные последовательности белков STAT1 человека (остатки 710–750), STAT2 (остатки 769–851), STAT3 (остатки 719–764) и STAT4 (остатки 702–748) были слиты с С-концом белка B1. домен из белка G (GB1). Слияния GB1-STAT связывали со смолой IgG, инкубировали либо с изолированным доменом TAZ1 (остатки 340–439), либо с доменом TAZ2 (1764–1855) CBP.Все слитые конструкции GB1-STAT до некоторой степени взаимодействовали с TAZ2, но связывание с доменом TAZ1 было более селективным (2). Конструкции GB1-STAT1 и GB1-STAT2 показали более высокое сродство к TAZ2 по сравнению с TAD GB1-STAT3 и GB1-STAT4. Домен TAZ1 показал предпочтительное связывание с TAD GB1-STAT2. Более короткая конструкция STAT2 (остатки 786–838, C793H/C809S), использованная для структурных исследований, сохранила высокоаффинное связывание с TAZ1, но не с TAZ2, что позволяет предположить, что удаленная область содержит сайт связывания TAZ2 или усиливает неспецифическое связывание с TAZ2.
Характеристика доменов STAT-TAD и TAZ. ( A ) Структура домена CBP мыши, показывающая положения доменов TAZ1 и TAZ2 в последовательности мыши. ( B ) Выравнивание аминокислотных последовательностей STAT1, STAT3 и STAT4 TAD человека. Жирным шрифтом выделены аминокислоты, сходные между членами семейства. Звездочками указаны остатки в STAT1-TAD, которые непосредственно контактируют с TAZ2 в структуре комплекса. Серая полоса обозначает аминокислоты, которые образуют спираль в связанном STAT1-TAD.Обведенная буква «P» обозначает положение сайта фосфорилирования. Прочерк в последовательности указывает на пробел без соответствующего остатка. ( C ) Аминокислотные последовательности С-концевых последовательностей TAD (ctTAD) STAT2 человека и укороченная конструкция с двумя точечными мутациями (nmrTAD). Подчеркнутые остатки указывают на несовершенный повтор в последовательности STAT2-ctTAD. Прочерк в последовательности указывает на пробел без соответствующего остатка. Точка в последовательности STAT2-nmrTAD указывает положение, в котором аминокислота идентична STAT2-ctTAD.Звездочками отмечены остатки в STAT2-nmrTAD, которые контактируют с TAZ1 в структуре комплекса. Серые столбцы обозначают аминокислоты, которые составляют три спиральные структуры в связанном STAT2-nmrTAD.
Взаимодействие доменов TAZ и STAT. ( A ) SDS-PAGE анализ мышиных TAZ1 и TAZ2 на предмет взаимодействия с иммобилизованными последовательностями STAT человека, показанными на рис. GB1 (дорожки 3 и 10), GB1–STAT1-TAD (дорожки 4 и 11), GB1–STAT2-ctTAD (дорожки 5 и 12), GB1–STAT2-nmrTAD (дорожки 6 и 13), GB1–STAT3-TAD ( дорожки 7 и 14) и GB1-STAT4-TAD (дорожки 8 и 15), связанные с IgG-сефарозой, инкубировали с очищенным TAZ1 (дорожки 3–8) или TAZ2 (дорожки 10–15).Полосы при ∼25 и ∼50 кДа (дорожки 3–8 и 10–15) соответствуют легкой и тяжелой цепям IgG. Дорожки 2 и 9 содержат свободные TAZ1 и TAZ2 соответственно. ( B ) Результаты нисходящих анализов, показывающие, что фосфорилирование S727 не увеличивает сродство STAT1 TAD к CBP. TAD STAT1 и MLL (используемые в качестве контроля для связывания KIX) были связаны с IgG-сефарозой через N-концевую метку слияния GB1 и связывание доменов CBP TAZ1, KIX, TAZ2 и NCBD с STAT1 TAD (710–750), фосфоS727 и S727A STAT1 TAD измеряли с помощью анализов с понижением, контролируемых с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Для количественной оценки взаимодействий с высоким сродством, наблюдаемых в ниспадающем анализе, мы определили константы диссоциации ( K d ) с помощью изотермической титрационной калориметрии (ITC). Комплекс, образованный между GB1-STAT1(710-750) и TAZ2, имеет кажущуюся K d 52±31 нМ, тогда как комплекс между GB1-STAT2(786-838, C793H/C809S) и TAZ1 имеет K д 58±3 нМ. Связывание с незнакомыми доменами TAZ примерно в 100 раз слабее; Связывание STAT1 с TAZ1 имеет K d 4±1.4 мкМ, а связывание STAT2 с TAZ2 имеет K d 5 мкМ.
Фосфорилирование серина в STAT1, STAT3 и STAT4 TAD () повышает транскрипционную активность и рекрутирование CBP/p300 in vivo (Wen et al , 1995; Decker and Kovarik, 2000) Для определения влияния фосфорилирования на связывание CBP , мы экспрессировали TAD GB1-STAT1, фосфорилированный на S727, и измеряли аффинность связывания с TAZ1 и TAZ2 с помощью ITC. Никаких изменений в аффинности не наблюдалось по сравнению с нефосфорилированным TAD ( K d =87±20 нМ и 3.7±0,6 мкМ для доменов TAZ2 и TAZ1 соответственно). Эти результаты были подтверждены нисходящим анализом, который показал, что фосфорилирование не изменяет аффинность к домену KIX, сайт связывания фосфорилированного CREB TAD (Parker et al. , 1996) и ухудшает связывание с NCBD (4).
Картирование STAT TAD для определения структуры
Минимальный сайт высокоаффинного связывания TAZ1 на STAT2 TAD был идентифицирован путем скрининга взаимодействий набора укороченных конструкций TAD с 15 N-меченым TAZ1 с использованием 2D 1 H – 15 N Спектры HSQC.Область от G748 до С-конца (F851) картировали, и было обнаружено, что конструкция, охватывающая остатки V786-S838, оптимальна для ЯМР-анализа. Две мутации (C793H и C809S) были сделаны для повышения стабильности образца; эти цистеины плохо консервативны среди белков STAT2 млекопитающих, и мутации приводят к последовательности, идентичной последовательности свиньи. Поскольку полноразмерный TAD STAT1 относительно короткий, мы создали только две конструкции, одну, начинающуюся с остатка S710 и доходящую до остатка S745, а другую от S710 до С-конца, V750.Оба пептида связываются с TAZ2 с одинаковой аффинностью, что свидетельствует о том, что С-концевые пять аминокислот не являются существенными для образования комплекса. Тем не менее, для определения структуры использовали более длинную конструкцию (S710-V750).
Изолированные STAT1-TAD и STAT2-TAD по своей сути неструктурированы; амидные протонные резонансы занимают узкие области химических сдвигов в спектрах 1 H– 15 N HSQC (). После добавления родственного домена TAZ резонансы амидных протонов рассеиваются и демонстрируют химические сдвиги, указывающие на стабильную складчатую структуру.Оба комплекса находятся в состоянии медленного обмена по шкале времени ЯМР. Резонансы амидных протонов остатков 720–750 в STAT1-TAD и остатков L791-M816 в STAT2 TAD показывают самые большие отклонения от случайных химических сдвигов клубка. С-конец STAT2-TAD (P817-S838) претерпевает лишь небольшие возмущения химического сдвига, и 15 N гетероядерных NOE показывают, что он остается гибким в комплексе.
Спектры ЯМР свободного и связанного STAT-TAD. ( A ) 1 H– 15 N Спектр HSQC свободного STAT1-TAD (черный) и связанного с TAZ2 (красный).( B ) 1 H– 15 N Спектр HSQC STAT2-TAD без (черный) и связанный с TAZ1 (красный). Выбранные перекрестные пики связанного белка помечены.
Определение структуры
Структуры комплексов STAT1-TAD:TAZ2 и STAT2-TAD:TAZ1 определяли с помощью гетероядерного многомерного ЯМР. Чтобы свести к минимуму неоднозначность из-за спектрального перекрытия, было приготовлено несколько образцов, в которых один компонент был равномерно помечен 15 N- или 15 N/ 13 C, а другой компонент имел естественное содержание изотопов.Эта схема маркировки позволила назначить химический сдвиг для > 90% резонансов 1 H, 13 C и 15 N для обоих компонентов каждого комплекса. Экспериментально полученные ограничения на расстояние и двугранный угол были использованы для расчета и уточнения ансамбля из 20 структур для комплексов STAT2-TAD:TAZ1 () и STAT1-TAD:TAZ2 (). Каждый домен TAZ содержит четыре α-спирали, обозначенные h2-h5, и три атома цинка и представляет собой предварительно сформированный каркас для связывания лиганда (De Guzman et al , 2005).Структуры в комплексе со STAT2-TAD и STAT1-TAD могут быть наложены на структуры соответствующих свободных белков со среднеквадратичной величиной. отклонения 1,8 Å для TAZ1 и 1,5 Å для TAZ2 для тяжелых атомов основной цепи (N, Cα, C′).
Структура раствора ЯМРTAZ1:STAT2-TAD. ( A ) Ансамбль из 20 низкоэнергетических структур, наложенных на атомы основной цепи TAZ1: STAT2-TAD (TAZ1, остатки Pro347-Ala372 и Cys384-Asn434; STAT2-TAD, остатки Asp790-Met816). Остовы TAZ1 и STAT2-TAD показаны синим и зеленым цветом соответственно.Границы хорошо структурированной области STAT2-TAD и N- и C-концы TAZ1 помечены. Атомы скелета гибкого С-концевого участка STAT2-TAD (остатки Pro817-Ser835) показаны светло-зеленым, а гибкая петля TAZ1 (остатки 373–383) — светло-голубым. ( B ) Ленточная диаграмма, показывающая основу структуры с самой низкой энергией с помеченными атомами цинка и элементами вторичной структуры TAZ1. Лента прослеживается от остатков Thr344-Ser436 TAZ1 (синий) и Glu788-Met816 STAT2-TAD (зеленый), при этом С-концевой хвост показан светло-зеленым.( C – E ) Крупный план, показывающий TAZ1 (желтая поверхность) и STAT2-TAD (белая основа) с боковыми цепями остатков, которые образуют межмолекулярные контакты. Цветовая схема боковых цепей следующая: кислотные остатки (Asp и Glu) — красные; основные остатки (Arg, Lys и His), синий; нейтральные полярные остатки (Ser, Thr и Gln) и карбонильные атомы основной цепи — циан; гидрофобные остатки (Ala, Leu, Ile, Phe, Tyr, Val, Met и Pro), зеленые.
Структура раствора ЯМРTAZ2:STAT1-TAD.( A ) Ансамбль из 20 низкоэнергетических структур, наложенных на атомы основной цепи TAZ2: STAT1-TAD (TAZ2, остатки Gln1766-Arg1852; STAT1-TAD, остатки Asp721-Asn748). Скелеты TAZ2 и STAT1-TAD показаны фиолетовым и желтым цветом соответственно. N- и C-концы TAZ2 и STAT1-TAD помечены. ( B ) Ленточная диаграмма, показывающая основу структуры с самой низкой энергией с помеченными атомами цинка и элементами вторичной структуры TAZ2. ( C – E ) Крупный план, показывающий TAZ2 (желтая поверхность) и STAT1-TAD (белая основа) с боковыми цепями остатков, которые образуют межмолекулярные контакты.Цветовая схема для боковых цепей такая же, как и для . Положение боковой цепи S727, сайта фосфорилирования, охарактеризованного в , показано пурпурным цветом.
Структура связанного STAT2-TAD
В комплексе STAT2-TAD:TAZ1 STAT2-TAD полностью закручивается вокруг спирали h2 TAZ1 и контактирует с аминокислотами вдоль спиральной бороздки, образованной упаковкой спиралей h2/h4, h2/h3 и h2/h5 (). Структура STAT2-TAD преимущественно удлиненная, с короткой альфа-спиралью (H793-H796) и еще одной спиралью 3 10 (P802-F806).N-концевая область STAT2-TAD распознает поверхность TAZ1, образованную спиралью h2, и сайт связывания Zn 3 (), где боковые цепи E788, D790 и D794 образуют межмолекулярные электростатические взаимодействия с боковыми цепями Р350, Р423 и х517. Гидрофобная бороздка, содержащая боковые цепи I353, I414 и V428 в TAZ1, представляет собой благоприятную поверхность для взаимодействия с L791, L795 и L798 STAT2-TAD. Стенки этой канавки образованы h517 и P427, которые контактируют с P792 и P789.Боковая цепь M803 также вносит вклад в это межмолекулярное гидрофобное ядро. Остатки P802-F806 образуют короткую спиральную структуру с ароматическим кольцом F806, расположенным между двумя имидазольными кольцами (h507 и h483) и контактирующим с метильными группами L359 и M387 (). Боковая цепь R807 образует солевой мостик с карбоксилатом E348, тогда как основная цепь расположена водородной связью между карбонильным кислородом и Nɛ Q355. Остатки N808 и S809 подвергаются воздействию растворителя и образуют поворот, который позиционирует остатки V810-M816 для взаимодействия с канавкой, образованной спиралью h2, сайтом связывания Zn1 и N-концом спирали h5 в TAZ1 (10).Боковые цепи остатков V358, L359, L361, L381, W418, P431, V432 и A435 образуют большую гидрофобную поверхность, на которой размещаются боковые цепи V810, I812, I815 и M816 TAD STAT2. С-конец (P817-S838) связанного STAT2 является более гибким, однако остатки в этой области контактируют с доменом TAZ1. Боковые цепи V829 и Y833 упаковываются против открытого гидрофобного участка, образованного боковыми цепями L391, M394 и I415, а K419 образует электростатическое взаимодействие с D830 в большинстве структур ансамбля.Эти взаимодействия не являются существенными для связывания TAZ1, но, по-видимому, способствуют общей стабильности комплекса.
Структура связанного STAT1-TAD
Структура STAT1-TAD, связанного с TAZ2, резко отличается от структуры STAT2-TAD, связанного с TAZ1. В отличие от расширенной поверхности, на которой STAT2-TAD связывает TAZ1, STAT1-TAD локализован на одной поверхности TAZ2 и имеет единственную четко определенную спираль (остатки P728-V738), которая длиннее любой из спиралей STAT2. Эта спираль связывается с большой гидрофобной поверхностью, созданной упаковкой спиралей h2, h3 и h4 TAZ2 (10).Остатки D721-S740 STAT1-TAD образуют клин с вершиной в точке P725, который проникает в глубокую гидрофобную полость, образованную пересечением спиралей h2, h3 и h4, и упаковывается против боковых цепей M1799, V1802, L1826 и алифатическая часть Q1822 (). Боковая цепь Q1822 образует скрытую водородную связь с карбонильной группой основной цепи M726, а боковая цепь метионина уходит глубоко в домен TAZ2, контактируя с метильными группами A1825 и L1826. N-концевая область STAT1-TAD принимает конформацию удлиненной основной цепи, которая стабилизируется гидрофобными контактами от L724 до P1818 и V1819 и межмолекулярным солевым мостиком между боковыми цепями D721 и R1811.Внутри амфипатической α-спирали между остатками P728-V738 боковые цепи F731, V734, I737 и V738 образуют гидрофобную поверхность, которая контактирует с боковыми цепями I1773, A1825, L1826 и Y1829, расположенными в спиралях h2 и h4 (). Противоположная сторона спирали заряжена отрицательно и состоит из Е729, Е730, D732 и Е733, которые образуют электростатические взаимодействия с гуанидиновыми группами R1769, R1770 и R1775 из спирали h2 TAZ2. Спираль заканчивается на G739, который образует виток и размещает С-концевую часть STAT1-TAD в щели между сайтом связывания Zn 2 , спиралью h4 и спиралью h5 (10).Гидрофобный участок, образованный боковыми цепями T1813, L1824, I1847, L1851 и F1843, и алифатическими частями K1821 и K1850 контактируют с боковыми цепями V741, F743, M746 и M747. Остатки на N-конце STAT1 (S710-D721) неупорядочены и не контактируют с TAZ2 в структурах.
Обе ТАД при комплексообразовании покрывают значительную площадь поверхности, ∼2300 Å 2 для TAZ1:STAT2-TAD и ∼1600 Å 2 для TAZ2:STAT1-TAD. Эти обширные интерфейсы охватывают множество высокоспецифичных межмолекулярных взаимодействий, которые составляют молекулярную основу для высокоаффинного связывания и селективного рекрутирования доменов CBP TAZ2 и TAZ1, соответственно, STAT1 и STAT2 TAD.
Комплементарная электростатика опосредует распознавание кислых TAD
Поверхности обоих доменов TAZ высоко электроположительны (), что способствует связыванию кислых TAD. Электростатические взаимодействия между доменом TAZ2 и STAT1-TAD локализованы на одной стороне каркаса TAZ2 () и возникают исключительно за счет кислотных остатков в STAT1-TAD, контактирующих с основными остатками в TAZ2. Противоположная поверхность TAZ2 состоит в основном из незаряженных аминокислот и, по-видимому, менее компетентна для связывания отрицательно заряженных TAD.Напротив, поверхность домена TAZ1 имеет более равномерное распределение положительных зарядов (1). STAT2-TAD оборачивается вокруг домена TAZ1, образуя множественные электростатические взаимодействия с поверхностными положительными зарядами. Кроме того, положительно заряженная боковая цепь R807 в STAT2-TAD образует электростатическое взаимодействие с отрицательно заряженной боковой цепью E348 TAZ1. Преимущественное связывание кислых доменов активации с доменами TAZ и доказательства комплементарности зарядов связанных STAT1-TAD и STAT2-TAD позволяют предположить, что электростатические взаимодействия играют ключевую роль в определении специфичности распознавания TAD и межмолекулярного гидрофобного ядра, которое формируется при Складывание TAD обеспечивает устойчивость комплекса.
Электростатические потенциалы на поверхности доменов ТАЗ. Положительно заряженные поверхности показаны синим цветом, а отрицательно заряженные — красным. ( A ) TAZ2 в комплексе с STAT1-TAD (желтая основа). ( B ) TAZ1 в комплексе с STAT2-TAD (зеленая основа). Левое и правое изображения представляют собой поворот на 180° вокруг вертикальной оси в плоскости страницы. ( C ) Наложение структуры STAT2-TAD (зеленый) на комплекс TAZ2:STAT1-TAD (прозрачная поверхность плюс желтый остов).( D ) Наложение структуры STAT1-TAD (желтый) на комплекс TAZ1:STAT2-TAD (прозрачная поверхность плюс зеленый остов).
Структурная основа для распознавания TAD
Помимо специфических межмолекулярных взаимодействий боковых цепей, которые определяют точность специфичности последовательности, структурные различия между TAZ1 и TAZ2 обеспечивают дополнительную основу для распознавания и различения партнеров по связыванию. Сравнение свободных структур TAZ1 и TAZ2 показывает, что, хотя общие топологии очень похожи, существуют значительные различия в ориентации спирали h5 (De Guzman et al. , 2000, 2005).Спираль h5 TAZ1 образует часть поверхности связывания для С-концевых доменов активации HIF-1α и CITED2 (De Guzman et al. , 2005) и, по-видимому, также является основной детерминантой распознавания STAT2-TAD. С-конец спирали h5 упаковывается против спирали h2 в TAZ1, образуя гидрофобный карман, который связывает остатки I812-M816 STAT2-TAD. Обе поверхности резко различаются, когда спираль h5 расположена, как в структуре TAZ2 ().
Помимо различий в ориентации спирали h5, различия в упаковке спирали h4, по-видимому, также играют роль в различении партнеров по связыванию доменами TAZ.Угол упаковки спирали h3–h4 различается примерно на 35° в структурах TAZ1 и TAZ2 (De Guzman et al , 2000, 2005). Положение h4 в TAZ2 создает открытый гидрофобный карман, контактирующий с мотивом LPMSP в STAT1-TAD (10). В TAZ1 изменение угла упаковки спиралей h4 и h2 перекрывает этот связывающий карман (). Это согласуется с анализами связывания, которые показывают только очень слабое взаимодействие между TAZ1 и TAD STAT1, STAT3 и STAT4, содержащими мотив LPMSP (10). Модель STAT2-TAD, наложенная на структуру TAZ2 (), предсказывает более благоприятное взаимодействие, лишенное таких стерических столкновений, и это также согласуется со способностью GB1-STAT2 тянуть вниз TAZ2 in vitro .
Спиралевидная упаковка в TAZ2 создает непрерывный U-образный интерфейс для связывания белка. Центр этого интерфейса содержит гидрофобную бороздку, которая контактирует со спиралью (остатки P728-V738) в связанной структуре STAT1-TAD (10). Канавка образована боковыми цепями R1775 и K1832, отстоящими друг от друга в структуре на ∼20 Å, и боковыми цепями R1769 и K1821, отстоящими друг от друга на ∼18 Å. Структура и распределение заряда этой канавки представляют собой благоприятную поверхность для связывания отрицательно заряженной амфипатической спирали.Канавка широкая, что позволяет предположить, что она может вместить спираль с объемными боковыми цепями (такими как F743 в STAT1-TAD) или немного другой ориентацией, не вызывая стерических столкновений. Рядом с канавкой, связывающей спираль, находится глубокая и узкая гидрофобная щель, которая контактирует с мотивом LPMSP в комплексе STAT1-TAD:TAZ2 и способствует связыванию расширенной структуры, а не спирали. Комбинация этих признаков представляет собой непрерывную поверхность, которая связывает и стабилизирует компактную структуру связанного STAT1-TAD.
Спирали в пакете TAZ1 образуют спиральную канавку на поверхности, поддерживающую сопряженное складывание и связывание STAT2-TAD. Хотя размеры этой канавки различаются, в целом она уже, чем бороздка, связывающая спираль, и мельче, чем щель, связывающая LPMSP TAZ2. В отличие от относительно плоской поверхности связывания белка на TAZ2, бороздка в TAZ1 оборачивается вокруг структуры, представляя обширную вогнутую поверхность для связывания белка. Эта особенность заставляет STAT2-TAD принимать расширенную структуру с тремя короткими спиральными витками, которые контактируют с изолированными областями вдоль спиральной канавки.
Обсуждение
Описанные здесь структуры комплексов STAT1 и STAT2 показывают различные способы связывания доменов активации транскрипции доменами TAZ1 и TAZ2 CBP/p300. Различная топология доменов TAZ1 и TAZ2, по-видимому, формирует основу для избирательности партнеров по связыванию (De Guzman et al. , 2005). Поверхность домена TAZ1 содержит взаимосвязанные гидрофобные бороздки, которые благоприятствуют взаимодействию с длинными областями внутренне неупорядоченных TAD, которые могут образовывать один или несколько локальных спиральных сегментов при связывании, а также взаимодействуют с более узкими бороздками TAZ1 в относительно протяженных конформациях.Многие из этих борозд отсутствуют на поверхности домена TAZ2. Относительное сродство, с которым внутренне неупорядоченный TAD связывается с TAZ1 или TAZ2, зависит от его способности складываться и образовывать соответствующие стабилизирующие взаимодействия, как подробно обсуждается ниже.
Распознавание TAZ другими партнерами по связыванию
Структуры домена TAZ1 были решены в комплексе с рядом различных партнеров, что позволило нам сравнить различные способы связывания TAD с небольшой гомологией последовательностей (Dames et al , 2002 ; Freedman и др. , 2002, 2003; De Guzman и др. , 2004).Структуры связанных С-концевых TAD HIF-1α, CITED2 и STAT2 занимают одну и ту же спиральную бороздку на TAZ1 (). Наиболее разительным отличием этих TAD является их ориентация на TAZ1; если смотреть вниз по длинной оси спирали h2 от конца N к C, TAD HIF-1α и CITED2 обвиваются вокруг TAZ1 по часовой стрелке (конец N к C), где STAT2-TAD связан в противоположной (против часовой стрелки) ориентации. . Область TAZ1, связанная с STAT2-TAD, больше похожа на область, связанную с CITED2-TAD, чем с HIF-1α-TAD, которая образует стабильную спираль на С-конце, которая контактирует с дополнительной поверхностью на TAZ1 (10).Остатки V227, L228 и L231 в N-концевой спирали CITED2 образуют контакты, сходные (но в противоположном направлении) с таковыми остатков M816, I815 и I812 в STAT2-TAD (10). Эта канавка на TAZ1, по-видимому, хорошо подходит для поддержки складывания и связывания амфипатической спирали различной длины и направления. TAD HIF-1α и CITED2 содержат консервативный мотив LPXL, который образует вытянутую структуру и контактирует с гидрофобными боковыми цепями внутри спиральной канавки h2–h4 TAZ1. Напротив, остатки P802-F806, которые контактируют с этой областью TAZ1, образуют спиральную структуру в комплексе STAT2-TAD:TAZ1 (10).Отсутствие направленности среди связанных партнеров, наряду с присутствием разных вторичных структур, контактирующих с одними и теми же областями TAZ1, демонстрирует неразборчивую природу распознавания TAZ1 и согласуется с очевидным отсутствием полной консенсусной связывающей последовательности.
Сравнение структур лиганда TAZ1. ( A ) Поверхностное представление структуры TAZ1 в комплексе со STAT2-TAD (зеленый), HIF-1α-CTAD (красный) и CITED2-TAD (синий). Левое и правое изображения представляют собой поворот на 180° вокруг вертикальной оси в плоскости страницы.N- и C-концы каждого лиганда помечены. ( B ) Наложение комплексов TAZ1 со STAT2-TAD (зеленый) и CITED2-TAD (синий), показывающее область схожей структуры в двух комплексах, хотя последовательности идут в противоположных направлениях. ( C ) Наложение комплексов STAT2-TAD (зеленый) и CITED2-TAD (синий), демонстрирующее различные вторичные структуры, связанные с одной и той же областью TAZ1. ( D ) Выравнивание последовательностей, показывающее белки, гомологичные спиральной области STAT1-TAD.Аминокислоты окрашены в красный цвет (кислые), в синий (основные), в желтый (незаряженные полярные), в зеленый (гидрофобные) и в фиолетовый (Pro и Gly).
Структура STAT1-TAD:TAZ2 является первой описанной структурой домена TAZ2 в комплексе с партнером по связыванию. Исследования возмущения химического сдвига показали, что область TAD опухолевого супрессора p53 связывается с той же поверхностью TAZ2, что и STAT1-TAD (De Guzman et al. , 2000). Таким образом, способ связывания STAT1-TAD в структуре TAZ2 может представлять собой общий способ связывания, который может позволить идентифицировать другие последовательности, которые, вероятно, являются партнерами по связыванию TAZ2.
Остатки P728-V738 в STAT1-TAD образуют обширные межмолекулярные электростатические и гидрофобные контакты и претерпевают наибольшую степень структурного упорядочения при связывании TAZ2. Поэтому мы использовали эту последовательность STAT1-TAD в качестве основы для поиска последовательностей белков по распознаванию образов в базе данных Swiss-Prot. Несколько известных TAZ2-связывающих белков (большой Т-антиген SV40, p53 и члены семейства активаторов транскрипции GATA) содержат мотивы последовательности, которые сходны с STAT1-TAD (), в частности, обладая последовательностью PD/ED/E. -Φ-(D/E или Φ)-(D/E или Φ), где D/E относится к Asp или Glu, а Φ представляет собой гидрофобную аминокислоту.Остатки L43-F54 в TAD p53 проявляют сильную гомологию с мотивом LPMSP и остатками в спирали STAT1-TAD, а остатки в этой области TAD p53 являются критическими для связывания TAZ2 (Teufel et al. , 2007). Члены семейства активаторов транскрипции MAF также имеют области с высокой степенью гомологии с STAT1-TAD. Наш поиск выявил несколько мотивов в вирусных белках с высоким сходством последовательностей с STAT1-TAD; наводит на мысль, что инактивация CBP путем прямой конкуренции за домен TAZ2 может быть обычным механизмом вирусного захвата транскрипционного аппарата хозяина.Наиболее похожая последовательность, полученная в результате этого поиска, принадлежит белку NEF из изолята MAL ВИЧ-1. Интересно, что область в NEF (остатки 147–159), которая в высокой степени гомологична STAT1-TAD, расположена в начале большой внутренней гибкой петли (Grzesiek et al. , 1996; Lee et al. , 1996). ), повышая вероятность того, что эта область может быть способна к сопряженной укладке и связыванию с клеточными белками, такими как домен TAZ2 CBP/p300. Хотя NEF участвует в регуляции экспрессии клеточных генов (Pessler and Cron, 2004), насколько нам известно, о прямом взаимодействии с CBP/p300 не сообщалось.
Рекрутирование CBP/p300 семейством белков STAT
Сообщалось, что все семь членов семейства STAT человека взаимодействуют с CBP/p300 через свои С-концевые TAD (Bhattacharya et al. , 1996; Zhang et al. , 1996; Pfitzner и др. , 1998; Schuringa и др. , 2001; O’Sullivan и др. , 2004, 2007). Мотив LPMSP, который сохраняется в пределах TADs STAT1, STAT3 и STAT4, опосредует рекрутирование CBP/p300 с помощью STAT1 (Sun et al. , 2005) и STAT3 (Sun et al. , 2006).В комплексе STAT1-TAD:TAZ2 остатки L724, P725 и M726 этого мотива образуют тесные контакты с TAZ2 за счет гидрофобных взаимодействий боковых цепей и водородных связей с участием карбонильных атомов кислорода основной цепи (). Хотя мотив LPMSP образует несколько важных контактов с TAZ2, этого недостаточно для высокоаффинного связывания. Остатки, следующие за мотивом LPMSP, которые не являются консервативными между STAT1, STAT3 и STAT4, по-видимому, являются основной детерминантой высокоаффинного связывания TAZ2.В комплексе STAT1-TAD:TAZ2 боковые цепи E729, E730, D732 и E733 взаимодействуют с боковыми цепями аргинина на поверхности TAZ2. В STAT3-TAD и STAT4-TAD многие остатки в этих положениях не заряжены отрицательно и не способны к таким межмолекулярным взаимодействиям. Это может объяснить более сильное связывание TAZ2, наблюдаемое in vitro с для STAT1-TAD по сравнению со STAT3-TAD и STAT4-TAD (10).
Предыдущие исследования показали, что фосфорилирование S727 в мотиве LPMSP необходимо для максимальной транскрипционной активности STAT1 и STAT3 (Wen et al , 1995; Decker and Kovarik, 2000), и было высказано предположение, что это может отражать усиленное связывание фосфорилированного TAD до CBP/p300 (Захарова и др. , 2003).Мутация S727A сохраняет ДНК-связывающую активность, но ацетилирование гистонов и рекрутирование CBP нарушаются in vivo (Varinou et al , 2003). В этом исследовании мы показываем, что фосфорилирование S727 в STAT1 TAD не вызывает изменения аффинности связывания с доменами TAZ2, TAZ1 или KIX CBP, тогда как как фосфорилирование, так и мутация S727A, по-видимому, ухудшают связывание с доменом, связывающим ядерный коактиватор. остатки 2059–2117) СВР. Боковая цепь S727, закрывающая N-конец спирали STAT1, направлена к растворителю () и может легко вместить фосфатную группу, не нарушая межмолекулярных взаимодействий.Таким образом, наши результаты предполагают, что фосфорилирование S727 не усиливает связывание с CBP/p300, но стимулирует активность STAT1 и STAT3 путем изменения взаимодействия с другими компонентами транскрипционного аппарата. Действительно, недавно было показано, что фосфорилирование S727 происходит только после того, как STAT1 был собран в транскрипционный комплекс, ассоциированный с хроматином (Sadzak et al , 2008), и что он функционирует, регулируя SUMOилирование STAT1 (Vanhatupa et al , 2008). ). Также было показано, что фосфорилирование STAT1 TAD усиливает транскрипционную активность за счет ускорения ядерно-цитоплазматического челнока (Lodige et al. , 2005).По-видимому, фосфорилирование остатков серина в С-концевом TAD не является необходимым условием для рекрутирования коактиваторов CBP/p300 с помощью STAT1 (и, предположительно, также STAT3 и STAT4).
Семейство белков STAT развилось для нацеливания на различные домены в CBP/p300; различия в последовательностях С-концевых TAD позволяют белкам STAT рекрутировать CBP/p300 путем нацеливания на разные домены коактиваторов транскрипции. Так, TAD STAT1 связывает домены TAZ2 и NCBD (), TAD STAT2 связывает TAZ1 (и в меньшей степени TAZ2-), TAD STAT3 и STAT4 связывают TAZ2, тогда как TAD STAT5 и STAT6 распознают домены KIX и NCBD, соответственно (Pfitzner и др. , 1998; Gingras и др. , 1999).Таким образом, гетеродимеры STAT потенциально могут рекрутировать коактиваторы транскрипции с повышенной эффективностью путем одновременного нацеливания на два домена CBP/p300; например, гетеродимеры STAT2:STAT1 и STAT2:STAT3 могут связывать CBP/p300 через домены TAZ1 и TAZ2. Гомодимер STAT1 также может поливалентно взаимодействовать с областями TAZ2 и NCBD CBP/p300. Кроме того, было показано, что активированные димеры STAT образуют комплексы более высокого порядка на промоторах, содержащих несколько сайтов узнавания (Vinkemeier et al. , 1996; Xu et al. , 1996; John et al. , 1999), тем самым еще больше повышая количество и сложность STAT TAD, доступных для взаимодействия с коактиваторами и общим механизмом транскрипции.
Материалы и методы
Экспрессия и очистка белков
Белки экспрессировали из коэкспрессионной плазмиды (Sugase et al , 2008), трансформированной в клетки Escherichia coli BL21 (DE3) (+DNAY). Человеческий STAT1 (остатки 710–750) или STAT2 (остатки 786–838, C793H/C809S) клонировали сразу после метки His 6 –GB1 для создания слитой конструкции с тромбиновым участком между GB1 и STAT-TAD. Гены TAZ1 (остатки CBP мыши 340–439) или TAZ2 (остатки CBP мыши 1764–1855) были вставлены во вторую кодирующую область.Клетки выросли при 37 ° C в M9 носитель, дополненные 15 NH 4 CL или ( 15 NH 4 ) 2 SO 4 и 13 C 6 -ГГЛУКОЗа OD 600 0,6–0,8. После индукции 1 мМ ИПТГ в среду добавляли 150 мкМ ZnSO 4 и продолжали рост при 15°С в течение 12–16 ч.
Клетки обрабатывали ультразвуком в лизирующем буфере (25 мМ Трис (рН 8), 250 мМ NaCl, 25 мМ имидазол и 6 М мочевина). К растворимой фракции добавляли смолу Ni-NTA superflow (Qiagen), инкубировали в течение 30 минут, а затем выливали в гравитационную колонку.Проточный раствор, содержащий TAZ1, загружали на SP-Sepharose, уравновешенную 25 мМ Tris (pH 8) и 6M мочевиной, и TAZ1 элюировали линейным градиентом до 1M NaCl. Смолу Ni-NTA, содержащую связанный His 6 –GB1–STAT-TAD, промывали лизирующим буфером (без мочевины), инкубировали с тромбином в течение ~4 ч и из супернатанта собирали расщепленный STAT-TAD. Продукты расщепления STAT-TAD содержат четыре дополнительных N-концевых остатка (GSHM) из вектора. Фракции STAT-TAD и TAZ1 дополнительно очищали ВЭЖХ с обращенной фазой в буфере ацетонитрил/ТФУ.Клетки, содержащие плазмиду коэкспрессии His 6 –GB1–STAT1-TAD/TAZ2, лизировали ультразвуком в буфере, содержащем 20 мМ Трис, 8 М мочевины, 200 мМ гидрохлорида аргинина, 40 мМ NaCl, 10 мМ ДТТ, рН 8. растворимый белок наносили на SP-Sepharose, уравновешенную в лизирующем буфере, и TAZ2 элюировали линейным градиентом до 500 мМ NaCl. Белок дополнительно очищали ВЭЖХ с обращенной фазой.
STAT1-TAD фосфорилировали по S727 с использованием активированной киназы p38α. GST-MKK6 экспрессировали в клетках Rosetta DE3 pLysS с индукцией в течение ночи при 20°C.Клетки лизировали в 20 мМ Трис, рН 8, 100 мМ NaCl, 5 мМ ДТТ, 1 мМ ЭДТА, 10% глицерин и 0,1% Тритон Х-100, а растворимый белок подвергали аффинной очистке на GST Sepharose 4B. Его 6 –p38α экспрессировали в Rosetta DE3 pLysS с индукцией в течение ночи при 15°C. Клетки лизировали в 20 мМ Трис, рН 8, 250 мМ NaCl, 10 мМ имидазола, 5 мМ β-меркаптоэтанола и 0,2% Тритона Х-100, и растворимый белок очищали металл-аффинной хроматографией на смоле NiNTA. Очищенный GST-MKK6, His 6 -p38α и His 6 GB1-STAT1 TAD заменяли на 20 мМ HEPES pH 7.5, 50 мМ NaCl. В киназных реакциях использовали 140 мкМ His 6 GB1–STAT1 TAD, 15 мкМ His 6 –p38α, 2 мкМ GST–MKK6 в 50 мМ HEPES, pH 7,5, 0,1 мМ PMSF, 1 мМ NaF, 0,1 мМ ортованадата натрия, 0,1 мМ. β-глицеринфосфата, 10 мМ MgCl 2 , 5 мМ DTT и 10 мМ динатрия АТФ и проводили при комнатной температуре в течение 24 часов. Фосфорилированный His 6 GB1–STAT1 TAD очищали ВЭЖХ с обращенной фазой, как описано выше. MALDI-анализ триптического перевара показал увеличение массы, соответствующее одному фосфату.В контрольных реакциях мутант S727D STAT1 оставался нефосфорилированным, подтверждая, что фосфорилирование p38α специфично для S727.
Анализ GB1 pull-down
Очищенный слитый белок GB1 или GB1–STAT добавляли к 8% (масс./об.) взвеси IgG-Sepharose 6 Fast Flow (GE Healthcare Biosciences) в буфере для анализа (20 мМ Tris–HCl). (pH 8), 150 мМ NaCl, 0,1% (об./об.) NP-40) и трижды промывали буфером для анализа. Эквимолярный TAZ1 или TAZ2 добавляли к связанному смолой GB1 или GB1-STAT и инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре.Несвязавшиеся белки удаляли двукратной промывкой буфером для анализа, а связанные белки анализировали с помощью SDS-PAGE и окрашивали Кумасси бриллиантовым синим.
Связывание TAD STAT1, мутанта S727A и TAD фосфоS727 с доменами TAZ1, TAZ2, NCBD и KIX CBP анализировали с помощью экспериментов по вытягиванию GB1, контролируемых ВЭЖХ с обращенной фазой. GB1–MLL (2842–2869), GB1–p53 (1–94), CBP KIX (586–672) и NCBD (2059–2117) очищали, как описано ранее (Demarest et al. , 2002; Goto et al. ). , 2002; Legge и др. , 2004).Его 6 GB1, полученный расщеплением тромбином His 6 GB1-p53, использовали в качестве контроля неспецифического связывания. Все белки для экспериментов по вытягиванию были заменены на 20 мМ Tris pH 8, 50 мМ NaCl и 1 мМ DTT. Для каждого нисходящего анализа 30 мл IgG-Sepharose 6 Fast Flow (GE Healthcare Biosciences) уравновешивали в буфере для анализа (20 мМ Трис, pH 8, 50 мМ NaCl и 0,1% IGEPAL CA-630) и загружали 6 нмоль GB1. –ТАД. Связанные смолой GB1-TAD инкубировали с доменами CBP размером 6 нмоль (TAZ1, TAZ2, KIX или NCBD) в течение 15 минут при комнатной температуре.Несвязавшиеся белки удаляли промыванием буфером для анализа. Связанные белки элюировали со смолы добавлением 0,1% трифторуксусной кислоты и контролировали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на аналитической колонке Jupiter 5 мм C4 (Phenomenex). Результаты были скорректированы на неспецифическое связывание доменов CBP путем вычитания площадей пиков ВЭЖХ, полученных из второй серии контрольных экспериментов с His 6 GB1 вместо His 6 GB1-TAD. Репрезентативные хроматограммы показаны в дополнительных данных.
ITC
TAZ1 или TAZ2 титровали 10-кратным избытком GB1-STAT2 и GB1-STAT1 в ITC-буфере (20 мМ Tris-HCl (pH 8), 50 мМ NaCl и 1 мМ DTT) при 35°C с использованием микрокалориметр VP-ITC (MicroCal). За одной инъекцией 5 мкл последовали 29 инъекций по 10 мкл до тех пор, пока не было достигнуто молярное соотношение ∼3,0 GB1–STAT/TAZ. Изотерма связывания была приспособлена к модели связывания с одним сайтом с использованием программного обеспечения Origin 7.0 (MicroCal). Стехиометрическое соотношение, константу диссоциации ( K d ) и изменение энтальпии определяли с использованием нелинейного алгоритма подбора методом наименьших квадратов.Не было обнаружено связывания между изолированным GB1 и TAZ1 или TAZ2. Репрезентативные изотермы связывания для всех комплексов показаны в дополнительных данных.
Подготовка образца ЯМР
TAZ1 и TAZ2 подвергали рефолдингу в присутствии Zn 2+ , как описано ранее (De Guzman et al. , 2000, 2005). Лиофилизированные STAT TAD растворяли в 10 мМ Трис, 50 мМ NaCl, 5 мМ ДТТ, рН 7 и добавляли к повторно уложенным растворам TAZ, которые концентрировали и подвергали диализу против ЯМР-буфера (10 мМ d 11 Трис, 50 мМ NaCl и 7 мМ d 10 ДТТ, рН 6.8). Образцы ЯМР содержали ∼0,8–1,1 мМ меченого белка и 20% избыток немеченого компонента. Для каждого комплекса готовили шесть образцов ЯМР: 15 N TAZ: немеченый TAZ в H 2 O, 15 N STAT-TAD: немеченый TAZ в H 2 O, 13 C, 1 N TAZ: без маркировки STAT-TAD в H 2 O, 13 C, 15 N STAT-TAD: без маркировки TAZ в H 2 O, 13 C, 15 TAZ без раструба -TAD в D 2 O и 13 C, 15 N STAT-TAD: TAZ без маркировки в D 2 O.
ЯМР-спектроскопия и структурные расчеты
Спектры ЯМР получены при 290 K (комплекс TAZ2:STAT1-TAD) или 305 K (комплекс TAZ1:STAT2-TAD) на спектрометрах Bruker DRX600 MHz и AVANCE 900 MHz, обработаны с помощью NMRPipe (Delaglio и др. , 1995) и проанализированы с использованием NMRView (Johnson and Blevins, 1994). Резонансы основной цепи определялись с помощью экспериментов HNCACB (Wittekind and Mueller, 1993), CBCA(CO)NH (Grzesiek and Bax, 1992a), HNCA, HN(CO)CA и HNCO (Grzesiek and Bax, 1992b).Отнесение резонансов боковых цепей проводили с использованием экспериментов 3D HCCH-COSY и HCCH-TOCSY (Bax et al. , 1990). Стереоспецифические отнесения и константы связывания были получены из спектров 3D HACAHB-COSY (Grzesiek et al. , 1995), HNHB (Archer et al. , 1991) и HNHA (Vuister and Bax, 1993). Ограничения по расстоянию были получены из 3D 15 N-отредактированного NOESY-HSQC (τ m = 120 мс), 13 C-отредактированного NOESY-HSQC (τ m = 100 мс) и 13 C-отредактированного , 12 C-фильтрованные спектры NOESY-HSQC (τ m = 200 мс).
Дистанционные ограничения и исходные структуры были созданы с помощью программ CANDID (Herrmann et al , 2002) и CYANA (Güntert, 2004). Как показывают константы связи, паттерны NOE и программа TALOS (Cornilescu et al , 1999), двугранные углы основной цепи для остатков в спиральных областях были ограничены до -60°±30° (φ) и -40°±30° ( ψ), а несколько боковых цепей χ 1 углов были ограничены до (-60°, 60°, 180°)±30°. Ограничения по расстоянию для определения центров цинка и спиральных водородных связей были наложены для облегчения автоматического присвоения NOE, но были опущены во время уточнения.Экспериментальные ограничения суммированы в .
Таблица 1
ЯМР и утончатая статистика для белковых структур
| | TAZ1: Stat2-Tad | TAZ2: Stat1-Tad | |||
|---|---|---|---|---|---|
| НМР Дистанция и диедральные ограничения 9 | |||||
| ограничения | |||||
| Всего NOE | 1711 | 1507 | |||
| Intra-остаток | 168 | 200 | |||
| Inter-остаток | |||||
| Sequential (| я — J | = 1) | 417 | 417 | 431 | 431 | 431 |
| Средний диапазон (| I — J | <4) | 365 | 396 | |||
| Длинный ассортимент (| I – j ∣>5) | 202 | 193 | |||
| Межмолекулярный | 559 | 2439 900 0091 | |||
| водородных связей | 0 | 0 | |||
| Всего двугранного угла удерживающие | |||||
| φ | 78 | 72 | |||
| ψ | 76 | 72 | |||
| χ 1 | 51 | 51 | 48 | 48 | |
| Нарушения (среднее и с)д.) | |||||
| Дистанционные ограничения (Å) | 0,084 ± 0,084 | 0,087 ± 0,004 | 0,087 ± 0,004 | ||
| Dihradral угловые ограничения (DEG) | 0 | 0 | |||
| Максимальное нарушение дигидрального угла (deg) | 0 | 0 | |||
| Нарушение ограничения расстояния (Å) | 0.27 | 0,27 | |||
| Отклонения от идеализированной геометрии | |||||
| Длина облигаций (Å) | 0 .01094 ± 0,00009 | 0,01069 ± 0,00006 | |||
| Углы связи (DEG) | 2,79 ± 0,03 | 2,63 ± 0,03 | |||
| Среднее попадание Отклонение (Å) | |||||
| Тяжелый | 1,30 ± 0,14 | 1,10 ± 0,12 | |||
| Магистральные | 0,61 ± 0,16 | 0,46 ± 0,10 | |||
| Попарная среднеквадратичный рассчитывали отклонение среди 20 уточненных структур для участков (TAZ1): Pro347-Ala372, Cys384-Asn434; (STAT2-TAD): Asp790-Met816; (TAZ2) Gln1766-Arg1852; (STAT1-TAD): Asp721-Asn748. | |||||
В общей сложности 200 структур, созданных в CYANA с избыточными ограничениями на двугранные углы (Güntert and Wüthrich, 1991), были дополнительно уточнены с помощью двух циклов ограниченного молекулярно-динамического отжига с использованием программного пакета AMBER 8 (Case et al ). , 2005). Эти структуры первоначально подвергались 2000 шагам минимизации энергии, затем 20 пс имитации отжига в вакууме и еще 20 пс имитации отжига с использованием обобщенной модели растворителя Борна (Tsui and Case, 2000) и, наконец, еще 2000 шагов минимизации энергии.Во время имитации отжига система нагревалась до 1000 К в течение первых 2 пс, затем 4 пс при постоянной температуре и окончательное охлаждение до 0 К в течение оставшихся 14 пс. Силовые константы составляли 30 ккал моль -1 Å -2 для ограничений NOE и 1000 ккал моль -1 рад -2 для ограничений двугранного угла.
20 структур с самой низкой энергией AMBER были проанализированы с использованием PROCHECK-ЯМР (Laskowski и др. , 1996). Для структуры TAZ1-STAT2-TAD 88% двугранных углов основной цепи находились в наиболее предпочтительной области графика Рамачандрана, с 11.0% в дополнительно разрешенных, 0,1% в широко разрешенных и 0,0% в запрещенных регионах. Соответствующие статистические данные для структуры TAZ2-STAT1-TAD: 88,5% наиболее благоприятны, 10,5% дополнительно разрешены, 1,0% широко разрешены и 0,0% запрещены. Рисунки были получены с использованием MOLMOL (Koradi и др. , 1996). Координаты и ограничения депонированы со следующими номерами сбора: RCSB ID 2ka4, 2ka6; BMRB ID 16014, 16015.
Новые продукты: декабрь 2018 г., Motion Design
Двигатель/привод/контроллер
Компания Advanced Micro Controls (Терривилль, Коннектикут) предлагает встроенный шаговый двигатель/привод серии SMD на базе ПЛК 17. система контроллера.Интегрированные решения подходят для нового оборудования, модернизации и быстрой переналадки. Встроенный двигатель SMD17E2 (NEMA 17) сочетает в себе мощность 80 унций. дюймовый (0,56 Н-м) шаговый двигатель с крутящим моментом, приводом постоянного тока и интерфейсами Ethernet/IP и Modbus-TCP в единой компактной конструкции. Встроенный переключатель Ethernet упрощает работу с несколькими осями, а дополнительная обратная связь от энкодера устраняет необходимость в отдельном домашнем концевом выключателе. Двигатели имеют встроенные сетевые подключения EtherNet/IP и Modbus-TCP, встроенный коммутатор Ethernet, технологию SynchroStep™, дополнительный встроенный энкодер (инкрементный или многооборотный абсолютный), версии со степенью защиты IP67, редукторы и совместимые наборы шнуров.Все двигатели программируются с главного контроллера, поэтому отдельное программное обеспечение не требуется. Для получения бесплатной информации посетите здесь испытание и измерение, и автоматизированная сборка. Благодаря обратной связи с замкнутым контуром и передовой технологии управления двигатели создают больший крутящий момент для более высокого ускорения.Двигатели потребляют ток, достаточный для управления нагрузкой, автоматически уменьшая ток двигателя, когда нагрузка не требует крутящего момента. Серия TSM имеет 8 цифровых входов, 4 цифровых выхода и 1 аналоговый вход и поддерживает связь по RS-232, RS-485, CANopen, Ethernet, EtherNet/IP и Modbus. Двигатели серии SSM имеют 3 цифровых входа, 1 цифровой выход и 1 аналоговый вход. Двигатели серии TXM сочетают в себе характеристики двигателей серии TSM с экологическими характеристиками класса IP65 и разъемами M12 для работы во влажной и пыльной среде.Для получения бесплатной информации посетите здесь Интегрированная планарная конструкция обеспечивает ортогональность <100 мкрад и прямолинейность/плоскостность 2 мкм. Трехфазные бесщеточные линейные двигатели приводят в движение обе оси, передавая тяговое усилие (пиковое значение 200 Н) на подвижную платформу напрямую без трения.Безжелезные двигатели обеспечивают плавную работу с регулированием скорости благодаря отсутствию эффекта зубчатого зацепления, вызванного постоянными магнитами. Ускорение 1G достигается при максимальной скорости 0,5 м/сек. Диапазон перемещения по осям XY составляет 100 мм на ось. Другие модели этой серии включают столик V-731 XY с ходом 200 × 200 мм и столик V-741 XY с ходом 300 × 300 мм. Встроенные оптические датчики линейных перемещений обеспечивают разрешение положения до 1 нанометра. Механическая повторяемость положения составляет 0,1 мкм, а минимальное пошаговое движение достигается в 20 нанометров.
За бесплатной информацией обращайтесь сюда эксплуатация в холодную погоду. Семейство включает в себя два размера рамы, способных развивать максимальное усилие от 18 000 до 30 000 фунтов (от 80 до 133 кН). Особенности включают в себя корпус из анодированного алюминия с твердым покрытием типа III, способный выдерживать суровые условия окружающей среды; стандартное противовращение штока тяги; Рейтинг IP67 для защиты от воды, пыли и коррозии; совместимость с серводвигателями и редукторами с габаритами до 215 мм.Приводы доступны с белым эпоксидным покрытием и упорным штоком из нержавеющей стали.
Для получения бесплатной информации посетите здесь
Система поворотных приводов
Компания Oriental Motor (Торранс, Калифорния) представила поворотный привод DGII с рамой 60 мм, оснащенный шаговым двигателем с абсолютным энкодером серии AZ AlphaStep. Поворотный привод используется с четырьмя типами драйверов ввода постоянного тока серии AZ (тип хранимых данных, драйвер импульсного ввода со встроенной связью RS-485, тип импульсного ввода и многоосевой драйвер со связью EtherCAT).Это полная система поворотного привода, которая устраняет необходимость в дополнительных датчиках. Он может работать в приложениях, где требуется шаг и направление, или в приложениях, где используются ПЛК или сенсорные экраны (ЧМИ), без необходимости подключения дополнительных модулей к ПЛК. Система совместима с широким спектром типов главных контроллеров и методов управления.
Для получения бесплатной информации посетите здесьОн работает в диапазоне частот до 4000 Гц с допуском ±5% и упакован в герметичный корпус из никелевого сплава с тремя коаксиальными разъемами 1032. В нем также используется чувствительный элемент UHT-12 без пироэлектрического выхода, уменьшенные пики теплового шума, которые исключают ложные тревоги во время мониторинга, и кристаллы режима сдвига для предотвращения деформации основания и ошибок измерения поперечного сечения.
Для получения бесплатной информации посетите здесьОни особенно подходят для приложений, где требуется подключение к полевой шине, а энкодер должен сохранять информацию об абсолютном положении после отключения питания. A58HE — это 58-мм энкодер с полым отверстием; A58SE — это 58-мм энкодер, доступный либо с зажимным фланцем, либо с синхронным фланцем. Характеристики включают многооборотное разрешение до 43 бит, однооборотное разрешение до 16 бит, диаметр отверстия до 0,375 дюйма или 15 мм, диаметр вала до 0,375 дюйма или 10 мм, диапазон рабочих температур от -40 до 85 °C, и непрерывный цифровой мониторинг положения.
Для бесплатной информации посетите здесь или более жесткие допуски. Зажимы подходят для гибких производственных применений в автомобильной, авиационной и потребительской промышленности. Зажимы доступны в различных размерах.Они имеют закрытый корпус, защищающий внутренний механизм, и были протестированы на отсутствие обслуживания в течение трех миллионов рабочих циклов. Доступны различные конструкции цилиндров с разблокируемыми обратными клапанами, фиксаторами и блокировочными устройствами.
Чтобы получить бесплатную информацию, нажмите здесь 10 кг (22.5 фунтов). Он имеет зазор 300×300 мм вокруг ступени оси крена. Поворотный стол азимутального столика установлен на пластине размером 360 × 360 × 13 мм с ручками и имеет предварительно просверленные доступные монтажные отверстия для интеграции в новые или существующие приложения и для повышения устойчивости. Три оси приводятся в движение двунаправленными шаговыми двигателями. Каждая ось оснащена червячной передачей с малым люфтом и прецизионными V-образными канавками и поперечными роликоподшипниками с разрешением 3,6 угловых секунды, а также повторяемостью и точностью позиционирования до 36 угловых секунд.Скорость перемещения по каждой оси составляет 8 градусов в секунду. Электрические соединения выполняются с помощью трех 9-контактных разъемов DB-9.
Для получения бесплатной информации нажмите здесь
Моментные двигатели
Компания Tecnotion (Нидерланды) предлагает вращающиеся моментные двигатели с магнитной конструкцией, оптимизированной для максимальной плотности потока, и медным наполнением для обеспечения очень высокого отношения крутящего момента к объему. . Двигатели имеют герметизированные обмотки и включают два типа термисторов в качестве стандартных функций.Доступны размеры двигателей от 68 до 160 мм в диаметре. Их можно интегрировать непосредственно в конструкцию машины; открытый внутренний диаметр позволяет пропускать провода и кабели. В комплект поставки входят полностью герметичные статоры, встроенная защита от температуры и измерительные датчики. Они обеспечивают постоянный номинальный крутящий момент в диапазоне от 0,27 Нм до 63,5 Нм и скорость в диапазоне от 190 до 6918 об/мин.
Для получения бесплатной информации нажмите здесь(Aliso Viejo, Калифорния) анонсировала радиационно-стойкую интегральную схему управления двигателем LX7720, которая работает с программируемой пользователем вентильной матрицей (FPGA). Особенности включают в себя четыре полумостовых N-канальных MOSFET-драйвера, четыре плавающих датчика дифференциального тока, драйвер трансформатора резольвера с импульсной модуляцией, три входа датчиков дифференциального резольвера, шесть двухуровневых логических входов и обнаружение неисправностей. Схема также имеет общую дозу ионизации (TID) 100 крад и повышенную чувствительность к низкой дозе излучения 50 крад.Драйверы питания реализуются через внешние полевые транзисторы (FET). Для получения бесплатной информации нажмите здесь Он предназначен для обеспечения ряда нажатий пальцев и/или скользящих/потирающих движений, используемых для проверки контакта и кнопок, а также для проверки износа и долговечности. Машина может тестировать все типы кнопок и переключателей, а также мониторы, экраны, дисплеи и все, что может изнашиваться от человеческих пальцев или других подобных типов трения, нажатия или скольжения.Система также тестирует мембранные переключатели, силиконовые клавиатуры и компьютерные клавиши.
Для получения бесплатной информации нажмите здесь с углом шага 1,8° и удерживающим моментом в диапазоне от 3 до 270 унций-дюйм (от 0,021 до 1,90 Н·м). В сочетании с контроллером комбинация двигателя и энкодера обеспечивает замкнутую обратную связь для всей сервосистемы.Вместе с шаговыми двигателями интегрированы инкрементные энкодеры серии AMT11, которые имеют 22 программируемых разрешения от 48 до 4096 имп/об, нулевое положение с цифровой установкой и формы выходного напряжения КМОП. Разрешения полностью программируются без необходимости снятия энкодера с двигателя.
Для получения бесплатной информации нажмите здесь
Планетарные редукторы
Компания GAM (Mount Prospect, IL) выпустила планетарные редукторы с прямоугольными коническими редукторами серий EPR и PER.Имея входную спирально-коническую шестерню и выходную линейную планетарную шестерню, редукторы доступны с передаточными числами от 3:1 до 1000:1 и в широком диапазоне размеров и конфигураций. Серия EPR имеет пять вариантов выходного вала, включая три различных выходных вала, выход с полым валом и выход с фланцем. PER использует выходные подшипники и используется в приложениях управления движением, где осевые и радиальные нагрузки сведены к минимуму. PER имеет выходной вал в метрической системе или NEMA. Оба доступны с монтажными пластинами двигателя для установки большинства серводвигателей.
Для получения бесплатной информации нажмите здесь
Подробнее от SAE Media Group
Журнал Motion Design Magazine
Читать больше статей из этого номера здесь.
Другие статьи из архива читайте здесь.
ПОДПИСАТЬСЯ
Таблица международных документов — Обжалование нарушений международного права — Международное право.Доктрина, практика и теория. Второе издание — Irwin Books — Книги и журналы
974 МЕЖДУНАРОДНОЕ ПРАВО: ДОКТРИНЫ, ПРАКТИКА И ТЕОРИЯ
Американская конвенция о правах человека (Пакт Сан
Хосе) 1969 231, 604, 605, 606, 608, 677, 771
Арт.1 609, 654
Арт.2 609
ст. 4 605, 632
ст. 5 627, 637
Арт. 6 630
Арт. 7 637
Арт. 8 640
Арт. 10 655
Арт. 11 642
Арт. 12 642
Арт. 13 642
Арт. 14 605, 642
Арт. 15 642
Арт. 16 642
Арт. 21 601
Арт. 23 643
Арт. 24 654, 655
Арт. 32 626
Дополнительный протокол к Американской конвенции
ция о правах человека в районе
Экономические, социальные и культурные права
(Протокол Сан-Сальвадор) 1988 605, 647
Арт. 1 616
ст. 2 616
Арт. 5 617
ст. 17 651
ст. 18 651
Протокол к Американской конвенции по Hu-
Права человека на отмену смертной казни y
1990 632
Англо-германское соглашение 1913 372
Договор об Антарктике 1959 331
Статья IV 331
Ст. VI 331
Конвенция об апартеиде.См. Международный конгресс —
ция о подавлении и наказании
Преступление апартеида
Устав Банжула. См. Африканскую хартию человека.
и права народов
Базельская конвенция о контроле за трансграничными перевозками –
Перемещение опасных отходов и
Их утилизация 1989 750
Приложение 1 750
Арт. 4 750
Арт. 10 731
Пекинская конвенция.См. Конвенцию о поддержке
пресечение незаконных действий в отношении Inter-
национальная гражданская авиация
Конвенция о бомбардировках. См. Международную конвенцию
для подавления террористических актов
Договор о пограничных водах. См. Договор, относящийся к
.Пограничные воды и вопросы Восстание с
Канада (США и Великобритания)
Канадско-израильское соглашение о свободной торговле 1997 г. 48
Соглашение между Канадой и США о качестве воздуха
1991 736, 739
ст. I 737
ст. II 737
Ст. III 7 37
Статья IV 737–38
ст. V 738
Статья VIII 738
Статья IX 739
Статья XIII 739
Договор о пограничных водах между Канадой и США.См. Третьи
Относительно пограничных вод и вопросов
Возникающие в Канаде (США и
Великобритания)
CEDA W. См. Конвенцию о ликвидации всех
Формы дискриминации женщин
КЛРД. См. Международную конвенцию о ликвидации
Все формы расовой дискриминации
Устав Международного военного трибунала
(Нюрнбергская хартия) 1945 910, 911, 912
Ст. 6 91 0 –11
Устав Международного Военного Трибунала за
Дальний Восток 1946 912
Устав Организации американских государств
1948 481, 604–5, 606, 6 08
Устав Организации Объединенных Наций 1945 24, 48, 70,
100, 103, 106, 125, 132, 181, 187, 188, 201,
206, 241, 243, 246, 247, 248, 252, 254, 255,
256, 257, 259, 260–61, 262, 275, 276, 281,
371, 599, 600, 602, 655, 674, 807, 827, 863,
865, 871, 878, 880, 887, 931
ст.